任晓冰
- 作品数：4 被引量：8H指数：3
- 供职机构：新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项农业部重点科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达被引量：3
- 2014年
- 为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。
- 任晓冰窦小龙魏婕苗书魁冉多良马文戈
- 关键词：口蹄疫病毒猪圆环病毒2型枯草芽胞杆菌
- 口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建被引量：3
- 2014年
- 为制备Asia 1型口蹄疫病毒（FMDV）双层结构病毒样颗粒，选择牛病毒性腹泻病毒（BVDV）流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169～270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1～211位氨基酸，两者之间设计柔性肽连接，人工合成 p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列，全基因长990 bp。合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体 p7257-P43连接，构建成表达质粒 p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽胞杆菌 WB800，经筛选、鉴定，获得表达 p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的 LB中培养后，菌体超声破碎可检测到目的蛋白。Western blot 结果显示，该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体，具有良好的反应原性。电镜观察显示，融合蛋白组装为直径约50 nm大小的病毒样颗粒（VLP）。
- 窦小龙任晓冰魏婕苗书魁冉多良马文戈
- 关键词：ASIA1型口蹄疫病毒病毒样颗粒融合蛋白枯草芽胞杆菌
- 绵羊痘病毒新疆株的分离及结构蛋白P32基因序列分析被引量：3
- 2015年
- 【目的】对绵羊痘病毒当地流行毒株的分离和其结构蛋白P32基因的克隆和序列进行分析,明确引起新疆本地绵羊流行痘病的病毒种类,掌握当前流行毒株的变异情况,为绵羊痘的预防控制及将来研制高效安全疫苗提供科学依据。【方法】将两例疑似患有羊痘的绵羊肺脏组织病料接种于MDBK细胞进行病毒分离,细胞病变组织经处理后通过电子显微镜观察分离病毒。以分离病毒基因组DNA为模板,通过PCR扩增绵羊痘病毒结构蛋白P32基因,并对目的基因进行克隆和基因序列和蛋白生物信息学分析。【结果】两例病料组织接种MDBK细胞后均产生明显的细胞病变,电子显微镜观察可见到约200 nm大小、椭圆形有囊膜的典型痘病毒粒子。对两株病毒表面膜结构蛋白P32基因PCR扩增均可获得与预期大小一致的约972 bp片段,氨基酸序列分析表明分离毒株SPV/Miquang/2013和SPV/Kuche/2013病毒P32基因与绵羊痘病毒参考株同源性分别达96.9%-99.4%和97.5%-100%,生物信息学分析发现SPV/Miquang/2013株P32蛋白有两个关键氨基酸位点发生变异,即第78位谷氨酸突变为赖氨酸,第293位异亮氨酸突变为苏氨酸。【结论】从疑似病例中分离到两株病毒,通过电镜观察及P32基因扩增测序,与其他羊痘病毒比对后鉴定分离毒株为绵羊痘病毒,分别命名为SPV/Miquan/2013和SPV/Kuche/2013。SPV/Miquan/2013的P32蛋白同其他绵羊痘病毒的两个氨基酸位点发生明显突变。
- 魏婕薛英苗书魁窦小龙任晓冰马文戈黄炯
- 关键词：绵羊痘病毒
- 口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达
- 口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是威胁畜牧业稳定、健康发展的重要传染病之一，主要感染偶蹄动物，如猪、牛、羊、骆驼、羚羊、鹿等。FMD传播速度快，在短时间内形成大范围的流行，给相关国家（地区）...
- 任晓冰
- 关键词：O型口蹄疫病毒枯草芽孢杆菌防控策略免疫预防
- 文献传递
