亓振国
- 作品数：6 被引量：9H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 分子伴侣表达载体构建及TEV蛋白酶突变体的功能分析
- 外源蛋白在大肠杆菌中重组表达时，常常会错误折叠或形成无功能的包涵体。有多种方法能用于改善外源蛋白的重组表达，最常用方法是与分子伴侣共表达或融合表达，但是后者需要高效的蛋白水解酶切除融合表达的分子伴侣。本研究，构建了含有多...
- 亓振国
- 关键词：分子伴侣定点突变大肠杆菌
- 玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶同功酶生物信息学分析、基因克隆和原核表达被引量：1
- 2010年
- 尿卟啉原Ⅲ脱羧酶是生物卟啉类化合物分支合成的关键酶。从GenBank中搜寻到4种玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶:Les22、UROD1、UROD2和截短UROD,氨基酸序列比对显示N端的同源性较差;玉米les22基因比urod1基因在开放阅读框的上游少3个碱基,导致阅读框移码。植物除玉米外存在高度同源的UROD1和UROD2,具有结构完整性。本文以玉米幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR克隆了玉米les22和urod2基因,并对突变位点进行校正,同时通过定点突变获得urod1基因,它们都编码去除叶绿体导肽的尿卟啉原Ⅲ脱羧酶。再分别将les22、urod2和urod1基因插入大肠杆菌的不同表达载体,转化表达菌株BL21(DE3),16℃诱导表达18h,SDS-PAGE分析显示,Les22的N端含有组氨酸标签或SUMO蛋白,重组蛋白表达为包涵体,UROD2的N端含有组氨酸标签或SUMO、TRX、GST或MBP蛋白,未检测到目的蛋白在上清液的特异表达,而UROD1和MBP融合为可溶性表达,表明玉米UROD的N端氨基酸残基可能参与蛋白在大肠杆菌的折叠。这为研究玉米UROD的种类和功能奠定基础。
- 汪苗方美姑亓振国张宽亮程备久范军
- 关键词：玉米基因克隆原核表达生物信息学分析
- 重组玉米f型和m型硫氧还蛋白的功能确定及其靶向蛋白的捕获被引量：1
- 2010年
- RT-PCR从玉米幼叶总RNA中克隆f型和m型硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)的编码基因,分别将两种类型Trx活性中心的第二个保守Cys残基定点突变成Ser残基和Ala残基。在大肠杆菌分别重组表达和纯化了含组氨酸标签的Trx及其突变体蛋白,SDS-PAGE显示纯化的蛋白显示一条主带,蛋白分子量分别估计为f型Trx为18kDa,m型Trx为14kDa;纯化的含有SUMO标签融合Trx,用SUMO专一性SUMO水解酶Ulp除去SUMO,等点聚焦电泳显示m型和f型Trx的等电点分别为4.6和5.9。m型Trx比f型Trx有更强的还原胰岛素能力,而突变体蛋白几乎没有还原能力。用Cys残基专一性标记化合物AMS标记Trx,显示野生型Trx有氧化还原态,而突变体蛋白仅有还原态。SDS-PAGE电泳显示固定化的f型Trx突变体比m型Trx突变体捕获的玉米幼叶靶蛋白更具有多样性。
- 冯爱花张国明亓振国范军
- 关键词：玉米定点突变功能分析
- TEV蛋白酶突变体及编码基因及其应用
- 本发明涉及一种TEV蛋白酶突变体，与原始TEV蛋白酶相比，第17位由丝氨酸(Ser)取代苏氨酸(Thr)，第56位由缬氨酸(Val)取代亮氨酸(Leu)，第68位由天冬氨酸(Asp)取代天冬酰胺(Asn)，第77位由缬氨...
- 范军亓振国
- 文献传递
- TEV蛋白酶突变体及编码基因及其应用
- 本发明涉及一种TEV蛋白酶突变体，与原始TEV蛋白酶相比，第17位由丝氨酸(Ser)取代苏氨酸(Thr)，第56位由缬氨酸(Val)取代亮氨酸(Leu)，第68位由天冬氨酸(Asp)取代天冬酰胺(Asn)，第77位由缬氨...
- 范军亓振国
- 文献传递
