严磊
- 作品数：14 被引量：66H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目重庆市高等教育教学改革研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反向斑点杂交检测泰泽病原体被引量：3
- 2014年
- 目的建立一种简洁稳定、特异灵敏的检测泰泽病原体(Tyzzer’s organism)的反向斑点杂交方法(reverse dot blot,RDB)。方法根据泰泽病原体16S rDNA保守基因组序列设计引物和特异性探针,上游引物用生物素标记,进行PCR扩增,建立反向斑点杂交方法,用此法进行了特异性和灵敏度实验,同时,用RDB、ELISA和IFA对41只小鼠、38只大鼠进行了检测。结果 RDB特异性强,最低检测限为4.5 ng/μL。对79例实验动物的检测中,与ELISA检测结果一致性为100%,阳性率是7.59%(6/79);与IFA一致性为92.4%(73/79),IFA阳性率是0%。结论建立了PCR扩增与分子杂交相结合的准确、灵敏、特异的泰泽病原体反向斑点杂交检测方法。
- 赵婷婷严磊魏立雯韦莉王会娟赖国旗谭毅
- 关键词：反向斑点杂交实验动物
- Ⅰ型大麻受体真核表达体系构建及其在HEK293细胞中的表达
- 目的 构建人Ⅰ型大麻受体(CB1)基因GV230真核表达质粒,并检测hCB1基因在HEK293细胞中的表达。方法 利用人脑皮质细胞的总RNA为模板,RT-PCR获得cDNA,通过酶切、连接及测序鉴定正确后,再将目的片段插...
- 龙明赖国旗封玉玲苗加伟严磊李晶
- 关键词：基因克隆真核表达
- 人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡被引量：3
- 2015年
- 目的构建人2型大麻素受体(h CB2R)基因真核表达载体,探讨h CB2R在细胞中的表达、定位以及h CB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与h CB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99%;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡。结论上调Caski细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。
- 严磊李晶赵婷婷王会娟赖国旗
- 关键词：HEK293细胞宫颈癌细胞
- 大麻素对HPV感染引起的宫颈癌的作用机制及HBV慢性感染的小鼠模型的建立
- 研究背景与目的: 病毒（virus)由一个核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质（Protein）构成或仅由蛋白质构成。一般按遗传物质的不同可将病毒分为DNA病毒、RNA病毒和蛋白质病毒，其中 DNA病毒只能感染一种动物（...
- 严磊
- 关键词：宫颈癌大麻素HBV慢性感染动物模型
- 大鼠CB1基因真核表达载体的构建及其对CaSki细胞凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 目的构建大鼠CB1(r CB1)基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与p CDNA 3.1(+)质粒,构建pc DNA3.1(+)-r CB1。脂质体法将其转染到HEK293和Ca Ski细胞,Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测r CB1的表达及定位,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot与实时荧光定量PCR检测r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段,测序结果和r CB1基因序列(NM_012784.4)一致。转染HEK293细胞后,r CB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染Ca Ski细胞后,r CB1使细胞凋亡率增加(P<0.05);r CB1基因上调Bax、Bad的表达,同时抑制Bcl-2的表达,与空白组比较,其差异具有显著性(P<0.05)。结论成功构建了pc DNA3.1(+)-r CB1真核表达载体,r CB1表达于细胞膜和细胞质,r CB1可以明显促进宫颈癌Ca Ski细胞凋亡,其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。
- 严磊李晶赵婷婷王会娟王蕾赖国旗
- 关键词：HEK293细胞CASKI细胞细胞凋亡
- 金匮肾气丸温补肾阳药理作用的实验研究被引量：50
- 2015年
- 目的以下丘脑-垂体-性腺轴为基础,探究金匮肾气丸对肾阳虚大鼠的药理作用,探讨其温补肾阳的作用机制。方法用氢化可的松建立肾阳虚模型大鼠,60只,随机分为6组,造模后连续灌喂给药30 d;分别于给药第15天、第30天进行强迫负重游泳实验;第30天,眼球取血,放射免疫分析法检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)的水平;采用RT-PCR法检测各组大鼠下丘脑、垂体和靶腺(睾丸)钙调蛋白(Ca M)mRNA的表达。结果与模型组比,金匮肾气丸可明显提高肾阳虚模型大鼠的负重游泳时长(P<0.05),给药20 d后其体能趋于正常;金匮肾气丸可明显降低血清中雌二醇水平及升高睾酮水平(P<0.05);金匮肾气丸可明显降低下丘脑、垂体、睾丸中Ca M RNA的表达(P<0.05)。结论金匮肾气丸具有明显的温补肾阳作用,可通过调节机体下丘脑-垂体-性腺轴中钙调蛋白基因表达,改善肾阳虚大鼠激素水平,逆转肾阳虚状态。
- 付正丰龚明苗家伟岳秀永陈春梅严磊陈华
- 关键词：金匮肾气丸下丘脑-垂体-性腺轴雌二醇睾酮钙调蛋白
- 小鼠仙台病毒LAMP快速检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的:建立一种实验小鼠仙台病毒(Sendai virus,Se V)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法:采用LAMP技术,以小鼠Se V(gi:9627219)F蛋白的基因序列为靶基因,采用Primer Exploer V4软件设计LAMP的6条特异性引物,应用病毒RNA提取试剂盒提取Se V RNA,通过优化LAMP反应体系条件建立小鼠Se V特异性的LAMP检测方法(Se V/LAMP)。同时,对该方法的特异性、稳定性、重复性、灵敏度进行验证,并初步用于临床检测。结果:所建立的Se V/LAMP方法可特异性的检测出Se V RNA,其他常见病原体均为阴性。Se V/LAMP能检测出不同批次同一时间或同一批次不同时间的Se V RNA;Se V/LAMP检测Se V RNA的最低检测含量为0.33 pg,与ELISA检测方法相比较,其灵敏度高(分别为5/30和2/30)。临床检测,Se V的阳性率为27.5%(11/40);全部反应可在1 h内完成。通过添加荧光染料SYBR Green I可直观目测实验结果。结论:建立的LAMP方法,具有特异、准确、灵敏、快速、简便的特点,可用于实验小鼠Se V的快速检测。
- 王会娟王蕾严磊皮广禄王胜谭毅赖国旗
- 关键词：小鼠仙台病毒环介导等温扩增
- 利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型
- 2015年
- 目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。
- 严磊赵婷婷王会娟李小松黄爱龙谭毅赖国旗
- 关键词：乙型肝炎病毒小鼠模型
- 基于SNaPshot技术的小鼠肝炎病毒分型检测方法及试剂盒
- 本发明属于分子生物学领域，涉及一种基于SNaPshot技术的小鼠肝炎病毒分型检测方法及试剂盒。所述的方法包括PCR扩增、PCR产物纯化、单碱基延伸的步骤；所述的试剂盒包括PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和单碱基延伸反应...
- 赖国旗谭毅潘永全何明忠赵婷婷严磊
- 文献传递
- 大鼠CB1基因真核表达载体的构建及初步鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的:构建大鼠Ⅰ型大麻素受体(CB1)真核基因表达载体,并检测其在细胞中的表达情况。方法:从大鼠海马组织中提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出CB1基因片段,产物连接到p MD18-T载体上。阳性实验筛选出阳性克隆,经Eco RⅠ、Bam HⅠ双酶切及测序鉴定后,将其连接到载体pc DNA 3.1(+)中,构建质粒载体pc DNA3.1(+)-CB1,脂质体转染原代人胚肾293细胞(HEK293细胞)。用Western blot实验鉴定细胞中CB1蛋白的表达,用免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法检测其在细胞中表达的部位。结果:采用RT-PCR成功获得大鼠CB1基因,PCR扩增得到1 500 bp左右的CB1基因片段,双酶切鉴定及DNA测序证实质粒载体pc DNA3.1(+)-CB1构建成功。Western blot实验、免疫荧光细胞染色联合激光扫描共聚焦法证实载体pc DNA3.1(+)-CB1能在HEK293细胞中表达,且表达产物主要分布在细胞膜表面和细胞质中。结论:构建的pc DNA3.1(+)-CB1表达载体能成功转入真核HEK293细胞,并在细胞膜表面和细胞质中表达CB1蛋白。
- 刘佳李晶严磊赵婷婷王慧娟赖国旗龙明
- 关键词：质粒载体
