- 需肌醇酶-1-c-Jun氨基末端激酶通路在周期性应力介导的成肌细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 观察在周期性应力介导成肌细胞凋亡中内质网应激需肌醇酶-1（IRE-1）-c-jun氨基端激酶（JNK）信号通路的作用.方法 以大鼠L6成肌细胞为实验对象,构建体外培养-力学刺激模型.应用应力加载装置分别加1、2、6、12、24 h的周期性张应力（拉伸变形率为15％,频率为10次循环/分）,对照组不加力（0 h）.Hochest 33258染色、膜联蛋白V（Annexin V）-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙锭（PI）流式细胞术分别检测凋亡细胞的数目及凋亡率;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测内质网应激相关因子C/EBP同源蛋白（CHOP）、凋亡信号调节激酶-1（ASK-1）、肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）和JNK mRNA的表达变化;加入IRE-1特异性抑制剂STF-083010,检测ASK-1、TRAF2和JNK mRNA的表达变化.结果 随应力加载时间的延长,凋亡细胞的数目、凋亡率呈一致上升趋势,且在24h达峰值[（14.34±0.77）个];CHOP、ASK-1、TRAF2mRNA表达量随着应力加载时间的延长逐渐上升,并在24 h达最高值,分别为4.19±1.76、3.46±0.84、3.78±1.38（P ＜0.05）,JNK mRNA的表达量在0～2h逐渐上升后逐渐下降,随后又逐渐上升在24 h达最高值（3.04±0.79,P＜0.05）;加入大鼠IRE-1特异性抑制剂STF-083010后,TRAF2、ASK-1表达量均明显减少（P＜0.05）.结论 周期性张应力可诱导成肌细胞的凋亡,凋亡率随着应力加载时间的延长而升高.CHOP、TRAF2、ASK-1、JNK mRNA的表达量升高,提示内质网相关的凋亡途径参与了应力介导的成肌细胞的凋亡.加入IRE-1抑制剂后,TRAF2、ASK-1、JNK mRNA表达量均明显降低,提示IRE-1-JNK通路参与了应力介导的成肌细胞凋亡.
- 夏晨蕾丁弦孙文娜贺苗王芳姜文心张彩霞张强刘文张月阎潇姚如永袁晓
- 关键词：C-JUN氨基端激酶周期性张应力脱噬作用
- 周期性张应力刺激下成肌细胞钙网蛋白的表达及变化被引量：1
- 2014年
- 目的:检测成肌细胞钙网蛋白(CRT)在循环拉伸应力刺激下的表达变化。方法:体外构建面颌部成肌细胞力学刺激模型。加力组以0.5赫兹的加载频率和10%细胞拉伸变形幅度对细胞进行加力培养1 h,6 h,12 h,24 h,运用实时荧光定量PCR技术跟Western Blot技术分别检测在周期性张应力作用下成肌细胞CRT在基因水平及蛋白水平的表达变化。结果:当对细胞加力6 h后,CRT mRNA及蛋白表达量开始增多,加力12 h后CRT mRNA及蛋白表达量到达最多(P<0.01),加力0h组与加力12 h组之间差异有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:持续的周期性张应力刺激下CRT mRNA及蛋白表达增加。
- 李建平王洪玲高玉丽丁弦夏晨蕾贾萍萍张强王爽玉阎潇刘文张月姚如永袁晓
- 关键词：钙网蛋白细胞凋亡功能矫形成肌细胞
- 成肌细胞体外培养-力学刺激模型与周期性张应力的影响被引量：3
- 2014年
- 背景:内质网应激参与多种疾病的发生发展过程,如动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨海默病,GRP78是内质网应激的标志蛋白,GRP78的表达水平反映内质网应激的程度。目的:研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞GRP78表达的影响,以明确周期性张应力与内质网应激的关系。方法:在成功构建L6大鼠成肌细胞体外培养力学刺激模型的基础上,采用RT-PCR和Western blot法分析周期性张应力对GRP78 mRNA和蛋白表达的影响。加力组分别给予1,6,12,24 h的力学刺激,加载频率为10 cycles/min,拉伸变形幅度为15%。对照组与实验组在同时种板,不给予力刺激。结果与结论:GRP78 mRNA随着加力时间的延长呈一致上升趋势,与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05);GRP78蛋白在加力1 h后,蛋白表达量开始升高,加力6 h后蛋白表达量显著升高,到24 h达到峰值,与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05)。由以上结果得出,在一定时间范围内,周期性张应力可引起内质网应激,并且随着时间的延长逐渐增强;持续的应力刺激,可引起严重的内质网应激导致成肌细胞凋亡。
- 张强王洪玲丁弦夏晨蕾刘丽娟王爽玉李建平贺苗孙文娜阎潇刘文张月姚如永袁晓
- 关键词：GRP78周期性张应力内质网应激成肌细胞功能矫形国家自然科学基金
- 自噬在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用初探
- 2016年
- 目的:探讨自噬在周期性张应力介导的成肌细胞凋亡中的作用,以明确应力诱导内质网应激引起自噬与凋亡之间的关系。方法:在成功构建L6大鼠体外培养--力学刺激模型的基础上,采用Western Blot法分析周期性张应力对自噬相关蛋白LC3蛋白表达的影响,并通过Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。加力组分别给予1,6,12,24 h的力学刺激(拉伸变形率为15%,频率为10循环/min),3-MA组和Rapamycin组在加力2 h前分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬激活剂雷帕霉素并且加力24 h,0 h组与实验组在同时种板但是不给予力刺激。采用SPSS17.0统计软件对以上数据进行统计分析。结果:成肌细胞中的LC3II/LC3I值随加力时间延长呈上升趋势,24 h达最高(P<0.05);抑制组的细胞凋亡率(18.75±1.06%)相对于0 h组(0.726±0.13%)和加力24 h组(14.84±1.14%)的明显升高(P<0.05);Rapamycin组相对于加力24 h组的细胞凋亡率明显下降(8.88±1.08%vs 14.84±1.14%),但是细胞凋亡率仍然高于0 h组的(8.88±1.08%vs 0.726±0.13%)。结论:在一定时间范围内,周期性张应力可诱导成肌细胞发生自噬,并且自噬活性与作用时间成正比;自噬可以降低应力介导的成肌细胞凋亡的活性。
- 孙文娜贺苗夏晨蕾丁弦张强王爽玉王芳张彩霞姜文心阎潇孙同正余海波袁晓
- 关键词：自噬凋亡周期性张应力内质网应激成肌细胞
- 钙调神经磷酸酶-T细胞核因子信号通路在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-T细胞核因子(NFAT)信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素(CsA)作为对比。采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测成肌细胞凋亡情况,实时聚合酶链式反应检测CaN和NFAT mRNA的表达情况,蛋白质印迹法检测NFAT3的蛋白含量。结果随加力时间的延长,细胞凋亡逐渐增加,CaN亚基CnA、CnB及NFAT3的mRNA表达及NFAT3蛋白含量逐渐升高;加入CsA后,细胞凋亡减少,CnA、NFAT3的mRNA表达及NFAT3的蛋白含量明显减少。结论周期性张应力可以诱导成肌细胞发生凋亡;CaN-NFAT信号通路可能参与了周期性张应力诱导的成肌细胞凋亡。
- 丁弦夏晨蕾贺苗孙文娜王芳姜文心张彩霞王爽玉张强姚如永袁晓
- 关键词：成肌细胞细胞凋亡钙调神经磷酸酶周期性张应力
- 周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导
- 2014年
- 背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。方法:以大鼠L6成肌细胞为实验对象,在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,通过多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞持续施加1,6,12,24 h的周期性张应力,不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况;运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。结果与结论:倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好,细胞无变性并且脱落率极低,说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,随着加力时间的延长,半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加,而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。
- 王爽玉王洪玲夏晨蕾丁弦孙仙蕊张强李建平阎潇刘文张月姚如永袁晓
- 关键词：周期性张应力成肌细胞线粒体通路国家自然科学基金CASPASE-9
