丁宇
- 作品数：35 被引量：61H指数：6
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 重组人神经肽Y受体Y2融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究被引量：1
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY2受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y2受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y2重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y2融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y2受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y2在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y2受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。
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- 关键词：融合蛋白包涵体纯化生物信息学
- 与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y2基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y2（NPY2R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY2R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY2R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1100bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY2R基因，且所克隆的基因共编码381个氨基酸，分子量为4．2kD，与GeneBank中NPY2R基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY2R基因与GeneBank中NPY2R序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY2R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。
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- 关键词：肥胖基因克隆DNA序列分析
- 神经肽Y及其受体的生物信息学和医学生理学的研究被引量：3
- 2010年
- 神经肽Y(NPY)作为一种具有高度生物活性的神经递质及调节肽能与其G蛋白偶联受体家族(Y1R、Y2R、Y3R、Y4R、Y5R、Y6R)进行特异性结合,且NPY受体作为NPY作用的特定靶点在特定条件下均能被完整的NPY分子激活并通过细胞信号传导广泛参与机体生理功能的调节,使之在临床老年相关性疾病发生和发展过程中发挥重要的调控作用。而NPY及其受体的特异性结合和有效调控之所以能对机体多种生理作用及代谢功能发挥重要影响,与它们各自的生物信息学特性(包括理化性、疏水性、跨膜性、信号肽、二级结构、三级结构等)密切相关。因此,本文从生物信息学及医学生理学两个角度对NPY及其受体进行综述,为NPY及其受体今后在老年医学应用和研究中奠定理论基础。
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- 关键词：神经肽Y受体生物信息学生理学老年医学
- 不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学的影响被引量：7
- 2011年
- 目的探讨不同实验条件下不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学变化的影响。方法采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞的培养,并用磺基罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）酶标仪法（A490 nm波长）测量各孔的吸光值（OD值）并转化为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线。同时,分别采用HE染色法、吖啶橙荧光染色进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果小鼠成纤维细胞L929细胞系分别在不同浓度的血清中培养2、4、6、8 d,其表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。将该细胞系处于相同培养时间和不同血清浓度（0%、20%、40%、60%、80%、100%）时,在20%和40%血清浓度组中,成纤维细胞的生长基本表现为OD值呈现快速增加趋势、且对细胞生长促进作用较强;而血清浓度为0%和100%时对小鼠成纤维细胞L929细胞生长表现出明显抑制作用及OD值呈逐渐减小的趋势。当该细胞系处于不同培养时间、且相同血清浓度时,除0%组OD值呈现减弱趋势,其他浓度组随时间的延长OD值呈增加趋势,在4 d之内OD值增长较快,4~6 d增长趋势减弱,6~8 d增长趋势回升,尤其是100%组。在这种实验条件下,小鼠成纤维细胞L929细胞的形态学也发生了相应改变。结论不同血清浓度及不同培养时间等体外培养环境对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响,提示利用血清进行体外细胞培养时应充分考虑所添加血清的浓度以及细胞培养的时间。
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- 关键词：血清浓度细胞生长曲线细胞形态学
- 重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达融合蛋白，并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定，表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔，获得抗血清，Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白，用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体，Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体，为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。
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- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 与人体肥胖相关的神经肽Y基因克隆及序列分析被引量：5
- 2009年
- 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y（NPY）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法根据GeneBank中收录的NPY基因序列，设计该基因上下游序列，经过PCR反应合成NPY的cDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个100bp左右的DNA片段，与载体重组后和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY基因。且所克隆的基因共编码36个氨基酸，分子量为4．2kD，与GeneBank中NPY基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY基因与Genebank中NPY序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。
- 董萍丁克祥杨永鹏郑永晨朱晓亮单志新韩晋云丁宇
- 关键词：肥胖基因克隆DNA序列分析
- 自体血清（血浆）疗法在整形外科和皮肤科诊疗及微创美容医疗和护理中的应用被引量：1
- 2011年
- 自体血清（血浆）因能为多种细胞增殖和生长、组织修复和再生等提供较为丰富而完整的营养成分、生物活性物质和细胞生长因子,并能改善和调节细胞生长和代谢的微环境,提供某些必要的促细胞接触和伸展的生物活性因子,以促进和加快细胞迁移、聚集和贴附等独特的生物学特点,加上自体血清（血浆）来源于自体,具有良好的同一性和相融性,且因其毒副作用小、取材方便、应用安全等特点,使其近年来在临床某些疾病治疗和护理中的应用越来越广泛.为了进一步推动和拓展自体血清（血浆）在临床治疗和护理领域中的应用,并为未来设计和创建自体血清（血浆）在临床新的治疗方法和新的护理模式提供参考依据,本文对自体血清（血浆）在整形外科、皮肤科及微创美容和皮肤抗衰老医学中的临床治疗和护理领域的应用进行综述.
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- 关键词：微创美容皮肤病诊疗整形外科
- 与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5（NPYSR）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPYSR基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1300bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因，且所克隆的基因共编码445个氨基酸，分子量为50KD，与GeneBank中NPYSR基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPYSR基因与GeneBank中NPYSR序列完全一致，通过对其相关生物学信息的明确分析，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPYSR与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。
- 丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华
- 关键词：肥胖基因克隆DNA序列分析
- 不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响被引量：6
- 2010年
- 目的:通过探讨不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响,了解它们对成纤维细胞体外生存和生长的情况。方法:采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞,并采用磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)酶标仪法(A490nm波长下)测量各孔的吸光值(A值)并转换为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线;同时,分别采用HE(苏木精-伊红)染色法、吖啶橙荧光染色和Hoechst33342荧光染色法进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果:小鼠成纤维细胞l929细胞系不同浓度的血清分别在3种不同的介质(RPMI1640培养基、0.9%生理盐水和5%葡萄糖生理盐水)中表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。其中,在不同血清浓度(0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%)的同一介质中,血清浓度为0%和100%浓度组的小鼠成纤维细胞L929细胞生长明昆抑制及吸发光度(A)值呈逐步减少的趋势,而除此之外的其它血清浓度组对小鼠成纤维细胞L929细胞的影响,基本表现为随着血清浓度的升高,吸光度(A)值呈逐步增加及促进细胞生长的趋势。而某些相同血清浓度在不同介质中对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及形态学的有利影响,则基本表现为RPMI1640培养基作为介质的细胞培养效果优于0.9%生理盐水,而0.9%生理盐水作为介质的细胞培养效果又优于5%葡萄糖生理盐水。结论:不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响。提示在进行体外细胞培养时应充分考虑细胞培养介质及所添加血清的浓度。
- 杨永鹏董萍丁克祥刘敏尹晴左夏林丁宇丁振华
- 关键词：血清浓度介质
- 活性生物多肽类化合物在皮肤美容与抗衰老化妆品中的应用研究进展被引量：13
- 2014年
- 目的：通过对当前活性生物多肽化合物在皮肤美容抗衰老领域应用研究的介绍，希望能给大家提供一些未来研发更加科学、新颖、实用的多肽类皮肤美容抗衰老化妆品的相关信息和思路。方法：通过对国内外已报道或公布的专利与非专利文献进行系统的查新和检索，重点介绍和阐述了活性生物多肽类化合物在皮肤美容抗衰老领域中的基础和应用研究及其进展。结果：采用系统综述和专题介绍的这部分皮肤抗衰老制剂应用研究的内容，主要包括活性生物多肽在部分皮肤美容抗衰老制剂的研究和应用的现状。结论：活性生物多肽类化合物在皮肤美容抗衰老制剂及其美容化妆品中的应用前景十分广阔，科学和合理应用，将会使之发挥更好的皮肤美容抗衰老生物效应和生理作用。
- 董萍杨永鹏郝林琳左夏林丁宇尹晴罗迎霞朱晓亮梁虹丁克祥
- 关键词：面部美容生物活性多肽
