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婴儿重症肌阵挛癫痫钠通道SCN1A基因启动子区的多点突变: 廖卫平龙跃生林少朋石奕武刘晓蓉于美娟易咏红赵绮华

结合单酶切位点的融合PCR技术对SCN1A基因的定点诱变被引量：1: 2008年; 目的:利用结合单酶切位点的融合PCR技术对癫痫相关基因SCN1A进行定点突变。方法:首先设计两对引物PF1/PR1和PF2/PR2,PF1和PR2均位于突变位点最近的单酶切位点处,而突变位点设计在第一对反向引物(PR1)和第二对正向引物上(PF2)。通过重叠延伸法两次PCR扩增:第一次用PF1/PR1和PF2/PR2分开扩增,以扩增产物作模板,PF1/PR2作引物进行融合PCR,得到的扩增产物即含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pMD18-T载体,经测序筛选阳性克隆。结果:DNA测序表明SCN1A基因所编码的第946位密码子由精氨酸(Arg)突变为组氨酸(His),再通过酶切和连接反应将重组质粒上的突变片段替换SCN1A表达质粒上的对应片段,成功构建了SCN1A突变载体。结论:与现在常用的长距离PCR定点诱导突变相比较,结合单酶切位点的融合PCR定点突变技术具备扩增距离短的优点,大大降低了自发突变的概率,适合于大肠杆菌中易自发突变的较大载体的定点诱变。; 龙跃生蔡阳林赵绮华廖卫平; 关键词：融合PCR 定点诱变 SCN1A 癫痫

临床医学研究生的科研训练被引量：5: 2009年; 科研能力是研究生的一项最重要的素质。加强临床医学研究生的科研训练,有利于提高研究生的科研能力,为国家和社会培养优秀的医疗和科技人才,促进实验室和学科的发展。实践表明:制定和严格执行切实可行的科研训练计划,能减轻临床研究生的学习负担,提高工作和学习效率,达到既定的教学目标。; 龙跃生

与癫痫相关SCN1A基因的启动子及其构建方法和临床应用: 本发明涉及与癫痫相关的SCN1A基因的启动子及其构建方法和临床应用，其特征是：1)基因启动子的核苷酸序列为序列表中SEQ ID №：1的DNA序列；2)由核心启动子及其上游调控区序列和5’非翻译区外显子序列构成，其中，序...; 廖卫平龙跃生赵绮华蔡阳林石奕武易咏红曾扬; 文献传递

解读《国际抗癫痫联盟遗传委员会报告——癫痫的基因检测》被引量：3: 2011年; 随着基础医学尤其是分子生物学在临床医学中的应用，特别是人类基因组计划工程的实施，给人类很多遗传性神经系统疾病的诊断和治疗带来了日新月异的变革。近年来，癫痫的基因检测便是神经科学领域里最重要的进展之一，癫痫的基因检测对临床究竟有多大的意义？其潜在的益处和风险是什么？检测方法有哪些？应该如何使用这些检测方法？癫痫的基因检测效用的评价标准是什么？诸如此类的问题一直都是大家十分关注的热点。国际抗癫痫联盟（ILAE）遗传委员会于2010年在Epilepsia首次发表了《ILAE遗传委员会报告——癫痫的基因检测》这篇纲领性报告，为我们指明了方向。; 秦兵曾涛龙跃生段现来廖卫平; 关键词：国际抗癫痫联盟基因检测遗传性人类基因组计划神经系统疾病

钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果: 2009年; 目的采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达。方法PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况。结果与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mR-NA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1。结论shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达。该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具。; 龙跃生孙卫文赵绮华曾涛廖卫平; 关键词：RNA干扰钠通道

Dravet综合征SCN1A基因3′端非翻译区变异位点的筛查及其功能分析被引量：2: 2017年; 目的对SCN1A基因编码区及启动子区突变阴性的Dravet综合征患者3′端非翻译区变异位点进行筛查及功能分析。方法对在SCN1A基因编码区及启动子区未发现突变的28例Dravet综合征患者扩增SCN1A基因3′端非翻译区并进行直接测序分析，对检测到的突变通过荧光素酶实验、mRNA稳定性检测及RNA电泳迁移阻滞实验进行功能分析。结果在Dravet综合征患者中发现1个新生的SCN1A 3′端非翻译区变异（c.＊20A〉G），功能分析发现这个变异位点增强了NT2细胞质蛋白的结合，降低了荧光素酶报告基因的mRNA的半衰期，从而导致荧光素酶报告基因表达下降30%（t＝8.5，P〈0.01）。结论在Dravet综合征患者中发现1个功能变异，这个变异可能会通过增强胞质蛋白的结合、降低mRNA稳定性，导致SCN1A基因表达下调，引起Dravet综合征的发生。; 曾涛肖旋浩民福利陈树达李泽潘小平周进龙跃生廖卫平; 关键词：DRAVET综合征钠通道

同卵双生的界限型婴儿重症肌阵挛癫痫患者中的钠通道α1基因新突变被引量：2: 2009年; 目的筛查一对同卵双胞胎界限型婴儿重症肌阵挛癫痫（borderland severe myoclonic epilepsy of infancy，SMEB）患儿的钠通道α1（sodium channel α1-subunit，SCN1A）基因并探讨其临床特性。方法总结这对同卵双生子患者的临床特点，应用变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）技术筛查SCN1A基因全部26个外显子，对发现有异常洗脱峰者再进行直接测序。结果这对孪生姐妹患者均具有典型SMEB的临床特点，她们在SCN1A基因第26号外显子被发现有相同的杂合突变（c．5348C〉T），并导致编码的氨基酸改变（A1783E），为国际上首次发现该位点突变。结论临床表型相似的SMEB同卵双胞胎存在相同位点的SCN1A基因突变，证实SMEB与婴儿重症肌阵挛癫痫同样是基因异常引起的疾病，而且基因与临床表型密切相关。; 陈俐石奕武于美娟邓维意刘晓蓉高玫梅常好会龙跃生易咏虹廖卫平; 关键词：肌阵挛性神经组织蛋白质类钠通道高压液相突变

SCNlA突变导致的家族性癫痫伴热性惊厥附加症及嵌合体、突变类型在遗传中的作用: 石奕武苏涛廖卫平于美娟邓维意刘晓蓉高玫梅陈利龙跃生易咏红黎冰梅

癫痫相关基因SCN1A启动子区多态性位点的生物信息学分析被引量：1: 2009年; SCN1A是多种神经系统疾病的致病基因，该基因的精确表达对于维持神经系统正常功能非常重要．为了认识SCN1A启动子区多态性位点（single nucleotide polymorphisms．SNPs）的保守性及其功能意义，应用生物信息学方法分析了目前已发表位于SCN1A启动子区的11个SNPs，分别命名S1～S11．分析结果表明，S3、S5和S7等位基因频率没有人种差异性．其余SNP等位基因频率均有人种差异性；接近核心启动子的SNPs要比远离核心启动子SNPs的保守程度高．提示靠近核心启动子的SNPs影响SCN1A基因表达的概率可能越大；大部分SNPs祖传等位基因在哺乳动物中是保守的（S3除外）。暗示这些SNPs新生等位基因有可能在人类进化过程起到一定的作用：启动子分析软件预测发现。含S2、S4、S8及S9等4个SNPs不同等位基因的同一序列分别存在不同转录因子结合元件．而含S1和S11不同等位基因的同一序列都只能预测到含其中一个等位基因的序列存在转录因子结合元件．这些差异可能是SNPs影响SCN1A表达的重要原因之一．这些分析将为进一步研究．SCN1A启动子区SNPs与神经系统疾病的相互关系打下基础．; 龙跃生石奕武林绍鹏曾涛赵绮华廖卫平; 关键词：单核苷酸多态性启动子

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