黄华欣
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 四株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及基因型分析被引量：3
- 2013年
- 为掌握安徽省鸽Ⅰ型副黏病毒病的流行特点及其与鸡新城疫各分离株的相互关系,对从安徽省不同鸽场鸽病料中分离的4株病毒(AH-2012、AH-2012-1、AH-2012-2、AH-2012-3),采用RT-PCR、血清学试验及基因序列测定等方法进行鉴定。结果显示,这些分离株均具有血凝性,并能使NDV标准阳性血清特异性抑制;PCR扩增出F基因特异性目的片段,其核苷酸序列与GenBank上登录的鸽Ⅰ型副黏病毒的同源性较高,相似性达94.8%;与传统的鸡源新城疫病毒标准株LaSota、F48E9的同源性较低,相似性约为80%;F基因编码蛋白的第112～117位氨基酸序列为R-R-Q-K-R-F。结果表明,这些毒株为鸽Ⅰ型副黏病毒,属于基因Ⅵ型。
- 隋修锟李刚李铁吴迪程朝飞陶春爱黄华欣
- 关键词：F基因
- 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株M蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备和初步应用
- 小反刍兽疫（PPR）是一种主要感染小反刍动物的急性、烈性传染病，具有高发病率和高死亡率特点。本研究通过RT-PCR方法获得PPRV M基因，分别与原核表达载体pET-32a（+）和pGEX-6P-1连接，构建重组质粒pE...
- 黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫M蛋白单克隆抗体间接ELISA竞争ELISA
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫N蛋白间接酶联免疫吸附试验
- 小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA方法的建立
- 目的：为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体。方法：对具有PPRV特异性的N蛋白第1V区域进行扩增，并克隆至原核表达载体pET-32a(+)载体中，用于PPRV N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组...
- 邱文英李刚田康乐黄华欣
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达重组蛋白疫苗免疫
- 检测小反刍兽疫病毒的引物和探针及试剂盒
- 本发明通过对小反刍兽疫N基因测序和比对，提供了用于检测小反刍兽疫的遗传标记物、实时荧光定量PCR引物和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4...
- 史利军金红岩王勇程超飞黄华欣李刚朱鸿飞
- 小反刍兽疫病毒M蛋白主要抗原表位区的原核表达及鉴定被引量：8
- 2013年
- 为了制备小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性单抗及临床抗体水平监测,通过在线软件分析PPRVNigeria75/1株M蛋白可能包含的B细胞线性表位位点,结合可溶性预测,设计1对引物,扩增303bp目的基因。将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用IPTG诱导表达,纯化,SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定结果显示,所构建的重组蛋白以可溶性形式高效表达并具有良好的反应原性,为制备特异性单抗及包被抗原用于PPRV抗体水平监测奠定了一定基础。
- 黄华欣李刚史利军赵占中王勇金红岩李文超陶春爱隋修锟
- 关键词：小反刍兽疫M蛋白抗原表位原核表达
- 小反刍兽疫病毒M基因截短表达及鉴定
- 2012年
- 目的将小反刍兽疫病毒M蛋白基因截短表达后用于特异性单抗制备及临床抗体水平检测。方法:用在线分析软件BepiPred分析小反刍兽疫病毒M蛋白潜在的B细胞线性表位,以本实验室构建的pCR2.1T-PPRV M质粒为模板,扩增三段截短的M基因,纯化后的PCR产物分别与克隆载体pCR2.1T连接,筛选出的阳性重组质粒经双酶切后,分别与表达载体pET-32a(+)及pGEX-6p-1连接,再将鉴定为阳性的重组质粒转化入E.coli BL21(DE3)菌株诱导表达,并用SDS-PAGE及Western blot验证。结果 PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段。对连接克隆载体及表达载体的重组质粒双酶切后,均出现与预期一致的片段,DNA测序表明,插入片段序列与小反刍兽疫Nigeria75/1株M蛋白基因完全一致。重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,证明所构建的重组蛋白均获得高效表达,并均具有良好的反应原性。结论成功表达了小反刍兽疫截短M基因的蛋白,为制备特异性单抗及小反刍兽疫抗体检测奠定了一定基础。
- 黄华欣李刚王勇金红岩陶春爱程朝飞隋修锟
- 关键词：小反刍兽疫病毒M基因
- 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株磷蛋白的表达及磷酸化位点的预测被引量：3
- 2013年
- 为深入研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)P蛋白对病毒复制的影响,以小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株为研究对象,通过RT-PCR法扩增P基因,将扩增出的P基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,成功构建pGEX-6P-1-PPRV-P表达载体,测序鉴定无误后转化至表达宿主菌BL21(DE3)plysS中进行IPTG诱导表达,并通过在线软件预测了P蛋白的磷酸化位点。结果显示,pGEX-6P-1-PPRV-P重组菌在IPTG浓度1.0mmol/L时经37℃诱导4h,目的基因可正确表达,并以可溶性的形式存在。经Western-blot鉴定,目的蛋白可与PPRV Nigeria75/1株病毒小鼠阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有较好的反应原性。经综合预测分析,可能被磷酸化的位点有46个,其中PKC、PKA、CKII/CKI、cdc2可能作用的位点分别为15个、7个、10个、6个,其他激酶作用位点可能为8个。结果表明,P蛋白的克隆表达及磷酸化位点的成功预测为小反刍兽疫病毒的深入研究奠定了基础。
- 金红岩封家旺李文超程朝飞隋修锟黄华欣李刚
- 关键词：小反刍兽疫病毒原核表达磷酸化位点
- 抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BALB/c小鼠3次。取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合后,用pET-32a-RV-N重组蛋白作为筛选抗原,经3次亚克隆筛选后得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株单克隆抗体细胞株。亚类鉴定结果表明,其中1D9、2B6、6B5 3株亚类为IgG1,3C5、5F2的亚类为IgM。间接ELISA方法检测2B6单抗细胞腹水效价可达1∶106。经Protein G亲和层析柱纯化和脱盐后可得到浓度为2.5mg/mL的高纯度的单克隆抗体。其免疫荧光试验结果表明5株单克隆抗体均能特异地与狂犬病病毒结合。结论制备的单抗具有良好的特异性和敏感性,为后期诊断方法的建立奠定了基础。
- 曾妮宫苗苗程朝飞黄华欣郭李平李刚
- 关键词：狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体
- 检测小反刍兽疫病毒的引物和探针及试剂盒
- 本发明通过对小反刍兽疫N基因测序和比对，提供了用于检测小反刍兽疫的遗传标记物、实时荧光定量PCR引物和探针，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4...
- 史利军金红岩王勇程超飞黄华欣李刚朱鸿飞
- 文献传递
