高明英
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技兴渔项目国家重点基础研究发展计划国家农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 黄喉拟水龟转铁蛋白重组表达及抗菌活性分析被引量：5
- 2012年
- 转铁蛋白具有多种生物学功能,不仅参与铁的转运,而且具有抗菌、免疫调节等功能。对黄喉拟水龟转铁蛋白(Mauremys mutica transferrin,MaTf)原核表达、重组蛋白纯化、抗菌活性检测及MaTf在蛋白水平的表达特征进行了分析研究。通过用RT-PCR技术扩增MaTf的编码序列,克隆至载体pET-32 a(+);转化BL21(DE3),构建了其原核表达载体;优化表达条件(30℃,4h,0.8 mmol/L IPTG),使MaTf融合蛋白在BL21中高效表达;采用His Bind柱亲和层析与浓缩的方法纯化目的蛋白,Western blot证实获得纯度较高的MaTf重组蛋白;抑菌试验表明,MaTf重组蛋白对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黏质沙雷氏菌均有明显的抑菌作用;用MaTf重组蛋白制备多克隆抗血清,Western blot免疫印记法分析转铁蛋白在体内的表达特征,结果显示其在肝脏、脾脏、肾脏、心脏4个组织中的表达量为:肝脏>脾脏>肾脏>心脏,与MaTf在RNA水平上的表达特征具有相似性。研究为探索转铁蛋白在黄喉拟水龟非特异性免疫反应中的作用提供了重要信息。
- 高明英朱新平史燕赵建赵密
- 关键词：黄喉拟水龟转铁蛋白抗菌性
- 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆以及表达特征分析
- 高明英朱新平赵密史燕赵建
- 关键词：黄喉拟水龟转铁蛋白
- 黏质沙雷氏菌诱导的黄喉拟水龟SMART cDNA文库构建及相关基因的鉴定被引量：4
- 2011年
- 以致病黏质沙雷氏菌人工感染的黄喉拟水龟肝组织为材料,应用SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术,构建了黄喉拟水龟的全长cDNA文库。首先用SMARTTM PCR cDNA systhesis kit合成全长的双链cDNA,通过琼脂糖凝胶分级分离技术切除小片段的cDNA,将大于500 bp的cDNA连接到pGEM-T载体中,电转化到J M109感受态细胞。在构建好的文库中,经测定,文库约含有1.8×105个重组子,重组效率达90%,插入片段多在0.5～3.0 kb之间。对库中长度约为1 000 bp的80个基因进行了测序,结果显示大部分首次在龟类发现。测序鉴定的基因包括免疫相关基因9个、信号传导基因6个、催化酶类基因8个、糖代谢相关基因2个、转运相关基因1个、结构基因2个。
- 赵密朱新平史燕高明英
- 关键词：黄喉拟水龟黏质沙雷氏菌基因鉴定
- 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的抗菌性分析
- 利用本实验室构建的黄喉拟水龟SMART全长cDNA文库，筛选得到转铁蛋白(Transferrin，Tf)基因全长cDNA序列，Tf基因cDNA全长2437bp，5’UTR(Untranslatedregion，UTR)长...
- 高明英
- 关键词：黄喉拟水龟转铁蛋白原核表达
- 文献传递
- 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆以及表达特征分析
- 转铁蛋白在铁的新陈代谢中起着重要的作用,已有文献报道转铁蛋白参与细菌感染后的免疫反应。本文克隆了黄喉拟水龟Tf基因组DNA全长序列,并对Tf基因的序列特征进行了分析。序列分析表明,黄喉拟水龟Tf是由两个相似结构域构成的单...
- 高明英朱新平赵密史燕赵建
- 关键词：黄喉拟水龟转铁蛋白
- 黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆以及表达特征分析被引量：6
- 2011年
- 转铁蛋白在铁的新陈代谢中起着重要的作用,参与细菌感染后的免疫反应。研究克隆了黄喉拟水龟Tf基因组DNA全长序列,并对Tf基因的序列特征进行了分析。序列分析表明,黄喉拟水龟Tf是由两个相似结构域构成的单一肽链,每个结构域包含两个亚基,它们相互作用形成一个深的、亲水的铁结合位点。其基因组DNA由17个外显子和16个内含子组成,与其他脊椎动物Tf基因结构相似,显示了黄喉拟水龟Tf基因在结构上的保守性。同源性分析表明,黄喉拟水龟的Tf基因与鸟类、爬行类的Tf基因同源性最高,约为75%—97%;与哺乳类Tf基因的同源性约为65%—75%;与爪蟾等两栖类的Tf基因也有一定的同源性。荧光定量PCR结果显示,黄喉拟水龟人工感染粘质沙雷氏菌后,Tf基因在其肝脏、脾脏、肾脏及心脏各组织中的表达量均有上调的趋势,这与其他动物经病原刺激后的表达特征具有相似性。
- 高明英朱新平赵密史燕赵建
- 关键词：黄喉拟水龟转铁蛋白
