高国辉
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 供职机构：温州医学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 大肠杆菌质粒解离后致死基因分布及多态性分析
- 2011年
- 目的通过对来自小同年份大肠杆菌质粒DNA序列进行商通量测序，从质粒基因组水平分析大肠杆菌质粒DNA所携带的解离后致死基因的种类、数量以及多态性。方法收集4年临床分离非重复的320株大肠杆菌。菌株分为两个部分，碱裂解法提取全部质粒DNA，Solexa测序获得大规模的短序列。采用比较基因组学方法分析两个样本所含的解离后致死基因类型及丰度的差异，研究解离后致死基因存在的核苷酸多态位点。结果测序法获得两批数据，E1短序列总数为11077768，叮以定位到参照序列上为5019（0．045％）。E2短序列总数为9377792，可以定位到参照序列上是4952（0．053％）。两个样本中共有9个解离后致死基因型，其中hok基阕丰度最高。5个基因型共发现29个单核苷酸多态性（SNPs）位点，约33％为非同义突变。同一个位点的A、G二核苷酸多态现象常见。结论已知的大肠杆菌解离后致死基因的9个基因型，在温州地区分离的大肠杆菌质粒上均有发现，其中hok基因出现频率最高，共5个基因型存在多态性。
- 高国辉齐云玲孙倩宋智健宋玉龙李劲松王慧利包其郁丁力
- 关键词：大肠杆菌质粒单核苷酸多态性
- Anti-HER2 ScFv-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的初步分析被引量：2
- 2011年
- 目的:构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2)单链抗体,分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能,探讨其应用于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性。方法:将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体基因拼接成融合基因anti-HER2 ScFv-GFP,构建原核表达载体重组子pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,转入大肠杆菌E.coli TOP10诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法鉴定,Ni2+-NTA亲和层析法纯化获得目的融合蛋白。将不同浓度的融合蛋白anti-HER2 ScFv-GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2阴性的MCF7混合,观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布。结果:成功获得长度为1 539 bp的融合基因,原核表达系统pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体,融合蛋白相对分子量大小约60 kDa。HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,细胞有皱缩现象,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光。结论:携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3表面,绿色荧光可以起到报告作用。
- 高国辉黄奇迪王金丹杨水兵杨娟张凤立胡孝渠
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白
- 乌药种子性状产地表型变异研究被引量：15
- 2005年
- 对我国乌药自然分布区14个产地采集的乌药种子进行取样观测,分别测定其种子的长、宽、重,并进行播种试验,观测种子的出苗率;分析了乌药种子形态的产地差异、地理变异规律及种子形态对种子出苗率和苗木生长的影响。分析表明:乌药种子形态存在显著的产地差异,种子的大小存在一定的经向变异,种形指数(宽)与经度呈显著的负相关。种形指数与苗期生长有密切的关系。
- 陈丽华姜景民栾启福高国辉
- 关键词：种子性状种子形态表型变异种子出苗率苗期生长播种试验
- 基因工程学实验教学的体会被引量：3
- 2006年
- 基因工程学实验教学具有自身的特点。通过带教几届学生,笔者认为在教学活动中,理论知识要有一定的系统性,在操作过程中要狠抓实验技能训练,对时间安排上应具有合理性,培养学生创造性思维,并对学生进行实验的安全性教育,使学生具备扎实的实验基本技能,为将来进入科研领域和走向工作岗位奠定基础。
- 高国辉
- 关键词：实验教学
- 生物技术专业毕业生实习带教的几点思考
- 2011年
- 毕业实习是十分重要的教学环节之一。本文从生物技术专业的特点出发,对本科毕业生在实习过程中涉及的合作精神、毕业论文的设计、学生实践动手能力的培养等多个方面进行了阐述,对如何提高学生的团队协作精神、调动学生的学习自主性,锻炼学生的实践能力,培养学生的创新精神等措施进行了探讨。
- 高国辉
- 关键词：毕业论文
