高冕
- 作品数：3 被引量：25H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 高密度培养大肠杆菌YK537/pSBHL-11生产重组人细胞白介素被引量：13
- 1999年
- 在 Ｂ． Ｂｒａｕｎ Ｅ Ｓ１０ 型１５ Ｌ 和 Ｎ Ｂ Ｓ Ｂｉｏ Ｆｌｏ ３０００ 型５ Ｌ 发酵罐中，利用补料分批培养技术高密度表达培养含重组质粒ｐ Ｓ Ｂ Ｈ Ｌ１１ 的大肠杆菌 Ｙ Ｋ５３７ ，生产重组人白细胞介素３（ Ｉ Ｌ３） ，发现在发酵过程中，限制性流加甘油，控制溶解氧在３０ ％ ～４０ ％ 左右、３０ ℃生长１１ｈ ，４２ ℃诱导培养４ｈ ，能将发酵液中最终菌体密度从 Ｏ Ｄ１６６００ 提高到 Ｏ Ｄ５３６００（ 相当于每升发酵液含１０６ 克湿菌体） ，并且保持了白细胞介素３ 的表达量，占菌体总蛋白的３０ ％ 左右，含量超过３３ ％ ｇ／ Ｌ，使 Ｉ Ｌ３ 包涵体产量从湿重２２ｇ／ Ｌ 提高到８５ ｇ／ Ｌ，纯化步骤比较简单，超声破菌后经两次洗涤纯度就达到７０ ％ 以上。
- 李民杨立宏任红玉高冕陈常庆
- 关键词：白细胞介素-3分批补料
- 人白细胞介素-3基因翻译起始区的改造提高其在大肠杆菌中的表达水平被引量：8
- 1995年
- 为了提高人白细胞介素-3(hIL-3)在大肠杆菌中的表达,在计算机辅助下,设计合成了PCR突变引物,用于改造起始密码AUG上下游序列,并在不改变5＇端氨基酸编码的前提下,尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hIL-3cDNA和翻译起始区置于P_L启动子之下,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导后,获得表达产物,提高表达水平近一倍,表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经Western blot验证,经PVDF膜转移后进行N端顺序分析,证明前15个氨基酸正确,产物经包涵体纯化后,纯度提高至80％以上,初步复性后能明显促进hIL-3依赖细胞的生长。
- 杨立宏陈常庆高冕苏成芝
- 关键词：基因大肠杆菌基因工程
