韩坤煌
- 作品数：31 被引量：64H指数：5
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- 相关领域：农业科学医药卫生经济管理生物学更多>>
- 基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究被引量：3
- 2015年
- 在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与体细胞分离,形成所谓的原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)。母源性基因Dead end(dnd)在胚胎发育中特异地表达于原始生殖细胞,编码一种进化上保守的RNA结合蛋白,对生殖细胞发育具有重要作用。本研究通过PCR获得大黄鱼dnd基因(Lcdnd)的部分c DNA序列,结合实时定量PCR、整胚原位杂交等技术,研究Lcdnd在各组织和胚胎发育中的表达。实时定量PCR结果显示:dnd在性腺中特异表达,且其在卵巢中的表达量高于精巢;检测的各期胚胎中都有dnd的表达,随着胚胎发育其表达量呈下降趋势。整胚原位杂交结果显示:Lcdnd在早期卵裂阶段主要分布于分裂沟,到囊胚期至原肠早期则开始定位于细胞内,原肠早期时定位在胚环中的中内胚层,且阳性信号增多,暗示此时原始生殖细胞的形成。接着原始生殖细胞沿胚环向胚体形成处(胚盾)迁移;随着胚胎的发育,发现胚体两侧的阳性信号增多;到体节发生期,阳性信号细胞分布于胚体两侧的侧板中胚层,随着体节的发生这些细胞沿背腹轴向腹部运动;发育到孵出期时,到达了发育中的原始生殖嵴。本研究首次使用dnd作为较为可靠的大黄鱼生殖细胞标记,揭示了大黄鱼原始生殖细胞的起源与迁移,为大黄鱼生殖细胞发生发育及养殖大黄鱼的育性控制研究奠定一定的基础。
- 陈仕海蔡明夷张子平韩坤煌姜永华张伟军王艺磊
- 关键词：大黄鱼原始生殖细胞
- 大黄鱼DNA甲基化的分子标记及其在育种中的应用
- 本发明公开了一种大黄鱼DNA甲基化的分子标记、该分子标记的筛选方法和该分子标记在大黄鱼育种中的应用；大黄鱼DNA甲基化的分子标记包括分子标记fgf11、分子标记fgfrs2、分子标记egflp7和分子标记pdgfrα。本...
- 韩坤煌王艺磊张子平刘伟阮少江黄伟卿李菲艳陈欣欣
- 文献传递
- 基于转录组、基因组重测序和甲基化谱式的大黄鱼生长性状解析及其关联标记的开发
- 鱼类的生长性状与养殖经济效益息息相关,在养殖生产和基础研究中受到高度关注。与哺乳动物一样,鱼类的生长受到“下丘脑—脑垂体—肝脏”这一生长轴的调控,生长轴相关基因的表达受到季节、光周期、温度、营养和盐度等因素的调节。因此分...
- 韩坤煌
- 关键词：大黄鱼生长性状转录组DNA甲基化
- 拟穴青蟹Sp-cycH基因的分子克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 细胞周期蛋白H(cyclin H,cycH)是细胞周期蛋白依赖性激酶活化激酶(CAK)的重要组成元件,在细胞分裂过程中扮演着重要的作用.本研究从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)性腺EST文库中筛选出cyc H基因片段,继而克隆出其全长cDNA(Sp-cyc H)序列,并利用qRT-PCR技术检测其在不同组织和性腺不同发育阶段中的差异表达.结果显示,Sp-cycH全长c DNA序列为1 523bp,其中5'UTR为152bp,3'UTR为372bp,ORF为999bp,可编码332个氨基酸,该序列包含典型的cyclin box序列,进一步比对结果显示其属于cyclinH家族.不同组织的qRT-PCR结果显示,Sp-cyc H在卵巢中的表达量最高,与其他组织具有极显著差异(P<0.01);性腺不同发育阶段的表达结果显示,Sp-cycH在O5期卵巢中的表达量显著高于精巢和卵巢的其他各发育时期(P<0.05);在O4和T2、T3时期的表达量亦显著高于O2期和T1期(P<0.05),据此推测Sp-cyc H对拟穴青蟹的性腺发育可能发挥一定作用.
- 韩坤煌
- 关键词：拟穴青蟹CYCLINCAK基因克隆性腺发育
- CKS1B参与拟穴青蟹性腺发育的研究
- 2016年
- CDC28蛋白激酶调节亚基1B(CDC28 protein kinase regulatory subunit 1B,CKS1B)是高度保守的CKS1家族成员之一,在细胞周期中作为细胞周期蛋白激酶的调节亚基参与调控真核生物的细胞分裂。因此,研究CKS1家族基因参与甲壳动物性腺发育调节的分子机制具有重要的意义。从已构建的拟穴青蟹性腺EST数据库中筛选到CKS1B基因片段,继而克隆出其全长c DNA序列(Sp-CKS1B),并利用q RT-PCR技术检测其在不同组织和性腺不同发育阶段中的差异表达。结果显示,获得Sp-CKS1B的全长c DNA序列722 bp,其中5'UTR为82 bp,3'UTR为379 bp,开放阅读框261 bp,编码86个氨基酸,包含一段典型的CKS保守序列,属于CKS家族蛋白。在不同组织q RT-PCR结果显示,Sp-CKS1B基因在O5期雌蟹卵巢中的表达水平最高,并与其他组织具有极显著差异(P<0.01);同时,在性腺不同发育阶段的表达结果显示,Sp-CKS1B基因在精巢T1期的表达量最高,其次为O5期,二者显著高于卵巢O1-O4期的表达水平(P<0.05);而在精巢T3期的表达量最低,并显著低于T1、T2以及卵巢O4、O5期的表达水平(P<0.05)。结果说明了Sp-CKS1B在拟穴青蟹的性腺发育过程中可能具有十分重要的作用。
- 韩坤煌戴燕彬邹志华张子平王艺磊
- 关键词：拟穴青蟹基因克隆性腺发育
- 拟穴青蟹泛素基因的克隆及其在性腺发育过程中的表达被引量：9
- 2012年
- 在实验室所构建的拟穴青蟹（Scylla paramamosain）EST文库基础上筛选出泛素基因（Ubquitin,Sp-Ub）片段,利用RACE技术克隆其全长cDNA序列,并对其结构进行分析;利用实时定量PCR技术检测该基因在雌蟹各组织及性腺不同发育阶段中的表达情况。结果显示,Sp-Ub基因全长555 bp,编码154个氨基酸,其第1~76个氨基酸为高度保守的泛素结构域,第101~147的氨基酸残基为典型的核糖体蛋白S27a的保守区域;预测的泛素结构域二级结构由5个延伸链,1个α-螺旋及其连接的无规卷曲构成,Sp Ub三维结构由1个α-螺旋以及5个β片层。多重比对表明不同物种的泛素结构域和核糖体蛋白S27a结构域在进化过程中高度保守。定量PCR结果显示,Sp-Ub在鳃中的表达水平最高,卵巢次之,各组织间的表达无显著性差异,说明Sp-Ub基因在各组织中的表达恒定,且具有普遍作用;在卵巢发育过程中,Sp-Ub在O5期的表达水平最高,O1、O4期次之,O2期表达量最低且与O5期具有显著差异（P〈0.05）;在精巢发育过程中,Sp-Ub在T2期的表达量最高,其次为T1期,T3期表达最低且与T2期具有显著差异（P〈0.05）。本研究结果说明了Sp-Ub对拟穴青蟹生殖细胞的生长和发育可能具有重要作用。本研究将为甲壳动物性腺发育调控的分子机制奠定基础。
- 戴燕彬韩坤煌颜素芬邹志华张子平王艺磊
- 关键词：拟穴青蟹泛素基因性腺发育
- 用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT-PCR引物
- 本发明公开了一种大黄鱼DNA甲基化的分子标记的筛选方法及qRT‑PCR引物，属于分子标记技术领域。本发明提供的用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT‑PCR引物，能够筛选具有显著性甲基化和qRT‑PCR差异的...
- 韩坤煌王艺磊张子平刘伟阮少江黄伟卿李菲艳陈欣欣
- CKS1B参与拟穴青蟹性腺发育的研究
- CDC28蛋白激酶调节亚基1B(CDC28 protein kinase regulatory subunit 1B,CKS1B)是高度保守的CKS1家族成员之一,在细胞周期中作为细胞周期蛋白激酶的调节亚基参与调控真核生...
- 韩坤煌戴燕彬邹志华张子平王艺磊
- 关键词：基因克隆性腺发育拟穴青蟹
- 大黄鱼多组织表达谱分析
- 大黄鱼是我国重要的海水养殖鱼类,具有较高的经济价值.二代转录组测序技术可以高效获取基因的表达谱,已经广泛应用于许多鱼类的研究中.然而,大黄鱼的多组织表达谱尚未报道.本研究利用生物信息的方法,分析获得了大黄鱼下丘脑,肌肉,...
- 万海付韩坤煌张子平王艺磊
- 关键词：大黄鱼组织表达谱生物信息学
- 锯缘青蟹细胞周期相关基因的的克隆与分析
- 细胞周期是细胞增殖的重要过程。参与细胞周期调控的因子主要有:细胞周期蛋白（cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（cyclin-d...
- 韩坤煌邹志华张子平贾锡伟陈锦民林鹏王艺磊
- 关键词：细胞周期蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶性腺发育锯缘青蟹
- 文献传递
