隋文君
- 作品数:4 被引量:1H指数:1
- 供职机构:温州医学院更多>>
- 发文基金:温州市科技局对外合作项目浙江省自然科学基金温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响被引量:1
- 2008年
- 目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响,探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3,免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达,Westernblot检测p-Akt和Bad的表达。结果:Herceptin处理组细胞HER2阳性表达率(37.4%)显著低于对照组(78.3%)(P<0.01)。Herceptin处理组与对照组比较,p-Akt蛋白含量降低53.5%(P<0.01),Bad蛋白含量升高0.83倍(P<0.01)。Herceptin处理组细胞p21Cip1和p27Kip1阳性表达率(分别为67%和56.1%)显著高于对照组(分别为19%和21.4%)(P<0.01)。结论:Herceptin下调HER2表达后,通过下调p-Akt表达而上调其下游Bad、p21Cip1和p27Kip1的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。
- 隋文君李红智郑易谢丽微林鹏
- 关键词:HERCEPTINP13K/AKT通路
- 含anti-erbB2的重组表达载体的构建及其在T细胞株中的表达
- 2010年
- 目的:构建含融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的T细胞株,为erbB2过度表达肿瘤的靶向基因治疗奠定实验基础。方法:利用SWISS MODEL和PHYRE预测该融合蛋白的三级结构。利用PCR分别从重组质粒pPIC9k、pBullet和pLNCX上扩增出3段基因片段,即片段anti-erbB2 scFv、片段Fc-CD28-CD3(ζ)和信号肽序列signal。利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段signal-anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)。经TA克隆扩增及鉴定后,将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连构建重组真核表达载体,脂质体方法转染人T淋巴细胞株Jurkat,G418筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况。结果:经预测该融合蛋白在三级结构上可形成功能构象。经PCR、酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体pLNCX/signal-anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)。经流式细胞术检测,在Jurkat细胞中表达量达23.68%。结论:应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核表达载体pLNCX/anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ),融合基因能够在T淋巴细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过度表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了基础。
- 苏世振隋文君李红智布立敬胡望雄
- 关键词:ERBB2基因融合T淋巴细胞
- 融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的构建及真核表达
- 2010年
- 本研究利用SWISS-MODEL预测该融合蛋白的三级结构。利用PCR的方法分别从重组pPIC9k、重组pBullet和pSecTag2B上扩增出3段基因片段,即片段anti-erbB2 scFv(简称A)、片段Fc-CD28-CD3(ζ)(简称B)和信号肽序列(简称S)。利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段S-A-B。经TA克隆扩增及鉴定后,将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连构建重组真核表达载体,电转染人淋巴瘤T细胞株Jurkat,G418筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况。经预测在anti-erbB2 scFv与Fc基因片段之间不加连接肽的融合蛋白,在三级结构上可形成更佳的功能构象。经PCR、酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体pLNCX/S-A-B(在A与B基因片段之间不加linker)。经流式细胞术检测,在转染的Jurkat细胞中融合蛋白表达率约为56.17%。本研究应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核表达载体pLNCX/anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ),融合基因能够在淋巴瘤T细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了实验基础。
- 隋文君苏世振胡望雄李红智布立敬
- 关键词:ERBB2融合基因肿瘤治疗
- 融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的构建及真核表达
- 目的:构建含融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3(ζ)的T细胞株,为erbB2过表达肿瘤的靶向基因治疗奠定实验基础.方法: 利用SWISS MODEL预测该融合蛋白的三级结构.利用PCR的方法分...
- 隋文君苏世振胡望雄李红智布立敬
- 关键词:ERBB2融合基因肿瘤治疗