陶冶
- 作品数：9 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究
- 2015年
- 为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。
- 高明明王淑杰王俊金家民张璐刘永刚李爱东陶冶李莉姜成刚王刚申红
- 关键词：猪链球菌乳酸脱氢酶反应原性原核表达
- 一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价
- 2015年
- 为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(S.suis);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型S.suis WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型S.suis攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防S.suis病的有效灭活疫苗候选株。
- 高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌灭活疫苗免疫保护
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位鉴定被引量：2
- 2014年
- 为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株MAb与毕赤酵母表达的dCap和原核表达的Cap蛋白均可以发生特异性免疫反应。采用肽扫描法对MAb的非核定位信号区进行抗原表位鉴定,结果表明该MAb可以识别的线性表位区域为131TKATALTYDPYVNYSS146。本实验结果为进一步研究Cap蛋白的结构和PCV2临床检测方法的建立奠定基础。
- 张璐王延群郝立沙高明明李爱东陶冶李莉涂亚斌蔡雪辉路义鑫
- 关键词：猪圆环病毒2型DCAP单克隆抗体表位
- HP-PRRSV HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒对仔猪外周免疫器官及肺脏的损伤被引量：1
- 2014年
- 为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温测定及临床症状观察,并在感染后0,3,5,7,10天检测病毒血症情况。病毒感染后10天剖杀试验猪,观察外周免疫器官及肺脏的病理变化并对肺脏和主要外周免疫器官病毒载量进行测定。结果表明:HuN4 F5、HuN4 F15组在临床症状、病毒血症、外周病毒载量及病理变化方面都明显比其他组严重,HuN4 F23组发病明显减轻,HuN4 F30组、HuN4 F112组无明显发病特征,与空白对照组无明显差异。说明HP-PRRSV HuN4株在致弱过程中,传代至30代时毒力发生显著减弱。
- 李爱东王刚刘永刚陶冶李莉涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒致弱毒株肺脏病理损伤
- 带有EGFP的高致病性猪繁殖与呼吸综合征重组病毒的构建
- 2018年
- 为了构建带有绿色荧光蛋白（EGFP）的高致病性猪繁殖与呼吸综合征重组病毒（HP-PRRSV HuN4 EGFP）,试验采用分子克隆的方法,将转录调控序列TRS6与EGFP基因克隆至HP-PRRSV HuN4株感染性克隆上,用重组质粒pHP-PRRSV HuN4 EGFP转染Marc-145细胞拯救重组病毒HPPRRSV HuN4 EGFP,将拯救病毒连续传代观察其稳定性。结果表明：HP-PRRSV HuN4 EGFP感染性克隆构建成功;转染后荧光显微镜下可观察到特异性绿色荧光,表明重组病毒拯救成功;将拯救的病毒连续传5代,仍可观察到绿色荧光,表明该重组病毒稳定性良好。说明试验成功构建并拯救出HP-PRRSV HuN4 EGFP。
- 刘天昕陶冶李爱东常亚飞王刚汤艳东刘永刚蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒拯救分子克隆
- 高致病性PRRSV HuN4株不同代次病毒对仔猪胸腺损伤的研究被引量：2
- 2014年
- 为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)不同致弱代次病毒对断奶仔猪胸腺的损伤,本研究选用HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞中传代致弱的F5、F15、F23、F30代及弱毒疫苗HuN4 F112代分别接种30日龄的PRRSV抗原及抗体阴性健康断奶仔猪。实验结果显示:HuN4 F30感染组胸腺的眼观病变、胸腺重量、病理组织学变化、病毒载量及胸腺细胞凋亡比例均与F23感染组有显著差别(p<0.05)。本实验结果表明,HuN4 F23代仍然能够引起仔猪胸腺萎缩并导致机体免疫抑制,而F30代已不能引起断奶仔猪胸腺萎缩现象。因此,HP-PRRSV HuN4 F23、F30代可以作为研究HP-PRRSV HuN4致胸腺萎缩的分子机制的关键代次。本研究为进一步研究HP-PRRSV感染诱导仔猪胸腺萎缩和胸腺细胞凋亡的分子机制奠定了基础。
- 陶冶王刚刘永刚李莉李爱东于颖涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉
- 关键词：胸腺萎缩细胞凋亡
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF1a和ORF1b共同起始病毒负链RNA的形成
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒一直以来对养猪业都是巨大的威胁,其中HP-PRRSV的影响更为严重。之前的研究表明PRRSV的RNA合成与HP-PRRSV的毒力相关。病毒RNA的合成包括基因组RNA的合成以及亚基因组RNA的合成,...
- 房琼琼汤艳东刘继婷王同云王钰陶冶刘永刚蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4传代致弱株HuN4-F30感染性克隆的构建及拯救病毒致病性分析被引量：1
- 2016年
- 为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株传代致弱株Hu N4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10 808位引入Mlu I作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5'端上游引入CMV启动子,3'端引入丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号(BGH)。将各片段依次连接克隆于改造的p Belo BAC11载体中,构建含有全长HP-PRRSV致弱株c DNA感染性克隆p Belo BAC11-Hu N4-F30,并将全长质粒直接转染Marc-145细胞拯救出病毒。通过核酸鉴定与测序、分子标记鉴定、间接免疫荧光试验和动物致病性试验等进行鉴定。结果表明,拯救的病毒能够通过Mlu I酶切与亲本鉴别,拯救病毒的间接免疫荧光与亲本病毒一致,拯救病毒表现出低致病性。HP-PRRSV Hu N4-F30感染性克隆的构建与病毒的拯救,为进一步研究HP-PRRSV传代致弱机制奠定了基础。
- 常亚飞刘永刚李爱东陶冶王刚张冲李海蔡雪辉
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒对仔猪骨髓感染及损伤的初步研究被引量：2
- 2014年
- 为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)对断奶仔猪骨髓的损伤,本研究采用HP-PRRSV HuN4株接种30日龄的PRRSV抗原及抗体阴性的健康断奶仔猪,并在病毒感染后10 d检测仔猪骨髓内病毒感染及细胞凋亡情况。PCR和间接免疫荧光试验结果显示HuN4株感染仔猪骨髓内存在病毒;流式细胞计数分析和TUNEL法检测结果显示病毒感染仔猪的骨髓内出现大量的凋亡细胞。本实验结果表明,HP-PRRSV能够感染仔猪骨髓,引起仔猪骨髓损伤并导致机体免疫抑制。本研究为进一步探索HP-PRRSV感染诱导仔猪中枢免疫器官的损伤机制奠定了基础。
- 李莉王刚刘永刚李爱东陶冶佟杰于颖涂亚斌王淑杰孙明霞姜成刚蔡雪辉
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒骨髓细胞凋亡
