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陈策实: 作品数：20 被引量：217H指数：8; 供职机构：中国科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目中国科学院基础前沿研究专项项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>

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构建基因工程菌发酵产生维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸被引量：5: 2000年; 从棒状杆菌SCB30 5 8克隆得到两个 2 ,5 DKG 还原酶基因后 ,构建了两个能够表达 2 ,5 DKG还原酶的基因工程大肠杆菌BL2 1 (DE3)PET9aⅡ和DH5α( pBL4)和一个基因工程欧文氏菌ER97。 2 ,5 DKG还原酶基因分别受控于PL 或T7启动子 ,通过加入IPTG或提高温度进行诱导 ,SDS PAGE和酶活测定确定它们在诱导后得到了高表达 ,用细胞抽提液在加入辅酶NADPH的体外实验中转化 2 ,5 DKG ,HPLC检测证明能够产生大量 2 KLG ,然后在摇瓶水平上研究了它们转化 2 ,5 DKG产生 2 KLG的能力 ,结果表明采用合适的培养基 ,经过适时的诱导 ,它们都能够转化 2 ,5 DKG产生 2 KLG ,它们的产量可能与细胞内NADPH水平、2 KLG跨膜转运以及还原 2 KLG的酶水平有非常直接的关系。进一步提高产量需要对培养基和发酵条件进行优化。; 乔春红陈策实陈芳李越尹光琳; 关键词：发酵

实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述被引量：81: 2013年; 动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视;人类疾病的树鼩模型也再次受到越来越多的关注。该文综述了国内外特别是近年来我国树鼩研究进展,包括树鼩基础生物学及动物模型方面取得的成绩,并分析了该领域目前存在的困难和问题,探讨了未来的一些研究方向。; 徐林徐林张云梁斌吕龙宝陈策实陈勇彬周巨民; 关键词：树鼩实验动物基础生物学人类疾病动物模型

Progress of non-human primate animal models of cancers被引量：8: 2011年; Cancer is the second leading disease causing human death.Pre-clinical in vivo studies are essential for translating in vitro laboratory research results into the clinic.Rodents,including the mouse and rat,have been widely used for pre-clinical studies due to their small size,clear genetic backgrounds,rapid propagation,and mature transgenic technologies.However,because rodents are evolutionarily distinct from humans,many pre-clinical research results using rodent models cannot be reproduced in the clinic.Non-human primates（NHPs） may be better animal models than rodents for human cancer research because NHPs and humans share greater similarity in regards to their genetic evolution,immune system,physiology and metabolism.This article reviews the latest progress of cancer research in NHPs by focusing on the carcinogenesis of different NHPs induced by chemical and biological carcinogens.Finally,future research directions for the use of NHPs in cancer research are discussed.; 夏厚军陈策实; 关键词：CANCER

蛋白泛素连接酶在乳腺癌的遗传畸变与靶向治疗: 蛋白质泛素化修饰是一种常见的蛋白翻译后修饰,蛋白质泛素化介导的降解可以调节细胞周期,基因转录,DNA修复,迁移,以及调亡等细胞过程。蛋白质泛素化需要三个酶相继催化完成,负责最后关键一步反应的酶叫做E3泛素连接酶。多个E3...; 陈策实; 文献传递

欧文氏菌SCB125中2-酮醛糖酸还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：1: 2001年; 根据酶活测定和 PAGE活性染色初步证明欧文氏菌 SCB12 5中存在酶活较高的 2 -酮醛糖酸还原酶 (2 - KR) ,能够以 2 ,5 -二酮 - D-葡萄糖酸 (1)、2 -酮 - L -古洛糖酸 (2 )或者 2 -酮 - D-葡萄糖酸 (3)为底物。抽提欧文氏菌染色体DNA为模板 ,利用 PCR技术扩增 ,克隆得到两个 2 - KR酶基因 (tkr A和 tkr B) ,通过酶切和测序证明 :2 - KR A基因发生多处突变 ,而 2 - KR B基因保守。将含有这两个基因的片段分别连接到表达载体 p BL并转化大肠杆菌 DH 5α后 ,均获得高酶活表达。如果进一步用基因剔除的方法破坏欧文氏菌染色体上野生型 2 - KR基因 ,可以获得一个表达 1还原酶的理想宿主 ,为实现从葡萄糖一步发酵生产维生素 C前体; 陈芳陈策实尹光琳; 关键词：欧文氏菌 PCR 基因剔除前体药

新组合菌系SCB329-SCB933利用L-山梨糖发酵生产维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的研究 Ⅱ.利用L-山梨糖批加技术实现高糖发酵被引量：8: 1997年; 新组合菌系氧化葡萄糖酸杆菌SCB329-苏芸金芽孢杆菌SCB933能在较长时间内保持高的转化活力且具有极强的抗杂菌污染的特性。在一次投糖分批发酵的基础上,探索在控制溶氧、pH、温度等条件下,分批加入L-山梨糖发酵生产2-酮基-L-古龙酸新工艺。采用新工艺,既充分利用了菌系的优良特性,又避免了高糖浓度可能对菌系造成的不良影响。L-山梨糖最终浓度达到14%（w/v）,产酸120—135g/l,转化率90％左右,发酵周期40—65h。; 任双喜何建明宋祺叶晴郭新友陈策实尹光琳; 关键词：L-山梨糖 L-古龙酸发酵

2,5-DKG还原酶I的分离纯化与性质研究: 2005年; 欧文氏菌ER97高效表达了从棒状杆菌SCB3058克隆的2,5-二酮基-D-葡萄糖酸(2,5-DKG)还原酶I基因,5 L罐发酵后,收集菌体破碎,将胞内可溶性的蛋白通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水柱层析后分离纯化到了2,5-DKG还原酶I,纯化了5倍,得率27%,比活力为3,418 U/mg。测定了该酶的一些特性参数:分子量为34 kD,等电点为6.0,它以NADPH为辅酶,将2,5-DKG还原为2-酮基-L-古龙酸(2-KLG),对NADPH和2,5-DKG底物的Km值分别是0.29mmol/L和14.7 mmol/L,1 mmol/L Cu2+、Zn2+等有强烈抑制作用,EDTA和巯基乙醇对该酶没有抑制作用,酶的最适pH为7.0,最适反应温度为40℃。; 李越陈策实尹光琳

2,5-DKG还原酶Ⅱ基因的克隆和在大肠杆菌中的表达被引量：3: 1999年; 参照文献上的2，5-二酮基-D-葡萄糖酸（简称2，5-DKG）还原酶II基因序列，合成两个引物序列并在两端加上EcoRI和BamHI两个酶切位点，抽提棒状杆菌SCB3058菌株的染色体为模板进行PCR反应，克隆得到2，5-DKG还原酶II基因，酶切验证与预期的结果相符合。将此片段克隆到pGEM-T载体上保存．将2，5-DKG还原酶II基因用EcoRI和BamHI内切酶切下，连接到pBV220载体上，构建成表达载体。42℃诱导不能得到稳定的蛋白表达条带和酶活力，测序发现基因的3’末端的原PCR引物外少合了一个碱基，终止密码子发生移码突变而消失。此外在5’端的启始密码子ATG前有三个碱基与pBV220载体上的SD序列发生配对。据此，重新设计和合成了PCR引物，并用pBV220和pBL4载体构建了两个表达载体。42℃诱导表达均得到了稳定的表达条带和较高的酶活力．; 李越陈策实尹光琳; 关键词：PCR 克隆

实验动物树鼩和人类疾病的树鼩模型研究概述: 动物模型在生物医学领域(如回答人体各种重大生物学问题、解析人类疾病机理和新药研发等方面)已经做出了不可替代的巨大贡献。转化医学存在的问题使得树鼩(Tupaia belangeri chinensis)实验动物重新得到重视...; 徐林张云梁斌吕龙宝陈策实陈勇彬周巨民姚永刚; 关键词：树鼩实验动物基础生物学人类疾病动物模型

突变的2,5二酮基－D－葡萄糖酸还原酶及其基因工程表达: 本发明为一种生物合成2，5二酮基-D-葡萄糖酸(2，5DKG)还原酶的技术，通过聚合酶链反应技术扩增，克隆到有突变的棒状杆菌2，5DKG还原酶I基因，构建适当的表达载体在大肠杆菌和欧文氏菌高效表达来实现发明目的。由2，5...; 尹光琳陈策实; 文献传递

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