陈立栋
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国农业大学农业生物技术国家重点实验室开放课题基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2重组鸡痘病毒的构建
- 刘小军陈楠陈立栋周胜花陈永福
- 含IBDV保护性抗原VP2的质粒，以SphⅠ消化，然后用T4噬菌体DNA聚合酶将末端补平，产物纯化后再以SalⅠ消化一次，经再次纯化后与SmaⅠ和SalⅠ分步酶切的鸡痘病毒插入载体pFG1175-1相连，使VP2基因顺向...
- 关键词：
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因重组鸡痘病毒
- 离子强度对于牛精蛋白在大肠杆菌中的表达的影响被引量：1
- 2003年
- 通过基因合成将大肠杆菌偏好的精氨酸密码子CGT取代野生型牛精蛋白基因中的稀有精氨酸密码子AGA和AGG ,得到密码子优化的牛精蛋白基因 ,并将其克隆入原核表达载体 pGEX 2T中 ,组装成表达载体 pGEX 2T PS。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株BL2 1中 ,经IPTG诱导 ,可得到一 33kD融合蛋白表达带 ,首次成功地将牛精蛋白在大肠杆菌中进行了表达 ,但其表达量很低 ,约为总菌体蛋白的 13%。增加表达菌株培养液的离子强度 ,可将蛋白表达含量提高到 2 8% ,且蛋白表达量与离子强度呈正相关。纯化后的牛精蛋白可在体外条件下与DNA发生结合。
- 张雅丽任立明郭英陈立栋杨国庆陈永福
- 关键词：离子强度大肠杆菌纯化
- 牛α1，3-半乳糖基转移酶基因敲除的研究
- 基因打靶是80年代发展起来的一项重要的分子生物学技术.简而言之,它是指外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定位点,改变细胞遗传特性的方法.我们常见的为胚胎干细胞基因打靶.鉴于基因打靶在转基...
- 陈立栋
- 关键词：克隆基因打靶
- 文献传递
- 肌抑素(Myostatin)基因突变体活性区的克隆、表达及活性的研究被引量：5
- 2003年
- 肌抑素Myostatin是肌肉发育的重要抑制因子 ,肌抑素的突变 ,使其抑制功能的全部或几乎全部丧失 ,表现为肌肉细胞的增大和肌纤维束的增加。采用PCR技术 ,从肌抑素天然突变的双肌牛皮尔蒙特 (Piedmontese)的基因组中扩增得到肌抑素突变体的活性区 ,并将其亚克隆到pMD18 T载体上 ,利用基因重组技术 ,构建原核表达质粒pET3 0a(+ ) action Myostatin ,在大肠杆菌中高效表达 ,采用亲和层析法纯化表达产物 ,并将其共孵育于离体培养的绵羊肌肉细胞 ,检测肌抑素突变体的生化活性 。
- 杨兴元侯健安晓荣关宏苟克勉杨树洪陈立栋陈永福
- 关键词：MYOSTATIN基因突变体克隆肌肉细胞
- 鸡传染性法氏囊病病毒Ts毒株基因组B片段的克隆与序列分析
- 用鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)Ts毒株,提纯的病毒颗粒提取基 因组dsRNA.根据已报道的加拿大OH株序列设计引物,用RT-PCR进行cDNA扩增,获得976bp、774bp和997bp的三个部分重...
- 陈立栋
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒
- 文献传递
- 牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建
- 2003年
- 利用La-PCR的方法,从牛的基因组中成功地获得分别约为2.4kb、15.0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1,3)GT基因的基因组序列。其中2.4kb片段位于5～7外显子之间,包括了完整的第五及第六内含子;15.0kb片段位于3～4外显子,包括了完整的第三内含子。15.0kb、2.4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂,使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf—neo17.4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1,3)—GT基因。
- 陈立栋林爱星张雅丽杨兴元安晓荣陈永福
- 关键词：启动子打靶载体克隆基因打靶
- 鸡传染性法氏囊病病毒基因组A片段cDNA序列分析被引量：2
- 2002年
- 用鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)天水毒株。用提纯的病毒颗粒提取基因组RNA。根据已报道的英国 5 2 /70株的序列设计引物 ,用反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)进行cDNA扩增 ,获得 15 5 8bp和 15 90bp两个部分重叠的片段。结果表明 ,所克隆片段为 30 99的IBDV大开放读框。经与已报道的多个毒株相应序列比较后发现 ,核苷酸同源性介于 97 4%～ 99 8%之间 ,推导的氨基酸同源性介于 98 1%～ 99 5 %。
- 刘小军陈楠陈立栋陈永福
