陈祥 作品数:12 被引量:19 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学检验医学院感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
SIRT2基因沉默后对肝癌细胞增殖的影响 被引量:5 2014年 目的探讨沉默信息调节因子2相关酶2(silent information regulator 2 related enzyme 2,SIRT2)基因沉默对肝癌细胞增殖的影响及分子机制。方法利用慢病毒介导的shRNA干扰技术,靶向沉默SIRT2基因的表达;Western blot检测SIRT2基因沉默效果及SIRT2沉默后β-catenin蛋白的表达变化;流式细胞计数检测SIRT2基因沉默后肝癌细胞周期的变化,CCK-8法检测SIRT2基因沉默对肝癌细胞增殖的影响,台盼蓝计数检测SIRT2基因沉默及过表达β-catenin后,SIRT2基因沉默对肝癌细胞增殖的影响;BrdU实验检测SIRT2基因沉默对肝癌细胞DNA合成的影响;平板集落实验检测SIRT2沉默对肝癌细胞克隆形成能力的影响。结果 SIRT2 shRNA靶向沉默显著抑制肝癌细胞SIRT2的表达水平,shRNA沉默组肝癌细胞PLC-5的增殖能力较对照组分别下降48.3%(shSIRT2-1)、55.6%(shSIRT2-2)(P<0.01);SIRT2基因沉默后,肝癌细胞出现G1期阻滞,β-catenin蛋白表达水平下降;过表达β-catenin后SIRT2基因沉默组较对照组肝癌细胞增殖分别升高了89%(shSIRT2-1)、75%(shSIRT2-2)(P<0.01)。结论 SIRT2沉默可能通过调节β-catenin信号通路来影响肝癌细胞增殖。 冉龙宽 宋春丽 李宛蔚 任吉华 陈祥 陶娜娜 陈娟关键词:肝癌 增殖 SIRT3在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响 目的研究Sirtuin 3(SIRT3)在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响,并探讨SIRT3调控HBV复制的分子机制。方法运用细胞免疫荧光技术验证HBV感染对细胞氧化应激反应的影响;Real-t... 任吉华 宋春丽 李宛蔚 冉龙宽 陶娜娜 陈祥 黄爱龙 陈娟关键词:HBV 氧化应激 文献传递 SlRT3在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响 目的 研究Sirtuin 3(SIRT3)在HBV感染诱导的氧化应激反应中的作用及其对HBV复制的影响,并探讨SIRT3调控HBV复制的分子机制.方法 运用细胞免疫荧光技术验证HBV感染对细胞氧化应激反应的影响;Real... 任吉华 宋春丽 李宛蔚 冉龙宽 陶娜娜 陈祥 黄爱龙 陈娟关键词:HBV Sirtuin 6对肝癌细胞增殖的影响 被引量:7 2016年 目的:探究sirtuin 6(SIRT6)对肝癌细胞增殖的影响。方法:RT-q PCR检测200例肝癌病人及50例健康人外周血中的SIRT6的mRNA表达水平,并将肝癌病人外周血SIRT6的mRNA表达水平与多个临床病理参数相结合进行统计学分析。Western blotting检测SIRT6在原代肝细胞、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平。在肝癌细胞中利用shRNA干扰SIRT6基因的表达,并通过Western blotting验证沉默效率;MTS实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞活力的影响。Ed U标记实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞DNA合成的影响;平板集落实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞集落形成能力的影响;软琼脂集落形成实验检测SIRT6基因沉默对肝癌细胞锚定非依赖生长能力的影响。结果:SIRT6在肝癌病人的外周血中表达明显增高,且SIRT6的表达量增高与肿瘤的大小、肿瘤的分级以及肿瘤的血管侵袭相关。进一步验证发现SIRT6在肝癌细胞系中表达水平较原代肝细胞PHH及永生化肝细胞MIHA增高。在2个肝癌细胞系中沉默SIRT6可以抑制肝癌细胞的活力及DNA合成能力,也可抑制肝癌细胞集落形成能力及锚定非依赖生长能力。结论:SIRT6促进肝癌细胞的增殖及恶性转化。 陶娜娜 周洪钟 任吉华 陈祥 李宛蔚 刘波 陈娟关键词:SIRTUIN 肝细胞癌 细胞增殖 GLS在HBV复制过程中的调控作用 目的:初步研究谷氨酰胺酶(GLS)在乙型肝炎病毒(HBV)复制调控中的作用.方法:采用基因表达谱芯片在HepG2和HBV复制细胞模型HepG2.2.15中筛选差异表达基因.通过qRT-PCR和Western blotti... 刘波 任吉华 李婉蔚 陶娜娜 陈祥 周洪钟 黄爱龙 陈娟关键词:谷氨酰胺酶 乙型肝炎病毒 HBV复制 SIRT6基因沉默对裸鼠异位移植人肝癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1 2016年 该文旨在探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)基因沉默对裸鼠异位移植人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。构建稳定细胞系SIRT6-sh RNA-SK-Hep-1和sh Cont-SKHep-1,并应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)和Western blot检测SIRT6基因的表达水平;将稳定转染细胞注入裸鼠皮下,实时监测裸鼠移植瘤的生长,7周后剥离出裸鼠移植瘤并称重;免疫组织化学分析SIRT6、Ki-67的蛋白质水平。进一步应用q RT-PCR检测SIRT6基因沉默对下游靶向分子凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族的影响;Western blot检测X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein gene,XIAP)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白质水平。结果显示,成功构建了沉默SIRT6基因的SK-Hep-1稳定细胞系;SIRT6-sh RNASK-Hep-1组裸鼠移植瘤体积和质量较sh Cont-SK-Hep-1组均减少(P<0.01);免疫组织化学发现,SIRT6-sh RNA-SK-Hep-1组Ki-67水平下调;沉默SIRT6基因下调XIAP m RNA和蛋白质水平,并增加PARP蛋白质的剪切水平。该研究结果提示,SIRT6基因沉默可能通过下调XIAP的表达抑制裸鼠异位移植人肝癌细胞的生长。 周洪钟 陶娜娜 陈祥 任吉华 李宛蔚 刘波 陈娟关键词:XIAP 移植瘤 过表达SIRT3抑制裸鼠异位移植人肝细胞癌的生长及其机制研究 被引量:1 2015年 该文旨在研究人肝细胞癌异位移植瘤裸鼠模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,SIRT3)对肝细胞癌生长的影响及其机制。建立稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的SK-Hep-1细胞株;将稳定过表达SIRT3和pc DNA3.1的细胞悬液分别注射入裸鼠皮下,实时监测两组移植瘤的生长,25 d后剥离出移植瘤并称重;免疫组织化学检测移植瘤中SIRT3、Ki67的表达水平;应用定量逆转录PCR(q RT-PCR)筛选SIRT3影响移植瘤生长的下游靶向分子,Western blot检测下游靶向分子Bax的表达量以及移植瘤中cleaved-PARP(poly ADP-ribose polymerase)的表达水平。结果显示,过表达SIRT3组移植瘤的体积和重量都小于pc DNA3.1组;过表达SIRT3组移植瘤中Ki67的表达水平较pc DNA3.1组降低;过表达SIRT3上调Bax的m RNA和蛋白质水平并促进PARP的剪切。该文结果提示,SIRT3可能通过Bax凋亡信号通路抑制人肝细胞癌异位移植瘤的生长。 陈祥 任吉华 冉龙宽 陶娜娜 李宛蔚 周洪钟 刘波 陈娟关键词:肝细胞癌 移植瘤 BAX SIRT3在HBx介导的氧化应激反应中的作用 目的:研究沉默信息调节因子3(SIRT3)在乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白介导的氧化应激反应中的重要作用。 方法: 1.利用荧光探针carboxy-H2DCFDA和流式细胞术检测HBV瞬时表达和 HBV稳定复制的细胞中... 陈祥关键词:乙型肝炎病毒 氧化应激 热休克蛋白70对HBV复制的影响 被引量:2 2016年 目的:探讨过表达热休克蛋白70(HSP70)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法:运用RTq PCR检测HBV复制对HSP70表达的影响及过表达HSP70对HBV 3.5 kb m RNA的影响;运用Western blot法验证HSP70过表达效果及过表达HSP70对HBV核心蛋白的影响;RT-q PCR和Southern blot法分析过表达HSP70对HBV复制中间体的影响;运用双萤光素酶报告系统检测过表达HSP70对HBV启动子活性的影响。结果:HBV复制显著抑制HSP70的m RNA水平。过表达HSP70抑制HBV复制中间体、3.5 kb m RNA以及核心蛋白的表达,同时抑制HBV核心启动子的活性。结论:HBV复制抑制HSP70的表达。过表达HSP70抑制HBV的复制。本研究结果表明,HSP70通过抑制核心启动子的活性抑制HBV的复制。 周洪钟 刘波 任吉华 陶娜娜 陈祥 李宛蔚 陈娟关键词:热休克蛋白70 乙型肝炎病毒 沉默信息调节因子6(SIRT6)在原发性肝细胞癌(HCC)中的作用机制研究 目的研究沉默信息调节因子2相关酶6(sirtuin6,SIRT6)对肝癌细胞生长的影响,并探索SIRT6调控肝癌细胞生长的分子机制。方法运用Real-time PCR、western blot、免疫组织化学分析SIRT6... 冉龙宽 李宛蔚 宋春丽 任吉华 陈祥 陶娜娜 黄爱龙 陈娟关键词:肝癌 凋亡 文献传递