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甘丙肽受体2型受体与β-arrestin在内化转运中的相互作用: 甘丙肽是一种含有二十九个氨基酸的神经肽,广泛分布于中枢神经系统和外周组织中,参与多种重要的生理和病理功能。目前已经克隆出三种甘丙肽受体,甘丙肽1型受体(GalR1)、甘丙肽2型受体(GalR2)和甘丙肽3型受体(GalR...; 闫竹青金艳燕吕琼杨予涛张进禄徐志卿; 文献传递

5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化: 2010年; 目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。; 金艳燕吕琼闫竹青高尔静赵春礼张进禄徐志卿

5-HT<,1A>-EGFP蛋白稳定表达PC12细胞系的建立及胆固醇对膜转运的影响: 5羟色胺(serotonin,5-HT)是1948年发现的一种重要的神经递质。5羟色胺能系统在产生和调节多种认知和行为学的功能上起到了关键性的作用,比如睡眠,情绪、疼痛、成瘾、性行为、抑郁、焦虑、酒精、攻击行为、学习等。...; 金艳燕; 关键词：PC12细胞脂筏

甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究: G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体（GalR2）是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,转染到HEK293A细胞中。Weste...; 闫竹青初晓东吕琼金艳燕李杰马克乾杨予涛张进禄徐志卿; 关键词：G蛋白偶联受体同源二聚体免疫共沉淀; 文献传递

荧光共振能量转移技术阳性参照质粒的构建及应用被引量：2: 2015年; 目的构建青色荧光蛋白(CFP)基因和黄色荧光蛋白(YFP)基因相连接的真核表达载体pYFP-CFP,并检测融合蛋白CFP-YFP的FRET转移效率,为FRET技术提供阳性参照物。方法利用基因重组法,以带有CFP基因序列的质粒(p CFP)为模板,扩增CFP基因并插入黄色荧光蛋白载体(pYFP)的多克隆位点中,构建真核表达质粒pYFP-CFP。经细胞转染后,使其表达CFP和YFP相连的融合蛋白。在激光共聚焦显微镜下采集FRET信号图和FRET转移效率(EFRET)的计算,并比较和分析表达CFP-YFP的阳性细胞与CFP和YFP共表达的阴性细胞。结果真核表达质粒pYFP-CFP构建成功,并在细胞质中表达,这与p CFP和pYFP共转染的细胞中荧光蛋白的分布略有不同,后者在细胞胞质和细胞核中均有表达。统计结果显示表达融合蛋白的阳性组EFRET明显高于共表达的阴性组,差异有统计学意义。结论融合荧光蛋白分子的青色和黄色蛋白之间具有10个氨基酸残基相连,符合FRET现象发生的条件,能够采集到很强的FRET信号,可作为FRET研究的稳定阳性实验参照。; 金艳燕邓君金良韵肖忠新徐志卿张进禄赵君朋薛冰; 关键词：质粒构建荧光共振能量转移

双光子共聚焦显微镜的使用及管理的探讨被引量：2: 2012年; 现代高端仪器的购置和应用,也是一种先进技术的引进、消化、创新的过程。如何高效应用先进的大型仪器,提高效能,更好地为教学科研服务,本文从仪器制度建设、实验人员的队伍建设、信息化建设、校内外的合作等4个方面进行了探讨。; 肖忠新邓君王劲松金艳燕张进禄; 关键词：大型仪器

甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究: G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用.为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,转染到HEK293A细胞中.Weste...; 闫竹青初晓东吕琼金艳燕李杰马克乾杨予涛张进禄徐志卿; 关键词：G蛋白偶联受体同源二聚体免疫共沉淀

激光共聚焦显微镜实验室开放管理的探讨被引量：9: 2013年; 从笔者所在高校激光共聚焦实验室的开放及管理出发,分析了目前实验室开放过程中遇到的管理机制、实验技术培训、仪器维护等问题,并提出相应对策,以期对高校实验室的开放提供有益参考。; 邓君金艳燕王劲松肖忠新

甘丙肽2型受体在HEK293细胞中的表达及内化过程被引量：3: 2010年; 构建了在甘丙肽2型受体(GalR2)N端带myc表位标签的真核表达载体,并将其转染到HEK293细胞,进而应用免疫荧光细胞化学方法结合激光扫描共聚焦显微技术观察GalR2蛋白的亚细胞分布和膜转运过程。Western blot结果发现转染组myc-GalR2蛋白水平呈高表达。myc-GalR2主要分布在细胞膜上,少量分布于胞浆中。当给予甘丙肽(10-7mol/L)刺激后,5min时可见细胞膜上myc-GalR2明显减少,胞浆内myc-GalR2增多,15min时膜上myc-GalR2几乎全部消失。表明GalR2受体与配体结合后发生内化,且受体蛋白内化为时间依赖性的转运过程,证实在HEK293细胞GalR2会出现配体依赖性内化。同时,以已知膜蛋白5-HT1AR的内化作为对照,可见在给予甘丙肽刺激以后,5-HT1AR没有发生内化,受体蛋白仍然表达在膜上。此外,通过测定胞内钙水平激活情况来检测其信号通路激活情况,表明myc对GalR2功能没有明显影响。; 吕琼金艳燕吴波路雅静李晓晓赵春礼徐志卿; 关键词：HEK293细胞

5羟色胺1A受体亚型的内在化研究: 目的 5-羟色胺是脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为,5-羟色胺通过与不同受体亚型结合,发挥各种生理及病理作用,参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。5羟色胺1A型受...; 金艳燕李晓晓吕琼徐志卿; 关键词：G蛋白偶联受体内在化; 文献传递

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金艳燕