郭婷婷
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- Survivin反义RNA/HSP70双基因表达载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的:构建Survivin反义RNA/HSP70双基因表达载体,为后期转染肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡以及激发机体有效的特异性抗肿瘤免疫应答提供重要的实验材料。方法:应用RT-PCR从Jurkat细胞中获得Survivin cDNA片段,反向插入pIRES2-DsRed2质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的Survivin反义RNA表达载体是否成功;应用RT-PCR从HepG2细胞中获得的HSP70 cDNA片段,定向插入到pIRES2-DsRed2质粒载体中;经菌落PCR、酶切和测序鉴定所构建的HSP70表达载体是否正确。结果:经酶切和测序鉴定证明Survivin反义RNA表达载体已成功构建;经菌落PCR、限制性酶切和测序鉴定证明HSP70表达载体已成功构建。结论:本实验已成功构建了Survivin反义RNA/HSP70双基因表达载体,为进一步研究提供了实验基础。
- 郭婷婷刘晓伟王晓娟新燕康毅敏郝兴霞
- 关键词：微管相关蛋白质类热休克蛋白质70逆转录聚合酶链反应
- Survivin反义RNA/HSP70双基因对MCF-7细胞的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨survivin反义RNA/HSP70双基因转染对乳腺癌细胞系MCF-7的影响。方法将已成功获得的双基因载体(pIRES2-EGFP-survivin反义RNA/HSP70)用脂质体介导转染乳腺癌细胞系MCF-7,转染72h,收集各组细胞,用倒置荧光显微镜观察并证实转染是否成功;采用real-time PCR方法检测细胞内survivin基因mRNA水平的表达变化;用Western blotting检测细胞HSP70蛋白表达变化;应用Annexin-V-cy5/7AAD双染后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果转染双基因载体与转染空载体的乳腺癌细胞系MCF-7于倒置荧光显微镜下可见绿色荧光;将转染双基因载体的MCF-7细胞与转染空载体的MCF-7细胞和未转染的MCF-7细胞相比,survivin mRNA表达水平降低,并有效诱导细胞发生凋亡,而HSP70蛋白表达升高。结论 Survivin反义RNA与HSP70双基因转染成功;survivin反义RNA能干扰MCF-7内源survivin的表达,诱导细胞凋亡;HSP70能上调MCF-7细胞HSP70蛋白的表达。
- 龚道元郭婷婷伏红霞彭艳王晓娟
- 关键词：SURVIVINHSP70反义RNA乳腺癌
- CD71抗体靶向转移系统的构建及对细胞的生长抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的:构建肝癌靶向性的Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统,并研究其在体外对肝癌细胞的生长抑制作用。方法:体外培养抗转铁蛋白受体(CD71)抗体的杂交瘤细胞株D2C5.6,诱导裸鼠产生腹水并纯化,以水溶性碳二亚胺介导CD71抗体与多聚左旋赖氨酸(PLL)的连接,再与Survivin反义RNA/HSP70双基因载体按比例混匀,得到-PLL-载体系统;转染人肝癌细胞株HepG2后,采用MTT法观察细胞的生长情况。结果:分析型酸性尿素凝胶电泳实验证实抗CD71抗体与PLL成功连接;MTT试验显示,Ab-PLL-Survivin反义RNA/HSP70基因转移系统处理的HepG2细胞生长明显受到抑制。结论:CD71抗体介导的肝癌靶向转移系统已经成功构建,为肝癌的基因治疗提供了一定的实验基础。
- 龚道元郭婷婷佟豪伏红霞彭艳王晓娟
- 关键词：CD71抗体靶向基因转移系统人肝癌细胞株HEPG2细胞生长肝癌靶向性
