郭元芳
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 地钱素C衍生物F41对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍生物,并比较其与MC对HeLa细胞存活的抑制作用。用倒置显微镜、DAPI染色和DNA梯带检测其对细胞凋亡的影响。用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。用Western印迹法检测其对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。结果在56种MC衍生物中,F41对HeLa细胞毒性最强,抑制HeLa细胞存活的IC50为(11.31±2.13)μmol·L-1,明显低于MC〔IC50为(17.19±3.28)μmol·L-1〕(P<0.01)。F41和MC与HeLa细胞作用24,48和72h,F41对HeLa细胞存活的抑制作用均明显强于MC(P<0.05)。形态学和DNA梯带检测显示,F41处理后,HeLa细胞皱缩变小,有空泡和凋亡小体出现,胞核浓缩变小,DNA电泳呈梯状条带。流式细胞分析显示,F41 15μmol·L-1处理HeLa细胞24h,G2/M期细胞占总细胞的比例为(43.8±3.0)%,明显高于对照组的(13.1±1.6)%(P<0.01);G1期细胞比例为(34.8±3.8)%,明显低于对照组的(63.6±5.5)%(P<0.01)。Western免疫印迹结果表明,F41可使HeLa细胞内磷酸化细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶1水平降低,细胞周期蛋白B1和P53蛋白表达增多。结论 F41可诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞分裂,其抗肿瘤活性可能强于MC。
- 魏玉平郭元芳孙高英王小元刘永青胡中一毕文祥
- 关键词：细胞周期细胞凋亡
- 人参皂苷Rb1对SweAPP-SK细胞保护作用的研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察人参皂苷Rb1对SweAPP-SK细胞的保护作用。方法用Rb1处理SweAPP-SK细胞,用MTT分析、酶联免疫分析和流式细胞术观察Rb1对SweAPP-SK细胞增殖、Aβ分泌量、细胞活性氧(ROS)水平和Ca2+水平的影响。结果较SK-N-SH细胞,SweAPP-SK细胞增殖明显延迟,细胞ROS及Ca2+水平增加。用Rb1处理SweAPP-SK细胞后,细胞增殖加快,细胞外Aβ40浓度明显降低,细胞ROS及Ca2+水平明显降低。结论 Rb1对SweAPP-SK细胞有保护作用,该保护作用的发挥可能与其能减少Aβ分泌及降低细胞内ROS和Ca2+水平有关。
- 杨玲玲孙高英郝建荣魏玉平郭元芳崔行毕文祥
- 关键词：Β-淀粉样肽人参皂苷RB1活性氧CA2+
- 人参皂苷Rb1对NEP基因启动子活性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒,探查神经内肽酶(NEP)基因启动子中与人参皂苷Rb1影响NEP启动子活性有关的位点。方法用NEP基因5'上游启动区2.4 kb片段和荧光素酶报告基因载体pGL3-basic构建NEP启动子-荧光素酶报告基因质粒pGL3-nep2.4;用Erase-a-Base System对pGL3-nep2.4质粒2.4 kb DNA插入片段5'端进行缺失,构建NEP启动子缺失体-荧光素酶报告基因质粒;用Rb1处理NEP启动子缺失体转染的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,检测双荧光素酶活性,观察Rb1对NEP启动子活性的影响。结果成功构建了含NEP启动子DNA序列的重组质粒pGL3-nep2.4。荧光素酶活性检测显示,转染pGL3-nep2.4质粒的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性是转染pGL3-basic的13.1倍(P<0.01)。Rb1处理可使转染pGL3-nep2.4质粒的SH-SY5Y细胞荧光素酶活性增加,其是对照组的2.9倍(P<0.01);细胞荧光素酶活性检测亦显示,NEP基因上游启动区-894^-857 bp(RegionⅠ)及-100^-82 bp(RegionⅣ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的29%(P<0.01)和25%(P<0.01),-559^-534 bp(RegionⅡ)及-223^-179 bp(RegionⅢ)片段缺失后,启动子活性分别是缺失前的5.12倍(P<0.01)及1.81倍(P<0.01)。Rb1处理后,RegionⅠ、Ⅱ和Ⅲ缺失体质粒转染细胞荧光素酶活性均与对照组无统计学差异(P>0.05),RegionⅣ缺失质粒pGL3-226转染细胞荧光素酶活性也与对照组无明显差异(P>0.05),而含RegionⅣ质粒pGL3-244转染细胞荧光素酶活性则是对照组的1.61倍(P<0.01)。结论 NEP基因5'上游2.4 kb DNA片段有较强的启动子活性,Rb1能明显增加其活性。NEP基因2.4 kb DNA片段有2个正调控区(RegionⅠ和RegionⅣ)和2个负调控区(RegionⅡ和RegionⅢ),Rb1通过RegionⅣ发挥正调控作用。
- 张晓金孙高英杨玲玲郭元芳郝秀玉郝建荣毕文祥
- 关键词：人参皂苷RB1启动子
- 地钱素C衍生物F41对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响
- 目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍...
- 魏玉平郭元芳孙高英王小元刘永青胡中一毕文祥
- 关键词：细胞周期细胞凋亡
- 黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母SMD1168中的表达被引量：2
- 2013年
- 目的:在毕赤酵母SMD1168中用3-磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehygrogenase gene promoter,pGAP)表达黑曲霉葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)。方法:将黑曲霉accc30161的GOD基因插入具有pGAP的pGAPZαA质粒中,构建黑曲霉GOD毕赤酵母表达载体,并用菌落PCR、重组质粒琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切分析及测序等方法对其进行验证。然后用重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168,并用PCR扩增分析观察转化效果,用SDS-PAGE及酶活检测观察重组酵母黑曲霉GOD的表达和活性。结果:用黑曲霉accc30161的GOD基因成功构建了GOD表达载体pGAPZαA-GOD。转化后,pGAPZαA-GOD相关DNA片段已整合进重组毕赤酵母SMD1168-GOD基因组中。SMD1168-GOD可高表达具有活性的GOD,在30℃、pH 6的条件下,其培养液上清GOD酶活可达107.18 u/mL。结论:重组蛋白缺陷性毕赤酵母SMD1168-GOD可以利用pGAP高效表达黑曲霉GOD。
- 郭元芳孙高英郝建荣彭炳银毕文祥鲍晓明
- 关键词：葡萄糖氧化酶黑曲霉毕赤酵母基因表达启动子
- 黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母SMD1168中的表达
- 葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，在分子氧的存在下，利用氧为电子受体，专一性氧化β-D-葡萄糖生成D-葡萄糖酸内酯，同时消耗氧生成过氧化氢。葡萄糖氧化酶在生物医学、食品工业等多个领域发挥着越来越重要的作用，其主要分布于多种动...
- 郭元芳
- 关键词：葡萄糖氧化酶黑曲霉毕赤酵母基因表达启动子
- 文献传递
- N-乙酰半胱氨酸对子宫颈癌细胞紫杉醇耐药性的影响
- 2013年
- 目的建立耐紫杉醇(PTX)子宫颈癌细胞株,观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对子宫颈癌细胞紫杉醇耐药的影响。方法用PTX处理并培养Hela细胞,建立耐PTX子宫颈癌细胞株Hela/PTX。观察和检测其细胞形态、细胞生长曲线、耐药指数、氧化还原状态及紫杉醇耐药基因1(Txr1)的表达。用NAC处理Hela/PTX细胞,观察NAC对其PTX耐药的影响。结果用PTX处理Hela细胞10个月后,可获得在500μg/L PTX中生长状态良好的Hela/PTX细胞。Hela/PTX细胞体积偏大,胞浆内颗粒较多,群体倍增时间是亲代细胞的1.32倍,对PTX具有显著耐药性,耐药指数为122.69。与Hela细胞相比,Hela/PTX细胞有高水平的活性氧(ROS)和Txr1 mRNA,但还原型谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性却有不同程度的降低,而氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平和GSH/GSSG比值则无明显变化。NAC处理后,Hela/PTX细胞ROS和Txr1mRNA水平下降,对PTX敏感性增加。结论耐紫杉醇Hela/PTX细胞氧化还原状态失衡,Txr1表达增加。NAC能降低ROS水平,减少Txr1表达,可逆转其对PTX的耐受。
- 孙高英王小元张晓金郝秀玉郭元芳王晓毕文祥
- 关键词：子宫颈肿瘤紫杉醇N-乙酰半胱氨酸活性氧
- MADD在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨MADD在肺正常组织及肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集肺临床病理组织标本,免疫组化法检测肺正常组织和肺癌组织MADD表达;培养人肺腺癌A549细胞,逆转录PCR检测其IG20基因表达;用携带MADD基因的质粒和能够沉默MADD表达的慢病毒载体分别转染A549细胞,Western blot、MTT分析和流式细胞术检测其MADD表达、增殖及凋亡。结果:肺腺癌组织MADD表达水平明显高于肺正常组织和肺鳞癌组织;A549细胞能够表达MADD;高表达MADD能抑制A549细胞凋亡,提高其增殖活力,而沉默MADD表达则能促进A549细胞凋亡,降低其增殖活力。结论:肺腺癌组织MADD表达明显增高;MADD可通过抑制凋亡来促进肺腺癌细胞生存。
- 魏玉平吴金香郭元芳孙高英张强毕文祥董亮
- 关键词：肺癌免疫组化TRAIL
