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郑宽瑜: 作品数：44 被引量：134H指数：7; 供职机构：云南省农业科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划云南省科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>

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植物病毒粒体在寄主细胞中的原位聚集特征被引量：7: 2019年; 病毒粒体的原位聚集特征是快速诊断植物病毒及研究其系统侵染的基础,但国内外对此研究和报道较少。本研究采用马铃薯Y病毒属病毒、烟草花叶病毒、番茄斑萎病毒属病毒、水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒等不同形态的植物病毒自然感染或人工接种的植株样品,比较了研磨过滤、蔗糖密度梯度离心、切片浸渍法、超薄切片与高压冷冻等不同电镜制样方法观察效果。结果表明,以本实验室发明的切片浸渍(原生质体裂解)法负染色制样与超薄切片制样透射电镜观察,可以得到线状、杆状和被膜球状植物病毒粒体在寄主细胞中的典型原位聚集特征,借此可区分不同属或种,对植物病毒的快速诊断鉴定具有重要参考价值。在此基础上,对应用植物病毒粒体原位聚集特征深入研究病毒复制、装配与运动的机制进行探讨,为植物病毒的系统侵染机理研究提供依据。; 张仲凯郑宽瑜王田田吴少政裴卫华; 关键词：透射电镜

一种番茄斑萎病毒属病毒基因及其应用: 本发明公开了一种番茄斑萎病毒属病毒即辣椒黄花环斑病毒基因序列（包括RNA或DNA分子）及其应用。所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，能够编码病毒的核壳体蛋白（N）及非结构蛋白（NSs）；或所述的病毒...; 董家红郑宽瑜张仲凯吴阔张丽珍; 文献传递

番茄斑萎病毒运动蛋白NSm的原核表达及抗体制备被引量：2: 2015年; 将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达NSm蛋白,以Ni^(2+)-NTA agarose亲和柱纯化该蛋白与His组氨酸的融合蛋白,免疫家兔制备融合蛋白多克隆抗体。Western blot检测显示,该抗体与NSm重组蛋白以及普通烟病叶中的NSm蛋白具有特异性反应。采用该抗体对TSWV感染的普通烟叶片低温超薄切片进行免疫胶体金标记,透射电镜观察发现特异性金颗粒主要定位在病叶细胞的胞间连丝中,而健康烟草叶片组织中没有金颗粒特异性标记。结果表明,该抗体可用于研究NSm在细胞中的定位。; 尚卫娜郑宽瑜董家红张仲凯洪健周雪平; 关键词：番茄斑萎病毒

番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：1: 2017年; 通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。; 郑宽瑜尚卫娜张洁郑雪董家红; 关键词：原核表达抗血清

一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用: 本发明公开了一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用。本发明的深绿木霉菌菌株，所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会...; 郑宽瑜魏治镭张仲凯苏晓霞郑雪周凤陈永对吴阔

番茄斑萎病毒属病毒非结构蛋白NSs的生物信息学分析被引量：1: 2014年; 番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒编码的非结构蛋白NSs,可能在病毒复制、转录、抑制RNA沉默中起重要作用,本文利用生物信息方法对21个Tospovirus病毒成员的NSs序列进行分析,为进一步研究NSs的功能提供参考信息。从GenBank数据库中下载NSs基因序列,用DNAMAN5.0做NSs相似性矩阵分析,发现一些Tospovirus病毒成员之间的NSs氨基酸序列相似性很低,最低仅为7.1%;用ClustalX2.1进行NSs的氨基酸多序列比对分析,发现Tospovirus病毒成员的NSs相对保守区主要位于NSs的C端的位置,高度保守的氨基酸位点共有9个;PROSITE对NSs进行模体预测分析,结果显示Tospovirus病毒NSs共有的蛋白修饰:C蛋白激酶磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和N-酰基化。此外,不同种的Tospovirus病毒NSs模体也表现出了多样性的特点。预测结果为下一步研究NSs功能奠定了基础。; 郑宽瑜董家红苏晓霞方琦郑雪张仲凯; 关键词：番茄斑萎病毒属非结构蛋白 NSS 生物信息学

单头西花蓟马总RNA提取方法的比较研究被引量：1: 2017年; Tri Pure法和RNA提取试剂盒法是目前实验室动植物RNA提取的常用方法。本试验通过对两种不同的RNA提取试剂盒与Tri Pure法进行比较,发现Trans公司研发的型号为ER501-01的Trans Zol Up Plus RNA Kit试剂盒适合提取单头西花蓟马总RNA,所得到的RNA纯度和浓度都比较高。该研究结果为通过分子手段研究蓟马等小型昆虫提供理论基础。; 徐弢苏晓霞张晓林陈永对郑雪郑宽瑜陈勇赵立华刘小烛张洁; 关键词：西花蓟马总RNA

一种哈茨木霉菌及其在防治三七根腐病制剂中的应用: 本发明公开了一种哈茨木霉菌及其在防治三七根腐病制剂中的应用。本发明的哈茨木霉菌菌株，所述的哈茨木霉菌菌株为PRWS18，保藏名称为哈茨木霉菌Trichoderma harzianum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普...; 郑宽瑜魏治镭张仲凯苏晓霞郑雪次仁措姆陈永对吴阔

番茄斑萎病毒运动蛋白NSm在植物细胞和昆虫细胞内的定位被引量：3: 2012年; 【目的】研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm的细胞定位。【方法】将NSm基因融合GFP后构建到植物双元表达载体pCHF3中,农杆菌介导浸润本氏烟叶片,同时将融合GFP的NSm基因利用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系转染昆虫Tn细胞。在激光共聚焦显微镜下观察NSm-GFP在烟草表皮细胞和昆虫Tn细胞中的定位情况。【结果】观察发现与单独表达GFP在细胞壁周围和细胞核处均匀分布不同,NSm-GFP融合蛋白会在植物细胞内扩散,能够在细胞壁边缘定位,并且在胞间连丝处呈不连续的绿色荧光小点,偶尔成对出现在相邻的两个细胞之间;NSm蛋白在昆虫Tn细胞表面产生数量众多的管状结构并向外延伸。【结论】研究结果表明NSm能够特异性定位在植物细胞的胞间连丝处,并能在昆虫Tn细胞内表达,在细胞表面产生运动蛋白小管。; 尚卫娜孟春梅郑宽瑜丁铭张仲凯洪健周雪平; 关键词：番茄斑萎病毒 NSM 细胞定位

陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特点被引量：2: 2020年; 【目的】探明陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特征,为绿色防控提供指导。【方法】调查和采集不同发病时期的莴苣类蔬菜斑萎病样品、田间可能的中间寄主杂草与作物、苗棚种苗,应用ELISA检测、电子显微镜负染色与超薄切片观察,确定陆良莴苣类蔬菜斑萎病伴随的病毒种类、侵染循环及其发生流行特征。【结果】陆良莴苣类蔬菜斑萎病的发病率在15%~36%,伴随的病毒仅有番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt Orthotospovirus,TSWV),细胞病理观察表明生菜斑萎病样品的细胞中仅分布TSWV粒体。TSWV的中间寄主有鬼针草,以及辣椒、马铃薯、烟草等作物。苗棚生菜种苗中TSWV的检出率100%。【结论】陆良莴苣类蔬菜主要病害是由TSWV侵染引起的斑萎病,TSWV在周年分布的鬼针草中形成初侵染源,通过传毒介体蓟马传播到莴苣类蔬菜种苗以及中间寄主作物辣椒、马铃薯、烟草等作物,并在夏秋蔬菜生产季节在这些作物及杂草之间相互传播,形成侵染循环。种苗带毒是陆良莴苣类蔬菜发病率高的主要原因,中间寄主植物的分布、蓟马传播与农事操作进一步加剧斑萎病的发生流行。; 张仲凯马秀英吴阔郑宽瑜裴卫华陈永对王田田吴少政; 关键词：番茄斑萎病毒侵染循环

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