赵和平
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗的免疫效力评价被引量：5
- 2007年
- 此前已构建了基于SemlikiForest病毒(SemlikiForestvirus,SFV)复制子载体的表达猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)E2基因的新型猪瘟DNA疫苗pFV1CS-E2,通过动物试验证实,该疫苗以600μg/头的剂量免疫3次,免疫猪能抵抗致死剂量猪瘟强毒的攻击。为进一步评价该疫苗在较低的免疫剂量和较少的免疫次数情况下的免疫效力,将DNA疫苗pSFV1CS-E2和空载体pSFV1CS按100μg/头的剂量,接种猪只2次,然后用致死剂量的猪瘟强毒石门株进行攻击。结果表明,pSFV1CS-E2免疫组(n=5)所有免疫猪在加强免疫后均产生了猪瘟特异性中和抗体,攻毒后所有猪只抗体迅速升高,除了短期体温升高外,未出现任何其它临床症状,部分猪出现短期轻微病毒血症,个别猪的部分脏器出现轻微病变;而空载体免疫组(n=3)猪只在攻毒前一直没有检出特异性抗体,攻毒后全都出现典型的猪瘟临床症状和严重的病毒血症,有2头猪分别于攻毒后第10和11d死亡,剖检时可见典型猪瘟病理变化。结果表明,基于甲病毒复制子载体的猪瘟DNA疫苗有望成为具有开发价值的猪瘟标记疫苗。
- 李娜赵建军赵和平孙元朱庆虎童光志仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒DNA疫苗
- 病毒特异性细胞免疫评价方法概要被引量：2
- 2007年
- 细胞免疫在控制病毒感染的过程中发挥重要作用。其中CD4+T细胞以细胞因子为媒介在抗病毒免疫中起核心作用;CD8+T细胞通过杀伤病毒感染细胞和分泌能干扰细胞内病毒复制的细胞因子等起作用。评价细胞免疫水平在病毒性疾病的诊断、预防、治疗及疫苗和药物开发过程中都有重要的意义。本文对评价细胞免疫水平的方法进行了概述。这些方法主要集中在评价特异性淋巴细胞的增殖能力、前体频率、细胞因子分泌及CD8+T淋巴细胞分化成细胞毒T细胞后的特异性的杀伤能力等。它们各有其自身的侧重点或优势,很多情况下可以综合使用几种方法,以得到更完善的结果。
- 赵和平仇华吉
- 关键词：病毒细胞免疫
- 基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立被引量：2
- 2009年
- 目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6μg/ml时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5天后进行分析相对较好。结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。
- 赵和平孙元袁远仇华吉
- 关键词：细胞免疫
- 不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性分析被引量：5
- 2008年
- 为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性,利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,wssv)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子P_(PH),构建了含有不同启动子控制下的EGFP报告基因的重组杆状病毒,分别感染Sf9昆虫细胞,利用流式细胞术检测报告基因的表达水平。结果表明,WSSV的ie1启动子和杆状病毒的mETL启动子在昆虫细胞sf9细胞中都具有较强而旱的启动子活性,能够控制报告基因早期高效表达,而P_(PH)在感染后期才表现较强活性。并且研究中发现,杆状病毒同源重复区(hr1)可以增强ETL启动子的活性。
- 王煜高辉陈川赵和平李淼孙元仇华吉
- 关键词：重组杆状病毒启动子活性流式细胞术
- 猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测被引量：12
- 2007年
- 本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^1范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR（RT-nPCR）具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染10^6TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0-14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3-4 d可从其全血中检出病毒RNA。
- 赵建军成丹李娜史子学孙元赵和平朱庆虎涂长春仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒荧光定量RT-PCR
- 基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立
- 本研究旨在建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。用终浓度分别为3μg/mL、6μg/mL、9μg/mL和12μg/mL的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核...
- 赵和平孙元袁远仇华吉
- 关键词：细胞免疫
- 文献传递
- 共表达PRRSVGP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：6
- 2008年
- 为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。
- 孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉
- 关键词：共表达
