赵刚
- 作品数：14 被引量：47H指数：5
- 供职机构：山东大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人组织型激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠AMP激活的蛋白激酶活性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究人组织型激肽释放酶(humantissue kallikrein,HK)基因对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的2型糖尿病(diabete mellitus,DM)大鼠AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性的影响。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组,即正常对照组(n=16),和高脂高糖饲料组(n=32),高脂高糖饲料组大鼠以小剂量STZ加高脂高糖饮食诱导2型DM,再将其随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒(recom-binant adeno-associated viruses,rAAV)介导的HK基因(HK组)以及报告基因beta-半乳糖苷酶(beta-galactosidase,Lacz)(Lacz组),观察12周后处死实验动物,留取心脏、肝脏、肾脏等组织。Western blot法检测HK在各脏器的表达以及AMPK的表达及其磷酸化水平(phospho-AMPK)。结果rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏组织表达,且HK组各脏器中HK蛋白表达显著高于Lacz组(均P<0.05)。Western blot检测发现,在肝脏、肾脏、心脏、骨骼肌、脂肪等脏器中,HK组和Lacz组AMPK的表达与正常对照组比较,差异无显著性意义(均P>0.05),而HK组phospho-AMPK较正常对照组显著上调(P<0.05),Lacz组phospho-AMPK与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论rAAV载体介导的HK基因能够激活2型DM大鼠主要器官AMPK的表达。
- 徐西振凃玲赵刚袁刚汪道文
- 关键词：糖尿病
- 人激肽释放酶基因对肾性高血压大鼠主动脉胶原含量的影响及其机制探讨被引量：1
- 2008年
- 目的观察重组腺相关病毒介导人激肽释放酶基因对肾性高血压大鼠主动脉胶原含量的影响及其可能的机制。方法将人组织型激肽释放酶基因(HK)克隆入重组腺相关病毒载体(rAAV)中,经三质粒共转染方法在 HEK293细胞中包装成 rAAV-HK 病毒。雄性 Wistar 大鼠24只,随机分为假手术和模型组,采用5/6肾切除的方法构建肾性高血压大鼠模型。模型组大鼠再随机分成单纯手术(n=6)、对照组(n=6)和实验组(n=6)。实验组大鼠单次尾静脉注射1×10^(11)pfU 的 rAAV-HK 病毒。分别于模型构建前、后(基因转染前)及基因转染后1～3月测大鼠尾动脉血压。基因转染3月后处死动物,取其心脏、主动脉和肾脏等脏器提取总 RNA 及蛋白质。主动脉组织切片行天狼星红染色,Western Blot 检测主动脉组织缓激肽 B_2和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)蛋白表达水平。结果 HK 基因转染后3月,实验组大鼠与单纯手术和对照组相比血压明显下降[(163±13)vs(217±16)vs(220±13)mmHg,n=6,P<0.01];主动脉中膜内胶原纤维明显减少;主动脉组织缓激肽 B_2受体蛋白表达水平明显上调;AT_1R 蛋白表达水平则明显下调。结论重组腺相关病毒介导人激肽释放酶基因能够明显降低肾性高血压大鼠血压,同时减少主动脉中膜胶原纤维含量,其机制可能与它上调缓激肽 B_2受体和下调 AT_1R 蛋白在主动脉组织的表达水平有关。
- 凃玲赵刚万槐斌邓娟娟徐西振郑常龙汪道文
- 关键词：重组腺相关病毒肾性高血压大鼠血管重构
- 缓激肽对转化生长因子-β_1诱导的肺动脉平滑肌细胞迁移的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察缓激肽对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)迁移的影响及其可能机制。方法原代培养PASMCs,应用Transwell小室检测缓激肽对PASMCs跨膜迁移能力的影响,同时应用划痕修复实验检测缓激肽对PASMCs横向迁移能力的影响。结果 TGF-β1显著增加了跨膜迁移的PASMCs数目(P<0.05),缓激肽显著减少了PASMCs的跨膜迁移(P<0.05),而B2受体抑制剂(HOE-140)对缓激肽抑制TGF-β1诱导的PASMCs的跨膜迁移作用无显著改变(P>0.05)。缓激肽显著降低PASMCs的划痕愈合指数(P<0.05),而HOE-140对缓激肽抑制TGF-β1诱导的PASMCs的横向迁移能力无显著改变(P>0.05)。结论缓激肽可以抑制TGF-β1诱导的PASMCs跨膜和横向迁移能力,而这一效应可能不通过缓激肽B2受体介导。
- 冯文静赵刚徐西振赵俊杰董若兰凃玲姚济华
- 关键词：缓激肽肺动脉平滑肌细胞转化生长因子-Β1迁移
- 银杏叶提取物对牛主动脉内皮细胞增殖及其机制被引量：6
- 2007年
- 研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)对牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)增殖的影响及其机制。分离培养BAECs,给予EGB刺激,采用噻唑蓝比色法检测细胞增殖改变,用流式细胞仪检测对细胞增殖周期的影响,同时用Western印迹检测细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达的变化。结果EGB刺激显著促进BAECs的增殖并呈剂量依赖效应,而一氧化氮合酶抑制剂可显著抑制上述效应。EGB刺激显著促进牛主动脉内皮细胞eNOS的表达,并呈剂量依赖效应。EGB显著促进BAECs增殖,其作用由EGB上调的NO介导。
- 徐西振王琳赵刚涂玲
- 关键词：银杏叶提取物细胞增殖内皮细胞
- 人激肽释放酶基因对5／6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人组织型激肽释放酶（HK）基因对5／6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应及有关机制。方法将HK基因克隆入重组腺相关病毒载体（rAAV）中，经三质粒共转染方法在293细胞（HEK293）中包装成rAAV-HK病毒。雄性Wistar大鼠（n=24）按随机数字表法分为假手术组和5／6肾切除组，1个月后5／6肾切除组再按随机数字表法分为单纯手术组（n=6，不给予病毒注射）、实验组[n=6，单次尾静脉注射1×10^11蚀斑形成单位（pm）的rAAV—HK病毒1和对照组（n=6，单次尾静脉注射1×10^11pfu的rAAV—GFP病毒）。于术前、术后1个月（基因转染前）及转染后1～3个月测大鼠尾动脉血压。转染3个月后处死动物，取其心、肾等脏器，提取总RNA及蛋白质，经RT—PCR、Western印迹及ELISA方法检测HK基因在大鼠体内表达。肾组织切片行Masson染色观察大鼠肾间质病理变化，并行免疫组化染色检测缓激肽B2受体（BKB2R）和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）在肾脏的分布。Western印迹检测肾组织BKB2R、AT1R及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-MAPK）蛋白的表达水平。结果HK基因转染3个月后，与对照组相比，实验组大鼠血压显著下降[（163±13）mmHg比（217±16）mmHg，P〈0．01）1（1mmHg=0．133kPa）。与假手术组相比，单纯手术组和对照组肾间质有较多胶原沉积，呈现明显纤维化，而实验组胶原沉积较少，纤维化程度较轻，肾小管间质损伤指数显著小于对照组（1．33±0．73比3．01±O．62，P〈0．01）。免疫组化检测发现，BKB2R和ATIR主要分布于肾小管上皮细胞。基因转染后，肾组织BKB2R蛋白表达水平显著上调（P〈0．05），而AT1R蛋白表达水平显著下调（P〈0．05）；信号传导分子p-MAPK蛋白表达水平显著下调（P〈0．05）。结论HK基因导入明显减轻5／6肾切除大鼠肾间质纤维化程度，其机制可能与其调节BKB2R和AT1R蛋白�
- 涂玲郑常龙徐西振万槐斌邓娟娟赵刚谌贻璞汪道文
- 关键词：受体受体血管紧张素
- 急性胰腺炎患者血浆D-二聚体变化与病情相关性研究被引量：13
- 2007年
- 目的了解急性胰腺炎(AP)患者早期血浆D-二聚体变化与病情严重程度的关系。方法通过临床症状、血清酶学、影像学和病理学诊断的61例 AP 患者分为重症 AP(30例)和轻症AP(31例)两组,另选择30例健康正常人作为对照组,测定血浆 D-二聚体。记录患者入院后各项实验室指标、48h Ranson 和24h APACHEⅡ评分,了解 D-二聚体含量与各项实验室指标、评分是否存在相关性。结果 (1)轻症 AP 和重症 AP 组血浆 D-二聚体分别为(0.21±0.21)mg/L 和(0.69±0.32)mg/L,与正常对照组(0.08±0.13)mg/L 比较均显著升高(P 值分别为0.029、0.000);重症 AP 组血浆D-二聚体水平高于轻症 AP 组(P=0.000)。(2)AP 患者血浆 D-二聚体水平与48h Ranson 评分、24hAPACHEⅡ评分均呈显著正相关(P 值均为0.000)。(3)AP 患者血浆 D-二聚体含量与白细胞计数、血糖、血肌酐、PT、APTT 均呈显著正相关(P<0.05);与红细胞压积、血白蛋白和血钙水平均呈显著负相关(P<0.05)。结论 AP 患者血浆 D-二聚体升高,D-二聚体含量和胰腺炎病情严重程度明显相关。
- 孔浩丁震朱先超高晓阳孙圣斌吴杰赵刚王春友侯晓华
- 关键词：D-二聚体轻症急性胰腺炎重症急性胰腺炎
- P-P42/p44在慢性肾功能不全大鼠肾组织表达特征及其作用被引量：2
- 2007年
- 目的探讨慢性肾功能不全大鼠肾组织磷酸化P42/p44丝裂原活化蛋白激酶(P-P42/p44 MAPK)的表达特征及其可能的作用。方法16只Wistar大鼠随机分成实验组和对照组,每组8只。采用5/6肾切除方法构建慢性肾功能不全大鼠模型,术后120d处死大鼠,取大鼠肾组织行石蜡切片,PAS染色观察大鼠肾脏病理改变,免疫组化和Western blot法分别检测大鼠肾组织磷酸化P42/p44丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及活性变化。结果术后120d实验组大鼠与对照组相比,出现明显的肾小球硬化和肾小管坏死等慢性肾功能不全的典型病理特征,免疫组织化学染色检测磷酸化p42/p44 MAPK黄棕色染色颗粒明显增加。Western-blot结果显示,实验组大鼠肾组织磷酸化P42/p44丝裂原活化蛋白激酶(P-P42/p44 MAPK)活性表达水平明显上调(P<0.01)。结论磷酸化P42/p44丝裂原活化蛋白激酶在慢性肾功能不全大鼠模型的肾组织中活性明显升高,可能是慢性肾功能不全时各种细胞外刺激因素介导肾脏纤维化的重要途径之一。
- 凃玲邓娟娟赵刚王琳汪道文
- 关键词：慢性肾功能不全肾切除术
- 核心蛋白聚糖基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制
- 2011年
- 目的探讨腺相关病毒介导的核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因过表达对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响和机制。方法将DCN基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)基因克隆入重组腺相关病毒(rAAV)载体中,在HEK293细胞中包装成rAAV-GFP和rAAV-DCN病毒。健康雄性wistar大鼠32只,随机分为假手术组(sham,n=8),手术组(operation,n=8),手术+rAAV-GFP病毒尾静脉注射组(GFP组),手术+rAAV-DCN基因尾静脉注射组(DCN组)。携带相应基因的病毒注射后3周行5/6肾切除术构建肾间质纤维化模型。术后第12周处死动物,肾组织切片行HE染色,天狼星红(Sirius red)染色和Masson染色。免疫组化方法检测TGFβ1和α-SMA。Western Blot检测肾组织TGFβ1、α-SMA、E-cadherin、p-smad2、smad2、samd7和p-P38 MAPK表达水平。结果DCN基因过表达显著抑制了5/6肾切除术所致血压升高和肾功能下降(P<0.05),明显减轻了5/6肾切除大鼠肾小球萎缩与代偿性肥大,肾小管扩张及管型形成。Sirius red和Masson染色表明DCN过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积(P<0.05)。免疫组化结果显示DCN过表达明显减少了肾组织TGFβ1和α-SMA的表达(P<0.05)。Western blot结果显示DCN过表达明显下调了TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK的表达,显著上调了E-cadherin and samd7的表达(P<0.05)。结论腺相关病毒介导的DCN基因过表达显著抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化而保护肾功能,其机制与下调TGFβ1、α-SMA、p-smad2、p-P38 MAPK表达和上调E-cadherin和samd7表达有关。
- 赵刚冯文静徐西振赵俊杰汪培华汪道文凃玲
- 关键词：肾间质纤维化核心蛋白聚糖转移生长因子
- 银杏叶提取物对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制被引量：5
- 2008年
- 目的:研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1 TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2(human tubular epithelial cells)转分化的影响及其机制。方法:复苏并传代培养HK2细胞,应用10μg/LTGF-β1诱导HK2细胞向间充质的转分化,给予EGB干预。应用West-ern印记法检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、NADPH氧化酶p67phox以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的表达,检测细胞培养液上清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。结果:EGB显著抑制TGF-β1诱导的E-cadherin下调(P<0.05)和α-SMA上调(P<0.05);EGB显著抑制TGF-β1诱导的p67phox表达增加(P<0.05),显著抑制TGF-β1诱导的SOD表达降低(P<0.05);同时,TGF-β1显著促进了MDA的产生(P<0.05),EGB可以部分抑制TGF-β1刺激的MDA浓度的升高(P<0.05)。结论:EGB显著抑制TGF-β1诱导的HK2细胞转分化,其机制可能是EGB抑制了TGF-β1诱导的p67phox上调并上调SOD的表达。
- 徐西振郑常龙凃玲赵刚汪道文
- 关键词：银杏叶提取物转化生长因子Β肾小管上皮细胞
- 激肽释放酶基因过表达对5/6肾切除大鼠肾脏细胞凋亡和炎症的影响和机制
- 2011年
- 目的探讨凋亡和炎症在人组织型激肽释放酶基因(hum an tissue kallire in,HK)肾脏保护中的作用和机制。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组(sham)、手术组(operation),手术+绿色荧光蛋白(GFP)尾静脉注射组(GFP组)以及手术+人组织型激肽释放酶基因组(HK组)。尾静脉注射病毒后3周,采取5/6肾切除术构建动物模型。术后第12周处死动物,肾组织石蜡切片行HE染色和M asson染色检测肾脏结构和胶原沉积。Tunnel染色和Caspase-3活性测定以检测凋亡细胞。Western blot技术检测肾组织Bcl-2、Bc l-xl、Bax、VCAM-1和MCP-1表达水平。结果 HE染色显示HK过表达明显抑制了5/6肾切除大鼠肾小管扩张和组织节段性硬化。Masson染色表明HK明显抑制了5/6肾切除大鼠肾脏胶原沉积(P<0.05)。Tunnel染色和Caspase-3活性测定结果显示HK显著减少肾脏细胞的凋亡(P<0.05)。W estern b lot显示HK明显降低了促凋亡蛋白Bax和炎症相关蛋白MCP-1和VCAM-1的表达,上调了凋亡抑制蛋白Bc l-2和Bc l-xl的表达(P<0.05)。结论 HK基因的肾脏保护作用至少部分是通过抑制细胞凋亡和炎症。机制至少包括下调促凋亡蛋白Bax和上调凋亡抑制蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达,抑制炎症相关蛋白MCP-1和VCAM-1的表达。
- 赵刚高静郑晓菲冯文静赵俊杰汪培华凃玲
- 关键词：炎症
