贾莉玮
- 作品数：14 被引量：24H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家社会公益研究专项计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 一种人蛋白C的表达方法及其专用引物与表达载体
- 本发明公开了一种人蛋白C的表达方法及其专用引物与表达载体。本发明所提供的扩增人蛋白C基因的专用引物为序列表中的SEQ ID №：1和SEQ ID №：2。人蛋白C的表达载体是含有人蛋白C基因的重组毕赤酵母表达载体pPIC...
- 章金刚贾莉玮吕茂民
- 文献传递
- 猪内源性反转录病毒感染HEK293细胞模型的建立被引量：10
- 2003年
- 目的 建立猪内源性反转录病毒感染HEK2 93细胞的模型 ,验证PERV在体外对人源细胞的感染性 ,并进一步研究PERV的生物学特性。方法 将G4 18抗性的HEK2 93细胞与猪源PK 15细胞共培养 ,6周后 ,用含有6 0 0 μg mlG4 18的选择性培养基对共培养细胞进行加压筛选 ,用以除去共培养体系中的PK 15细胞 ;然后应用PCR及RT PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果 经 6周共培养及 3周加压筛选后 ,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化 ;PCR及RT PCR鉴定表明 ,筛选后的共培养体系中已没有PK 15细胞的存在 ;PERV特异性检测方法检测显示 ,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。结论 本实验成功建立了PERV感染HEK2 93细胞的模型 ,证实了PERV在体外对人源细胞具有感染性 ;
- 吕茂民贾莉玮斯日古愣杨文斌杨姝章金刚
- 关键词：细胞模型病毒安全性异种移植
- 人蛋白C cDNA突变体的设计、克隆与序列分析被引量：2
- 2003年
- 目的 通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物。方法 针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链,经重组PCR反应将两者连接,然后将其克隆入pGEM-T载体中,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1374 hp的cDNA片段,并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pGEM-T/mhPC,序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽,获得人蛋白C突变体cD-NA的克隆。结论 已成功进行了人蛋白C cDNA的突变,获得了人蛋白c cDNA突变体的克隆,为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。
- 贾莉玮吕茂民徐斯日古愣沈永才赵保全章金刚
- 关键词：CDNA突变体克隆定点突变
- 人蛋白C转基因小鼠的建立及乳腺表达
- 2005年
- 目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物。方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC。将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4·6kb的片段(WAP-hPC-PolyA)。通过显微注射技术,将其注入昆明小鼠受精卵雄原核内;共注受精卵810枚,存活640枚,移植给28只假孕母鼠,怀孕的18只母鼠共产仔81只。结果提取鼠尾基因组DNA进行PCR检测,34只阳性,再经Southernblot检测,其中20只整合阳性;将7只整合阳性母鼠传代,产仔7日后收集乳汁,进行ELISA检测,结果均有表达。结论已成功建立了人蛋白C转基因鼠乳腺生物反应器,为hPC乳腺表达研究奠定了基础。
- 赵宝全章金刚董朝辉贾莉玮沈永才吕茂民姚站馨李伟静孙曼霁
- 关键词：转基因小鼠乳腺生物反应器乳清酸蛋白
- 重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的获得转染人蛋白CcDNA的工程细胞株,实现重组蛋白C的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清,浓缩后进行鉴定。结果经G418筛选得到了21株克隆化细胞,SDS-PAGE和Westernblot鉴定表明,表达产物含有人蛋白C,且具有抗凝活性。结论在哺乳动物细胞中已成功表达重组人蛋白C,为进一步深入研究及产业化奠定了基础。
- 贾莉玮吕茂民徐斯日古楞沈永才于群张亚东章金刚
- 关键词：抗凝活性
- 一种人蛋白C的表达方法及其专用引物与表达载体
- 本发明公开了一种人蛋白C的表达方法及其专用引物与表达载体。本发明所提供的扩增人蛋白C基因的专用引物为序列表中的SEQ ID №：1和SEQ ID №：2。人蛋白C的表达载体是含有人蛋白C基因的重组毕赤酵母表达载体pPIC...
- 章金刚贾莉玮吕茂民
- 文献传递
- 人内皮抑素基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2003年
- 目的 :克隆与鉴定人内皮抑素基因功能区片段。方法 :采用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法 ,从人胎肝总RNA中扩增人内皮抑素基因 ,将其克隆入 pGEM T载体 ,命名为pT hES ,并应用A377自动序列分析仪进行序列分析。结果 :成功克隆了人内皮抑素基因 ,经序列分析表明 ,所克隆的基因序列正确。这为利用基因工程技术生产重组蛋白奠定了基础。
- 吕茂民马平贾莉玮章金刚
- 关键词：人内皮抑素基因克隆反转录聚合酶链反应
- 重组人蛋白C及其突变体在HEK293细胞中的表达与鉴定
- 目的：表达具有生物活性的重组人蛋白C及其突变体。
方法：利用脂质体转染法，将所构建的真核表达载体pIRES/hPC和pIRES/mhPC分别转染人胚肾293细胞，通过C418抗性筛选，获得抗性细胞，利用有限稀释...
- 贾莉玮吕茂民章金刚
- 关键词：突变体人胚肾293细胞蛋白质表达抗凝活性
- 文献传递
- 重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定
- 目的在克隆蛋白C cDNA的基础上进行其在哺乳动物细胞中的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC,用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经CA18加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清...
- 贾莉玮吕茂民徐斯日古楞沈永才于群张亚东章金刚
- 文献传递
- 人蛋白C突变体转基因小鼠的建立及乳腺表达
- 2005年
- 蛋白C（PC）是体内重要的抗凝物质，对静脉血栓扩大、动脉血栓形成、脓毒血症、内毒素血症和弥散性血管内凝血等均具有预防和治疗作用。近年来研究发现蛋白C还具有抗炎作用。血栓疾病及其并发症严重威胁着人类的健康，每年约有1300万人死于血栓疾病及其并发症。脓毒症的死亡率高达30—50％，全球每天有1400人死于严重脓毒症，每年其治疗费用多达76亿美元。所以，进行PC的研究不仅具有重要的医学意义，还具有广阔的市场前景：目前，治疗用PC多为血浆中提取的浓缩剂，人血浆的PC含量较低（3～5mg／L），从血浆中提取PC数量有限，且PC浓缩剂仍存在病毒污染的可能性。因此，利用生物反应器生产重组人蛋白C（rhPC）成为人们关注的热点。
- 赵宝全章金刚李前付爱玲贾莉玮郭艳茹周建平孙曼霁
- 关键词：转基因小鼠突变体严重脓毒症动脉血栓形成血栓疾病
