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猪流行性腹泻病毒(PEDV)DR13株N蛋白和M蛋白的分离纯化: 2021年; 本研究使用Vero细胞复苏繁殖猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) DR13株,并通过蔗糖梯度超速离心、SDS-PAGE电泳纯化PEDV DR13株的N蛋白和M蛋白。结果PEDV DR13株具有致Vero细胞病变能力,TCID50为10^5.12/mL;获得的PEDV DR13株N蛋白和M蛋白的质量浓度分别为119.3μg/mL和66μg/mL,为后续研究奠定了基础。; 谢春芳胡忠俊于瑞嵩董世娟陈冰清李震; 关键词：N蛋白 M蛋白纯化

猪戊型肝炎的诊断技术研究被引量：1: 2022年; 戊型肝炎是一种广泛传播流行的人兽共患病,而我国是猪戊型肝炎和人戊型肝炎的高发流行区,故亟需建立一个兼具特异性、敏感性和稳定性的猪戊型肝炎病毒(HEV)检测诊断方法,以维持一个健康安全的养殖环境和人畜和谐相处的公共环境。现根据相关文献,对猪戊型肝炎的临床症状、实验室检测方法、诊断及评估方法等进行总结介绍,以期为建立一个准确快速的猪戊型肝炎检测诊断标准提供理论依据。; 谢春芳周佳明于瑞嵩董世娟陈冰清李震; 关键词：抗原抗体

牛磺酸对雏鸡卵黄囊吸收和免疫应答的影响被引量：9: 1997年; 潘洁谢春芳陈谊康鸿明; 关键词：牛磺酸雏鸡免疫应答

添加云芝多糖后鸡对ND、IBD免疫应答的试验被引量：1: 1997年; 谢春芳杭怡群潘洁康鸿明; 关键词：鸡病 ND IBD 云芝多糖免疫应答

分光光度法快速检测苏丹Ⅰ和Ⅳ被引量：3: 2009年; 运用分光光度计建立快速有效的检测苏丹Ⅰ和Ⅳ的方法,优化苏丹红的萃取工艺。通过全波长分光光度计检测鸡蛋及饲料中苏丹Ⅰ和Ⅳ的含量,结果显示用分光光度法检测苏丹Ⅰ和Ⅳ与HPLC法检测结果一致。; 谢春芳易建中赵志辉黄启忠顾彩菊; 关键词：分光光度计 HPLC

牛传染性鼻气管炎可视化LAMP检测方法的建立和应用被引量：8: 2018年; 根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守序列(GenBank Accession No. DQ006857.1),利用Primer ExplorerV4软件设计3对LAMP引物,通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验,建立IBRV的LAMP检测方法,并对393份临床样本进行了检测应用。结果显示,建立的IBRV LAMP方法在65℃、50 min条件下可扩增出LAMP特征性梯状条带,并可通过颜色变化判定结果。该方法可以检测到10copies/μL的质粒DNA,与nested-PCR方法的敏感性相当,比PCR方法敏感1000倍,且与牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、水泡口炎病毒等均无交叉反应。应用该方法检测301份鼻腔拭子和92份血清样本,阳性率分别为87.6%和58.8%,表明鼻腔棉拭子更适用于IBRV的临床检测。文中建立的IBRV LAMP方法具有可视化、快速、特异、灵敏性强的优势,适合基层和现场对临床样本进行快速检测,为IBR的防控提供了技术支撑。; 董世娟冯蒙于瑞嵩谢春芳陈冰清李震; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 GB基因

棘突蛋白氨基端嵌入标签(记)蛋白的重组猪流行性腹泻病毒的拯救和鉴定: 2024年; 【背景】猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是严重影响养猪业健康发展的动物传染病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)。PEDV结构蛋白之一——棘突蛋白(spike protein,S protein)负责病毒的侵染、入胞等过程,该蛋白结构和功能研究是PEDV分子生物学研究的热点。S蛋白分为两个功能域,N端的S1亚单位和C端的S2亚单位,以往研究表明PEDV DR13att毒株S1N(19-233 aa)结构域缺失,不影响DR13att毒株的存活和增殖。【目的】基于靶向RNA重组技术,在PEDV(DR13att)S1N结构域分别引入HA标签基因、抗坏血酸过氧化物酶(APEX2)基因,构建重组PEDV,考察S1N结构域能否被标签(记)蛋白或多肽替换。【方法】利用靶向RNA重组技术的PEDV反向遗传学操作平台,将转移载体p-PEDV-DR13att的S1N结构域(1-234 aa)分别替换成HA基因、APEX2基因,进行重组转移载体的构建,再分别将线性化的载体体外转录的RNA转染至m PEDV感染的LR7细胞,然后在Vero细胞上拯救重组PEDV。通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、RT-PCR检测、测序、间接免疫荧光分析(immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting检测对重组病毒进行验证,最后测定重组病毒滴度并绘制重组病毒生长曲线,探究重组病毒与亲本病毒的生长特性。【结果】构建的重组病毒经过拯救和传代,发现引入HA标签蛋白的重组猪流行性腹泻病毒r PEDV-DR13-S1N-HA(r PEDV-DSH)在P1代出现细胞病变,引入APEX2蛋白的重组猪流行性腹泻病毒r PEDV-DR13-S1N-APEX2(rPEDV-DSA)盲传至P4代,未出现细胞病变。对P4代的rPEDV-DSH、rPEDV-DSA进行RT-PCR检测、测序、间接免疫荧光分析、蛋白质印迹法验证,证实引入HA标签的重组病毒r PEDV-DSH拯救成功,而携带APEX2的重组病毒未能拯救成功。重组病毒rPEDV-DSH生长曲线表明rPEDV-DSH与亲本毒株DR13att有相似的生长趋势,但病毒增殖水平显著低于亲本毒株。; 孙如晶董世娟于瑞嵩于瑞嵩李春华李震谢春芳李春华张道敬; 关键词：猪流行性腹泻病毒

贴壁细胞不添加CO_2培养初步探索: 2009年; 将Marc145细胞分别置于5%CO2培养箱和普通培养箱,连续同步培养3代后检测细胞成活状态和增殖情况。结果显示:普通培养箱中的细胞成活率显著高于5%CO2培养箱中的细胞成活率,生长状态也优于5%CO2培养箱中的细胞,当细胞完成消化状态后不添加CO2环境中的细胞比处于5%CO2环境中的细胞增殖早,恢复快,细胞存活时间长。; 谢春芳曹伟明罗维真卢永红施建春; 关键词：贴壁细胞细胞增殖

一种提高胰酶依赖性猪流行性腹泻病毒培养滴度的方法: 本发明涉及一种提高胰酶依赖性猪流行性腹泻病毒培养滴度的方法。该方法解决了猪流行性腹泻病毒的增殖当中的问题，适用于提高胰酶依赖性猪流行性腹泻病毒培养滴度。本发明的方法与普通的培养条件相比较，胰酶依赖性猪流行性腹泻病毒培养滴...; 陈冰清李震沈媚于瑞嵩董世娟谢春芳喻利; 文献传递

猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡被引量：2: 2020年; 【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-∆ORF3(orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att(携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、DNA断裂的原位末端标记法[terminal deoxynucleotidyl transferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-∆ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-∆ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B(HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-∆ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。; 王晨阳司伏生于瑞嵩于瑞嵩董世娟谢春芳李震; 关键词：猪流行性腹泻病毒细胞凋亡

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谢春芳

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