覃扬
- 作品数：76 被引量：361H指数：10
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金美国中华医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人VIGILIN参与调控肝癌细胞H19和IGF2印记基因表达的研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨人高密度脂蛋白结合蛋白基因(VIGILIN)是否参与肝癌细胞在细胞周期中印记基因H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)表达的调控。方法通过流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2细胞周期选择周期点,采用RT-PCR、RNA干扰、实时荧光定量RT-PCR检测各周期点VIGILIN、H19、IGF2基因表达。结果①HepG2细胞周期约为20h;其中0～9h、20～28h约为S期,9～20h、28～39h约为G2/M、G1期,并选定6h、20h、43h、60h,分别代表S期中期、G1～S期、S期中期和G1期末;②细胞周期同步化后加入血清,刺激VIGILIN转录,上调VIGILIN的表达,从G2/M至G1期,逐渐增加,G1期末达高峰,S期逐渐减少;与之相反,H19的表达,在S期逐渐增加,在G2/MG1期逐渐减少,在S期中期达到高峰。而IGF2的表达也增加但没有明显的周期性。H19与VIGILIN mRNA表达呈负相关(r=-0.6941,P<0.05)。③用VIGILIN shRNA(pSIREN-VIG shRNA)重组载体转染HepG2细胞48h后,相对于3个对照组(未转染组,脂质体转染组和转染pSIREN-GFP shRNA组),实验组VIGILIN mRNA的表达受到明显抑制,此时,IGF2mRNA表达增加30.13%,H19mRNA表达减少12.08%。结论VIGILIN和H19 mRNA表达与细胞周期有关;VIGILIN参与调控H19、IGF2印记基因的表达。
- 葛亚俊谢晓砚杨博柴新娟张迎春覃扬
- 关键词：MRNA表达细胞周期
- 人肺癌中nm23等位基因缺失的研究被引量：33
- 2000年
- 目的 探讨人肺癌中nm2 3等位基因缺失与肺癌转移的关系。方法 应用Southern印迹杂交对 5 2例人肺癌组织中nm2 3 H1 和nm2 3 H2 等位基因缺失进行了研究 ,并以自身远离癌灶的肺组织作对照。结果 5 2例肺癌中 14例存在nm2 3 H1 等位基因的杂合缺失 ( 2 6.92 % )。 47例有nm2 3 H2 杂交信号的肺癌中 ,2例存在nm2 3 H2 等位基因缺失 ( 4 .2 6% )。伴有淋巴结和 /或远处转移的肺癌中 ,nm2 3 H1等位基因缺失率 ( 4 2 .86% )明显高于不伴有转移的肺癌 ( 8.3 3 % ) (P <0 .0 1) ;低分化和未分化癌nm2 3 H1等位基因缺失率 ( 4 5 .45 % )亦明显高于中～高分化癌 ( 13 .3 3 % ) (P <0 .0 5 )。nm2 3 H1 等位基因缺失与肺癌组织学类型、P TNM分期、原发肿瘤大小、部位 ,以及患者年龄等无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论 本研究结果表明nm2 3基因可能参与调控肺癌的细胞分化和转移过程 ,且nm2 3 H1 基因在肺癌转移和细胞分化中的调节作用较nm2 3 H2
- 陈军周清华覃扬孙芝琳孙泽芳刘伦旭
- 关键词：NM23基因肺肿瘤等位基因缺失
- 人vigilin基因全长编码区的分段克隆及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的为了探讨全长VIGILIN、VIGILIN的N端、VIGILIN的C端以及不同KH组合的功能,采取5分段扩增的策略克隆全长vigilin基因。方法根据vigilin基因全长编码区内的限制性核酸内切酶位点,将vigilin基因全长编码区分为5段。从意外死亡健康成人肝组织中提取总RNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pUC118载体,测序,并亚克隆至pUC118载体,对接头部位测序。结果获得8个大小不同的人vigilin基因编码区片段和全长编码区。重组全长vigilin质粒pC118/vigilin(12+345)经测序,与GenBank上登陆的人vigilin cDNA(NM:005336)序列完全一致。结论用分段克隆的方法成功获得了人vigilin基因的全长编码区。
- 杨文理武静谢晓砚魏玲覃扬
- 关键词：克隆
- 中药成分CDP对乳腺癌细胞P16,E-CADHERIN去甲基化作用的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨中药成分CDP对乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435的抑癌基因P16和E-CADHERIN启动子区CpG岛的去甲基化作用。方法培养人乳腺癌细胞系T47D和MDA-MB-435,分别用不同剂量、同一剂量不同时间的CDP和5-azacytidine(5-aza-C)处理细胞;用甲基化特异性PCR(MSP)和半定量RT-PCR,检测细胞中P16和E-CADHERIN基因的甲基化改变和RNA表达恢复情况。结果①在25、50、75和100μmol/L剂量的CDP持续作用6d后,T47D细胞P16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带减弱,在100μmol/L剂量时消失,在4个剂量CDP作用下,非甲基化特异性条带均重新出现;在75和100μmol/L浓度作用下时,T47D细胞中出现P16基因重新表达;②在50μmol/LCDP作用144h后,T47DP16基因启动子区CpG岛甲基化特异性条带仍存在;非甲基化特异性条带24h出现并持续到144h;在药物作用144h时,P16出现表达。③在MDA-MB-435细胞中,用不同剂量CDP处理或同一剂量CDP处理不同时间后,均未观察到E-CADHERIN非甲基化条带的出现,RT-PCR也未检测到E-CADHERIN基因的表达。结论在T47D细胞中,中药成分CDP可以剂量、时间依赖的形式逆转高甲基化的P16基因,而对MDA-MB-435细胞中高甲基化的E-CADHERIN基因无效,提示CDP药物存在靶分子反应多样性。
- 柴新娟栾菊杨文理张迎春葛亚俊覃扬
- 关键词：P16E-CADHERIN去甲基化T47D
- The Aberrant Imprinting of IGF2/H19 and the Methylation Status of the Differentially Methylated Region Upstream of H19 in Human Hepatocellular Carcinom
- Genomic imprinting is the preferential silencing of one parental allele due to epigenetic modifications.Insu- ...
- 覃扬
- 文献传递
- 肝癌早期预警和筛查试剂
- 本发明要解决的技术问题是提供一种检测离体样本中抑癌基因启动区启动区CpG岛甲基化情况的试剂。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了一种肝癌早期预警和筛查试剂盒。该试剂盒包括有能检测人胚肝血影蛋白基因启动区CpG岛甲基化状...
- 覃扬黄文庆魏玲沈文燕李冉刘秋英
- 靶向抑制ERK1/2信号传导通路对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981恶性表型的影响被引量：3
- 2005年
- 背景与目的肺癌的发生和发展是一个多基因调控、多阶段多步骤发生的复杂过程,目前已知信号传导异常在肺癌发生和发展各个阶段都具有重要作用。本研究旨在探讨外源性MEK1/2抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2表达和活化的影响及细胞恶性生物学行为的影响。方法将具有nm23H1基因杂合性缺失的人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981培养传代,应用蛋白印迹法(Westernblot)和免疫沉淀法,检测U0126对L9981中总ERK1/2和双磷酸化ERK1/2的表达水平,以及ERK1/2相对活性的影响;应用MTT法及改良Boyden小室法分别检测U0126对L9981体外增殖活性及侵袭能力的作用规律。结果不同浓度的U0126作用于L998120min后,随着U0126浓度的增加ERK1/2的相对活性均逐渐下降,不同U0126浓度组间磷酸化ERK1/2表达水平比较均有非常显著性差异(P<0.01);而不同浓度U0126组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.387)。相同浓度的U0126作用于L9981不同时间后,随着作用时间的延长,细胞中ERK1/2的相对活性均逐渐下降,各时间组间磷酸化ERK1/2表达水平比较有显著性差异(P<0.01);而各时间组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.689)。U0126对L9981细胞株ERK1/2相对活性的作用具有时间和剂量依赖性。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外增殖活性随之降低,不同浓度组间比较均有显著性差异(P<0.01)。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外侵袭能力随之降低。在U0126浓度为0、10和20μmol/l时三个剂量组间细胞体外侵袭能力比较无显著性差异(P>0.05),而在U0126浓度增加为40和60μmol/l时与U0126浓度为0、10和20μmol/l时细胞体外侵袭能力比较均有显著性差异(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路特异性抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株ERK1/2信号传导通路的抑�
- 李印周清华孙芝琳孙泽芳王艳萍覃扬朱文陈晓禾
- 关键词：ERK1/2U0126
- 检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的临床意义被引量：34
- 2003年
- 目的探讨检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的特异性、敏感性及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术,检测59例肺癌患者、11例肺部良性病变患者和20例健康人外周血、骨髓中CK19 mRNA表达。结果巢式RT-PCR检测技术的敏感性达到10-6。59例肺癌患者中,20例检测出外周血微转移,13例检测出骨髓微转移,其阳性检出率分别为33.9％(20/59)和22.0％(13/59),二者有显著正相关(P<0.05)。肺癌患者外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P-TNM分期均存在密切关系(P<0.05或P<0.01)。肺良性病变患者、健康人外周血和骨髓中均未检测出CK19 mRNA表达。结论肺癌患者外周血和骨髓中均存在用常规方法检测不出的微转移;应用巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血和骨髓中CK19 mRNA表达,对肺癌微转移的分子诊断具有重要的理论意义和临床应用前景。
- 周清华宫友陵覃扬孙芝琳孙泽芳刘伦旭李潞朱文
- 关键词：肺癌肿瘤转移外周血微转移骨髓微转移CK-19
- 人VIGILIN的shRNA真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞周期影响的初探被引量：2
- 2008年
- 目的构建靶向人高密度脂蛋白结合蛋白(VIGILIN)的shRNA真核表达载体,并初步探索VIGILIN与人肝癌细胞系HepG2细胞周期是否有关联。方法构建人VIGILIN的shRNA重组质粒,并将重组质粒pSIREN-VIG转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测HepG2细胞VIGILIN mRNA和蛋白的表达,并用流式细胞术检测细胞周期是否有所改变。结果1HepG2细胞转染pSIREN-VIG后,VIGILIN的表达被特异、有效地抑制。转染48h后,VIGILIN的表达从mRNA和蛋白的水平都有明显的减少;2VIGILIN表达抑制后,G2/M期细胞所占比例增加:相对于三个对照组(未转染组2.4%,脂质体转染组4.9%和转染pSIREN-GFP组6.5%),实验组(转染pSIREN-VIG组)G2/M期细胞增加到9.4%。结论我们成功的构建了能特异、有效的抑制人VIGILIN表达的shRNA表达质粒,人VIGILIN能够影响到细胞周期的正常运行,导致G2/M期阻滞。
- 谢晓砚魏玲杨文理葛亚俊覃扬
- 关键词：RNA干扰细胞周期
- 外源性FHIT基因表达对肺腺癌细胞株A549恶性表型的逆转作用
- 目的:FHIT因其在多种人类肿瘤中出现DNA结构和转录本的异常而被作为拟定的抑癌基因受到广泛的关注,但近来的研究发现FHIT基因的转录缺失不仅仅存在于肿瘤组织中,在非肿瘤组织、甚至正常组织中有时也可出现高频率的FHIT基...
- 王允周清华覃扬袁淑兰孙芝琳王燕萍陈小禾孙泽芳宋毅杨莉
- 文献传递
