袁劲
- 作品数：24 被引量：117H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律更多>>
- 重组小鼠Galectin-9在大肠杆菌中的表达以及体外功能检测被引量：1
- 2007年
- 本研究旨在构建重组Galectin-9（半乳糖凝集素9）原核表达质粒，并对表达蛋白进行纯化和功能学鉴定。
- 汪峰何文涛袁劲吴柯周鸿敏徐逸高英陈忠华
- 关键词：大肠杆菌体外小鼠原核表达质粒半乳糖凝集素
- 术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司延长小鼠移植心存活时间的机理
- 2007年
- 目的 探讨移植术前输注供者脾细胞（DST）联合应用西罗莫司（SRL）延长小鼠移植心存活时间的机理。方法 单向混合淋巴细胞培养中的刺激细胞及静脉输注的脾细胞均采用经丝裂霉素C处理后失去增殖活性的Balb／c（H-2^d）小鼠脾细胞（包括体外实验和体内实验）。（1）体外实验：分为3组，空白对照组：取正常C57BL／6（H-2^b）小鼠（136小鼠）的脾细胞作为反应细胞；SRL组：取用SRL（1．5μ·g^-1·d^-1）灌胃7d后的B6小鼠脾细胞作为反应细胞；DST＋SRL组：取行脾细胞静脉输注8d、次日予SRL（1．5μl·g^-1·d^-1）灌胃7d后的B6小鼠的脾细胞作为反应细胞。观察各组在单向混合培养中的脾细胞增殖能力。（2）体内实验：Balb／c小鼠为供者，B6小鼠为受者，建立颈部异位心脏移植模型。实验分为3组，空白对照组：单纯行心脏移植；DST组：受者移植前8d给予供者脾细胞静脉输注；DST＋SRL组：受者移植前8d给予供者脾细胞静脉输注，次日予以SRL灌胃7d（1．5μl·g^-1·d^-1）。术后观察各组移植心的存活时间、病理表现、受者淋巴细胞中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）和凋亡细胞比例的改变及同种抗原刺激后增殖活性变化。结果 体外实验中，DST＋SRL组反应细胞增殖活性平均为（13．76±2．81）％，明显低于空白对照组（28．14％±5．53％，P〈0．05）。体内实验中，空白对照组、DST＋SRL组以及DST组移植心平均存活时间分别为（8．6±0．48）d、（35±14．4）d和（4．83±0．52）d，DST＋SRL组存活时间显著延长（P〈0．05）；流式细胞术（FACS）分析显示DST＋SRL组脾细胞中CD4^＋CD25^＋Tr细胞比例平均为（3．39±0．21）％，明显高于空白对照组（1．57％±0．3％，P〈0．05）。结论移植术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司可通过清除同种反应性T细胞克隆，增加受者体内CD4^＋CD25^
- 吴轲向芙莉袁劲曾志贵周鸿敏昌盛陈忠华
- 关键词：西罗莫司
- 肾小球囊肿病一例及肝细胞核因子1β基因突变分析被引量：2
- 2009年
- 肾小球囊肿病（glomerulocystic kidney disease，GCKD）是一种特殊类型的囊肿性肾病，以肾小球囊肿形成为特征。1976年，Taxy等报道了首例GCKD病例，随后全球陆续报道50余例，其中半数以上为婴幼儿，常伴有肾功能不全或遗传性疾病；而成人病例较少，且多并发其他系统性疾病。目前国内尚无GCKD的报道。我们在对1例蛋白尿原因待查的患者进行诊治过程中发现其肾脏病理改变符合GCKD病理特点，进一步检查后诊断为特发性GCKD。
- 袁劲姚颖黎妮肖静邵菊芳代维汪道文吕永曼
- 关键词：基因突变分析肝细胞核因子肾小球囊肿病肾脏病理改变系统性疾病
- 抗HBsAg-Fab重组体在小鼠肝脏的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清和肝、肾、脾等组织标本,运用RT-PCR,ELISA和免疫组织化学染色等方法从基因和蛋白水平分析基因工程抗体人抗 HBsAg-Fab在体内的表达能力．结果:尾静脉液压注射pXXUF1-HBs-Fab组小鼠血清中证实了人源性Fab蛋白的分泌性表达,各实验组血清中表达量分别为201．3± 13．7、213．1±13．5、513．6±12．8和954．1± 12．7μg／L,并具有与HBsAg特异性结合的活性,蛋白表达与注射质粒剂量有正相关(r= 0．912,P<0．01);对照组和空白组血清中则未测到目的蛋白．实验组肝、肾、脾组织RT-PCR 检测可见肝组织中有Fd重链及κ轻链的mRNA 表达;免疫组织化学检测显示肝细胞胞质中有棕黄色阳性颗粒,且部分肾小球毛细血管腔内壁和肾脏集合管壁可见附着的Fab蛋白, 肾实质细胞及脾脏均未见Fd重链及κ轻链的 mRNA和目的蛋白表达;对照组和空白组均未检測到目的蛋白．结论:pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝脏分泌表达人抗HBsAg-Fab重组体,其表达水平与质粒DNA注射剂量存在正相关关系,并可通过肾小球滤过代谢．
- 唐莉曾志贵潘桃袁劲陈必成陈忠华陈知水
- 关键词：小分子抗体乙肝表面抗原小鼠
- Th1型免疫应答介导小鼠新月体肾小球肾炎
- 张茜廖盼丽栾弘袁劲吕永曼
- 转化生长因子β_1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响被引量：11
- 2007年
- 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法:以丝裂霉素处理的Balb/C(H-2d)小鼠脾细胞为刺激细胞,羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记的C57BL/6(H-2b)小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养(MLC)。分别设立对照组(TGF-β10 ng/ml)、低浓度组(TGF-β11ng/ml)、中浓度组(TGF-β15 ng/ml)和高浓度组(TGF-β120 ng/ml)。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性,流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素-2(IL-2)组(TGF-β15ng/ml+IL-2 100U/ml),以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果:TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度,而且随着TGF-β1剂量加大,免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时,也可使CD25+T细胞比例上调,但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后,T细胞增殖活性增强,同时CD25+T细胞比例降低。结论:TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖,并使CD25+T细胞比例增加,而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能,下调CD25+T细胞比例,说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。
- 袁劲吴轲向芙莉曾宁周鸿敏陈忠华
- 关键词：转化生长因子Β1白细胞介素-2CD25
- 论人体器官有偿捐赠的可行性及伦理学问题被引量：22
- 2005年
- 唐莉袁劲陈忠华
- 关键词：伦理学问题和法人体器官器官捐献移植器官与国际接轨
- Galectin-9对活化的CD4^＋T细胞免疫调节作用的机制研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究Galectin-9对活化的CD4＋T细胞的免疫调节作用，并进一步探讨其作用机制。方法获取野生型C57BL／6小鼠淋巴细胞，利用MACS分选CIM＋naiveT细胞，给予anti-CD3（2．5μm1）抗体、anti-CD28（5μg／ml）抗体和IL-2（100ng／ml）刺激，培养3d。将活化的CD4＋T细胞分为3组：正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9＋α-乳糖组。利用CFSE检测T细胞增殖情况，并动态观察细胞形态变化；检测CD4＋CD69＋T细胞、Thl、Th2和Thl7细胞的比例；并利用ELISA检测淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17A和TGF-β1等细胞因子的水平；利用Westernblot检测T-bet、GATA-3和ROR-γt等T细胞分化调控蛋白的变化。结果与正常对照组和Galectin-9＋α-乳糖组相比，Galectin-9组于2h时开始出现细胞形态改变，同时CD4＋CD69＋T细胞、Thl和Thl7细胞表达减少（P〈0．05），但Th2细胞无明显变化；培养上清液中IFN-γ、IL-12、IL-17A和TGF-β1的表达水平降低（P〈0．05），而IL-4和IL-10等Th2型细胞因子水平无明显变化；同时T-bet和ROR-γt的表达水平减少（P〈0．05）。结论Galectin-9抑制活化CD4＋T细胞的Thl和Thl7型免疫应答，而对Th2型免疫应答无影响，免疫调节的机制可能与其在转录水平影响Thl和Thl7特定转录因子的表达有关。
- 栾弘张茜王艻张妙陈艳许小利李杏爱刘丽丽袁劲吕永曼
- 关键词：GALECTIN-9TH2TH2TH17
- 体外分化的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可减轻小鼠皮肤移植急性排斥反应被引量：3
- 2010年
- 目的利用转化生长因子-β1(TGF-β1)体外诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞,通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间,并研究其相关机制。方法分选获取CD4+CD25-T细胞,根据诱导条件不同分为3组:对照组、无TGF-β1刺激组和TGF-β1组。检测CD4+CD25+T细胞比例,并用RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达水平。建立小鼠皮肤移植模型,于0、1、2、3 d输注上述细胞,观察皮肤移植物存活时间,并检测移植物的病理改变和受鼠外周淋巴细胞的增殖能力。结果 TGF-β1组中CD4+CD25+T细胞比例与无TGF-β1刺激组相近,但高表达Foxp3 mRNA(P<0.05)。将培养的细胞输注给受鼠后发现,输注无TGF-β1刺激组细胞的受鼠其移植物平均存活时间(mean survival time,MST)为(7.3±1.6)d,低于对照组(P<0.05);而输注TGF-β1组细胞小鼠MST为(24.1±2.5)d,较对照组和无TGF-β1刺激组明显延长(P<0.05)。病理检测亦显示TGF-β1组受鼠移植物结构完整,无明显淋巴细胞浸润。用Alamar Blue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示,TGF-β1组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制,低于对照组。进一步检测外周血中IL-4和IFN-γ的表达水平,结果显示TGF-β1组小鼠体内IL-4和IFN-γ均明显低于对照组和无TGF-β1刺激组。结论 TGF-β1可诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞,将诱导后的调节性T细胞进行过继输注可延长小鼠皮肤移植物存活时间。
- 袁劲吴轲陈忠华
- 关键词：转化生长因子-Β1调节性T细胞皮肤移植
- 2003年美国器官移植学会年会学术报道被引量：5
- 2004年
- 昌盛杜敦峰周鸿敏陈必成张鑫周洁袁劲陈忠华
- 关键词：器官移植活体供者免疫抑制剂
