蔡唯佳
- 作品数：31 被引量：153H指数：8
- 供职机构：汕头大学医学院肿瘤病理研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件被引量：6
- 2006年
- 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌细胞基因表达调控
- 高转移潜力食管癌细胞株的建立及其生物学特征被引量：2
- 2007年
- 目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下瘤组织块进行细胞培养,得到性状稳定的细胞株NMC109后,用MTT法分析细胞生长曲线,Western bloting法检测与细胞分裂增殖能力密切相关的TopoIIα表达,酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,划痕实验和Transwell体外移动实验检测细胞的移动能力。结果与母本细胞EC109相比,所获得的细胞株NMC109其增殖能力和TopoIIα表达明显增强,MMP-9的活性明显升高,移动能力明显增强。结论获得了具有高转移潜力的食管癌细胞株。
- 谢仰民周飞谢剑君蔡唯佳许丽艳李恩民
- 关键词：食管癌肿瘤侵袭肿瘤转移细胞株
- 食管癌细胞Ezrin基因转录调控区克隆及其启动子活性的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆食管癌侵袭转移相关基因Ezrin的转录调控区序列,进行启动子活性鉴定及初步的生物信息学分析。方法:利用在线程序对Ezrin基因可能的转录调控区进行GC含量和CpG岛分析以及转录因子结合位点预测;采用PCR法从食管癌细胞基因组DNA中克隆Ezrin基因-1759/+134和-726/+134区段,构建萤火虫荧光素酶报告基因表达质粒pGLB-hE(-1759/+134)和pGLB-hE(-726/+134),检测所克隆片段的启动子活性。结果:Ezrin基因5′侧翼区为高GC含量区,存在CpG岛,无典型的TATA盒,然而转录因子Sp1结合位点却无处不在。与对照质粒pGLB相比,重组质粒pGLB-hE(-726/+134)具有较强的荧光素酶活性,pGLB-hE(-1759/+134)的荧光素酶活性约是pGLB-hE(-726/+134)的2倍。结论:Ezrin基因的-726/+134区段具有启动子活性,含有Ezrin基因的核心启动子区和调节性启动子区;-1759/-726区段具有增强启动子活性的作用,含有Ezrin基因增强子元件区。
- 高书颖许丽艳崔磊郭张燕蔡唯佳孟令英李恩民
- 关键词：食管肿瘤基因表达调控
- 显微切割-TRAP-银染法对食管癌端粒酶活性的分析(英文)被引量：1
- 2002年
- 目的 探讨食管鳞癌和不典型增生的端粒酶活性 ,同时研究端粒酶活性与癌的分化、浸润、转移的关系。方法 应用显微切割 TRAP 银染法对 4 5例食管鳞癌组织、癌旁非典型增生上皮及切缘的正常粘膜上皮进行定点端粒酶活性的检测。结果 食管正常粘膜上皮的端粒酶活性阳性率为 5 % (2 / 40 ) ,非典型增生上皮为 79 3% (2 3/ 2 9) ,癌组织为 82 2 %(37/ 4 5 )。非典型增生上皮的端粒酶活性明显高于正常上皮 ,差异有高度显著性 (P <0 0 1)。 2 8例有淋巴结转移者的癌组织中有 2 6例可检测到端粒酶活性 ,阳性率为 92 2 % ,明显高于无淋巴结转移者 (6 4 7% ,11/ 17) ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。不同分化程度的癌组织其端粒酶活性差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 食管鳞癌及其癌前病变端粒酶活性均明显增高。癌组织端粒酶活性与淋巴结转移有关 。
- 李淳梁英锐吴名耀许丽艳蔡唯佳
- 关键词：食管癌端粒酶活性食管肿瘤癌前状态
- HeLa细胞中ezrin基因主要转录调控区的定位分析被引量：5
- 2008年
- 目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测启动子的转录活力,并利用在线分析程序预测ezrin基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果:获得一系列含不同长度ezrin基因5′侧翼区序列的重组pGLB质粒;当ezrin基因5′侧翼区序列从-1324截短到-890时,转录活力降低约80%,从-146截短到-32时,转录活力几乎完全丧失;在-1324/-890和-146/-32区,存在大量的Sp1转录因子结合位点。结论:在HeLa细胞中,ezrin基因的-1324/-890和-146/-32区是主要的转录调控区。Sp1可能是调控基因转录的重要转录因子。
- 高书颖许丽艳崔磊周飞郭张燕蔡唯佳李恩民
- 应用显微切割TRAP法对食管癌端粒酶活性进行分析被引量：11
- 2002年
- 目的 探讨端粒酶活性在食管粘膜上皮不典型增生、食管鳞癌中的变化 ,同时研究端粒酶活性与癌的分化、浸润、转移的关系。方法 应用显微切割 TRAP 银染法对 4 5例食管鳞癌组织、癌旁非典型增生上皮及切缘的正常粘膜上皮进行定点端粒酶活性的检测。结果 食管正常粘膜上皮的端粒酶活性阳性率为 5 % (2 / 4 0 ) ,非典型增生上皮为 79 3% (2 3/ 2 9) ,癌组织为 82 2 % (37/ 4 5 )。非典型增生上皮的端粒酶活性明显高于正常上皮 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。同一癌组织中不同分化程度、不同浸润深度癌巢的端粒酶活性差异无显著意义 (P >0 0 5 )。有淋巴结转移者癌组织端粒酶活性明显高于无淋巴结转移者 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论 食管鳞癌及癌旁不典型增生组织端粒酶活性明显增高。癌组织中端粒酶活性与分化程度无关 。
- 李淳吴名耀梁英锐许丽艳蔡唯佳
- 关键词：端粒显微外科端粒酶
- 食管癌细胞NGAL基因-416～+84区段存在TPA反应元件
- 2005年
- 目的本文旨在对NGAL基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究。方法(1)采用PCR法从食管癌细胞中克隆NGAL基因5′侧翼区416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE,构建pGLB416和pGLE416荧光素酶报告基因表达载体;(2)将pGLB416和pGLE416分别同pRLTK共转染食管癌细胞EC109;(3)用TPA刺激转染的EC109,检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定NGAL基因5′侧翼416～+84区是否存在TPA反应元件,同时进行生物信息学分析。结果无论是pGLB416还是pGLE416,与pRLTK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,P<0.01),约分别升高46.82和46.41倍;而TPA刺激组与没有TPA刺激组相比,pGLB416和pGLE416转染EC109细胞荧光素酶活力分别显著升高了5.17倍和7.37倍(t检验,P<0.01)。生物信息学分析显示,NGAL基因5′侧翼416～+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件。结论食管癌细胞NGAL基因5′侧翼416～+84区段存在着TPA反应元件。
- 许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：NGAL基因食管癌细胞基因表达调控
- NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体的构建与鉴定被引量：6
- 2004年
- 背景与目的:构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5’侧翼转录调控区不同长度片段G0-G6(-1431-+84)。PCR产物经pGEM-Teasy转载,再定向亚克隆插入pGL3-Basic。重组子通过特异限制性内切酶切割,琼脂糖电泳予以鉴定。结果:成功构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体7个,pGLB-G0-G6。结论:为借助于双荧光素酶报告基因检测系统研究确定NGAL基因5’侧翼转录调控区转录调控元件的分布特点以及转录调控元件与转录调控蛋白之间相互作用的性质提供了基本实验条件。
- 许丽艳李恩民蔡唯佳沈忠英曾毅
- 关键词：NGAL基因基因表达调控荧光素酶报告基因
- 人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用被引量：5
- 2003年
- 以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验?
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳韩溟吴炳礼张灿沈忠英曾毅
- 关键词：人食管癌CDNA文库
- 放疗对肿瘤病人T细胞免疫功能和血清蛋白含量的影响
- 1994年
- 本文报道54例肿瘤病人局部放疗对T淋巴细胞免疫功能及血清蛋白含量的影响,为临床辐射防护及治疗提供参考。 材料和方法 一、病人:汕大医学院第一附院肿瘤放疗病人,
- 宋永玲罗庆环蔡唯佳陈世坚李德锐
- 关键词：肿瘤T细胞放射疗法免疫功能
