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类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中膜联蛋白A2磷酸化修饰增强基质金属蛋白酶9的活性被引量：3: 2015年; 目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显著下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作为细胞模型,采用2型胶原蛋白刺激法间接磷酸化RAFLS中的ANXA2。实时定量PCR(qRT-PCR)分析ANXA2磷酸化对RAFLS细胞中MMP-2和MMP-9表达的影响,明胶酶谱实验观察ANXA2活化对RAFLS中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果 qRT-PCR结果提示ANXA2磷酸化修饰对RAFLS中MMP-2和MMP-9的水平无显著影响,明胶酶谱实验显示ANXA2磷酸化修饰能够增强MMP-9的活性。结论通过胶原蛋白刺激法间接促进RAFLS中ANXA2的磷酸化修饰,显著增强MMP-9的活性。; 赵薇穆楠舒震张昭张伟; 关键词：类风湿性关节炎膜联蛋白A2 基质金属蛋白酶9 明胶酶谱

类风湿性关节炎滑膜细胞中DDR2相互作用蛋白的筛选被引量：1: 2015年; 目的筛选盘状结构域受体(discoidin domain receptors 2,DDR2)的相互作用蛋白。方法原代培养类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)。用人DDR2过表达腺病毒(Ad5-DDR2)感染FLSs,上调DDR2的表达。采用Ⅱ型胶原诱导的方法活化FLSs细胞膜上的DDR2;提取细胞总蛋白,通过小鼠来源的DDR2抗体免疫沉淀FLSs中的DDR2蛋白复合物;双向电泳分离抗原抗体复合物,质谱分析确认DDR2活化前后的差异蛋白。结果 Ad5-DDR2感染RA FLSs后,Westernblot结果显示细胞中DDR2表达水平显著上调。双向电泳分离DDR2免疫沉淀复合物,考马斯亮蓝染色显示胶原刺激前后,DDR2免疫复合物存在7个差异蛋白点。质谱分析及生物信息学分析显示,DDR2相互作用蛋白主要包括波形蛋白(vimentin)、膜脂联蛋白A2(Annexin A2)、免疫球蛋白和肌动蛋白等。结论筛选获得了两个可能与RA病程相关的DDR2相互作用蛋白——波形蛋白和膜脂联蛋白2,为DDR2-MMPs通路作用机制的阐明奠定了基础。; 赵薇董晓薇舒震徐玉金张伟; 关键词：滑膜成纤维细胞盘状结构域受体2 相互作用蛋白

重组人半乳凝集素-1的原核表达、纯化及生物活性检测: 2010年; 目的:在大肠杆菌中表达半乳凝集素-1(galectin-1),并进行纯化及生物活性检测。方法:将人半乳凝集素-1基因克隆至带有His融合标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western印迹鉴定,并用红细胞凝集试验检测其生物学活性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定表明重组表达质粒pQE-30-Galectin-1构建正确;重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶形式表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,且具有良好的红细胞凝集活性。结论:在大肠杆菌中表达了重组人半乳凝集素-1,且具有良好的生物活性。; 李晶贺丽清舒震侯建伟陈霖徐玉金张伟张英起; 关键词：原核表达纯化

血管紧张素1-7改构体对A549细胞生长的抑制作用: 2012年; 目的:以D型氨基酸替代的方式和C端及N端改构的方式构建2种能够抵抗蛋白酶降解的血管紧张素Ang1-7异构体小肽血管紧张素改构体1和2,对其抗肿瘤细胞系A549活性进行初步研究,以期为长效型Ang1-7改构类抗肿瘤药的应用提供理论依据。方法:HPLC法检测2种改构体抗酶降解的能力;用带荧光标记的Ang1-7对A549细胞进行药物亲和实验,并用无标记的药物拮抗这种配体亲和;用MTT法检测Ang1-7及2种改构体对A549细胞增殖的影响。结果:2种改构体均能抗血管紧张素转化酶、中性内肽酶、亮氨酸内肽酶的降解;带荧光标记的Ang1-7能够和A549细胞结合,且这种结合可以被无标记的2种改构体竞争性拮抗;Ang1-7和2种改构体能抑制A549细胞增殖。结论:构建了能够抵抗酶降解,在体外能结合于A549细胞表面并抑制A549细胞增殖的2种Ang1-7改构体小肽,为该小肽进一步的体内抗癌研究及应用奠定了基础。; 郭瀚文舒震王增禄薛晓畅李萌张伟张伟; 关键词：血管紧张素1-7 改构体 A549细胞系

重组人胸腺素β4二串体蛋白的原核表达、纯化及生物活性被引量：1: 2012年; 目的:获得具有生物学活性的重组人胸腺素β4二串体蛋白(Tβ4②)。方法:人工合成人Tβ4全长基因,构建Tβ4②基因,并将该基因克隆入载体pET-22b(+)中,转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经疏水作用层析纯化重组Tβ4②蛋白,采用Western印迹鉴定表达产物,并对其进行生物活性检测。结果:表达和纯化了Tβ4②蛋白,重组人Tβ4②在体外可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。结论:重组人Tβ4②具有与化学合成Tβ4相同的功能,并有更高的生物学活性。; 徐天娇张昭舒震徐玉金赵薇李萌张伟张伟; 关键词：胸腺素Β4 纯化活性检测

PD-1核心启动子的获得及活性鉴定: 2010年; 目的:构建PD-1(programmed death receptor 1)全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测。方法:通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性。结果:经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确(与GenBank报道一致),酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性。结论:构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础。; 侯建伟秦鑫李晶舒震陈霖徐玉金赵薇张伟张英起; 关键词：PD-1 核心启动子转录调控

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1: 2010年; 目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。; 舒震侯登勇李晶侯健伟徐玉金陈琳张伟张英起; 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体

新基因C1orf63功能的初步研究: 2011年; 目的检测C1orf63基因在肝癌和癌旁组织中的定位,以及C1orf63在多种人肝癌细胞系和人胃癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平;检测干涉C1orf63后对人胃癌细胞MKN28的细胞周期的影响。方法免疫组化染色法检测C1orf63基因在组织中的定位;Real-time PCR和Western blot分别检测C1orf63基因在细胞中的表达;脂质体转染法将干涉片段转染至MKN28细胞中,Real-time PCR和Western blot法筛选有效干涉片段;流式细胞术检测C1orf63干涉后对MKN28细胞的细胞周期的影响。结果 C1orf63在肝癌和癌旁组织细胞中都有胞浆表达,在MKN28细胞中表达量较高,在MKN45细胞中表达量较低;成功筛选出C1orf63基因的有效干涉片段;C1orf63干涉后,胃癌细胞MKN28发生G1期阻滞,经统计学分析,C1orf63干涉后MKN28细胞增殖指数降低(P<0.05)。结论 C1orf63在人肝癌和癌旁组织细胞胞浆中都有表达,在MKN28细胞中表达量最高;干涉C1orf63基因后,可使MKN28细胞发生G1期阻滞,为该基因功能的后续研究奠定了基础。; 何颖郝强李维娜舒震张阔金亮亮张伟张英起; 关键词：MKN28 RNAI 细胞周期

辐射对体外培养MC3T3-E1成骨前体细胞增殖和分化的影响: 2014年; 目的观察60Coγ射线对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖和分化能力的影响。方法 MC3T3-E1细胞接种24 h后进行60Coγ射线照射,单次照射剂量分别为0、4、8 Gy。辐射后第1、3、5、7天,采用噻唑蓝比色法检测细胞的增殖能力;辐射后第12天,用黏胶纤维红染色法检测细胞的胶原分泌情况;第16天,用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞成骨相关基因mRNA的表达;第28天,采用茜素红染色及定量分析检测细胞基质的矿化能力。结果与对照组(0 Gy)相比,4、8 Gy剂量的射线可以明显降低MC3T3-E1细胞的增殖,并下调其Osterix和骨钙素基因的表达;8 Gy剂量的射线可以明显抑制细胞的胶原分泌和基质矿化能力。结论 60Coγ射线可以降低MC3T3-E1细胞的增殖、胶原分泌及基质矿化能力,并下调其成骨相关基因表达,且随辐射剂量增加,其作用增强。; 李玉梅赵铱民查年保舒震张松; 关键词：成骨细胞 Γ辐射细胞分化基因表达

miR-10b对滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及分子机制被引量：4: 2018年; 目的:探讨miR-10b对类风湿性关节滑膜成纤维细胞(RA-FLS)炎性因子分泌、增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法:首先,分离原代培养FLS细胞并进行microarray,筛选RA和OA中差异表达的miRNA分子。然后,用real-time PCR对筛选得到的结果进行验证,进而通过生物信息学分析、细胞转染等方法明确miR-10b在FLS细胞中下调的分子机制。最后,采用MTT比色法、划痕实验和Transwell实验等检测miR-10b对其FLS细胞增殖、侵袭和迁移水平的影响。结果:与OA FLS相比,芯片筛选发现176条miRNA在RA-FLS中上调,204条下调;其中,miR-10b在RA-FLS细胞中受肿瘤坏死因子(TNF-α)等多种炎性因子以NF-κB依赖的方式进行调控;miR-10b的下游靶基因为TAK1和TLR4,通过对这两个靶基因的调控,miR-10b一方面可以促进TNF-α的分泌和NF-κB的活化入核,从而激发TNF-α→NF-κB→miR-10b→TNF-α/NF-κB环路;另一方面促进FLS表面TLR4的表达以及LPS对于FLS的刺激作用,激发LPS→NF-κB→miR-10b→TLR4环路。此外,miR-10b的下调可促进FLS细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:miR-10b在RA-FLS细胞中显著下调,其通过参与信号环路的调节可影响FLS细胞的炎性细胞因子分泌及其增殖、侵袭和迁移。; 褚楚穆楠顾锦涛黄同列舒震赵金康郑朝晖张伟薛晓畅; 关键词：类风湿性关节炎 MICRORNA MIR-10B 成纤维样滑膜细胞

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