目的利用微载体规模化培养Vero细胞制备肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)灭活疫苗,并检测其免疫原性。方法利用免疫荧光法检测从患手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)伴发重症脑炎患儿粪便样本中分离鉴定的EV71毒株KC414134的特异性;用微载体规模化培养Vero细胞制备KC414134,50 KD超滤膜过滤,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,经β-丙内酯灭活后,与氢氧化铝佐剂混合,制备灭活疫苗,经皮下免疫昆明小鼠3次,末次免疫后1周检测血清中总抗体和中和抗体效价。结果特异性荧光分布在细胞质中,表明分离的KC414134为EV71。微载体规模化培养Vero细胞制备得到大量病毒,纯化后未获得理想纯度的病毒颗粒,但病毒灭活完全;灭活疫苗免疫小鼠后,获得了较高效价的总抗体和中和抗体。结论利用微载体规模化培养Vero细胞成功制备了具有较高免疫原性的EV71灭活疫苗,为后期灭活疫苗的开发奠定了基础。
肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因。非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制。2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关。一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染。本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述。
