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猪流感RT-PCR诊断方法的建立被引量：3: 2009年; 根据GenBank上发表的多株猪流感病毒(SIV)序列,在保守区域设计1对引物,并对RT-PCR反应条件进行优化,建立了可检测出多种亚型猪源流感病毒的RT-PCR方法。通过对反应产物测序分析,与预期结果相符,证明该方法具有很强的特异性;该方法可以检测出约1个TCID50的猪流感病毒,显示较高的敏感性。通过对12份临床样品进行检测,结果发现:该方法和其他两种方法分离病毒符合率相当。本研究建立的猪流感RT-PCR诊断方法具有高特异性和敏感性,适用于SIV的诊断应用和推广。; 陈坚刘业兵张磊罗俊宁宜宝; 关键词：猪流感 RT-PCR

猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ株、GD株全基因组序列测定与分析: 2010年; 利用RT-PCR方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北京分离株(BJ株)、广东分离株(GD株)各9条基因片段,并将这9个片段分别克隆于PGEM-T-easy质粒载体上进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSVBJ株和GD株的全基因组cDNA(GenBank:EU825723,EU825724)。测序结果表明,BJ株和GD株基因组全长分别为15340和15336bp,各包含9个开放式阅读框,5′UTR都含有189nt,3′端URT分别含有170nt、166nt,其中各包含20ntPoly(A)、16ntPoly(A)。基因组序列分析结果显示,BJ株和GD株与ATCCVR-2332的核苷酸同源性分别为88.9%和89.0%,与高致病性PRRSV毒株JXA1的核苷酸同源性分别为99.0%和99.4%,与PRRSV毒株HuN的核苷酸同源性分别为98.8%和98.9%。; 罗俊刘业兵宁宜宝陈坚; 关键词：PRRSV 基因组

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育: 本发明涉及一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育。本发明是将由我国分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征野毒株经过全面鉴定后，再将其在Marc145细胞中连续传代后使其毒力减弱获得弱毒疫苗株GDr株病毒...; 宁宜宝刘业兵李嘉爱陈坚赖月辉郑杰张磊罗俊韩明远沈青春张志刚; 文献传递

双重RT-PCR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒被引量：4: 2010年; 为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIVM基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法。检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345bp)和PRRSV(520bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV2种病毒混合液的最小检出量分别为102EID50/0.1mL和103TCID50/0.1mL。应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒。证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测。; 罗俊刘业兵陈坚宁宜宝; 关键词：猪流感病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重RT-PCR

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育: 本发明涉及一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株GDr株的致弱培育。本发明是将由我国分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征野毒株经过全面鉴定后，再将其在Marc145细胞中连续传代后使其毒力减弱获得弱毒疫苗株GDr株病毒...; 宁宜宝刘业兵李嘉爱陈坚赖月辉郑杰张磊罗俊韩明远沈青春张志刚

猪繁殖与呼吸综合征病毒7个分离株全基因序列测定及遗传进化分析被引量：7: 2012年; 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2006年～2009年在我国部分地区分离鉴定的7株PRRSV分别进行9段基因片段扩增,测序分析表明,获得的病毒全基因序列与PRRSV JXA1变异株高度同源。并与GenBank中登录的其他70株PRRSV全基因序列进行遗传分析,根据构建的遗传进化树分析表明,中国大陆PRRSV分离株包含美洲型和欧洲型,美洲型可分为3个亚群,亚群1主要为以JXA1株为代表的病毒株,本研究中的7个分离株均为亚群1,其GP5主要中和抗原表位高度变异;亚群2主要为以CH-1a株为代表的病毒株;亚群3主要为以VR-2332株为代表的病毒株。欧洲型病毒株BJEU06-1、NMEU09-1分属于不同亚型。本实验为深入研究该病毒的遗传与变异及其分子流行病学研究奠定基础。; 罗俊刘业兵姜晓晨宁宜宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因分子流行病学

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罗俊