缪琳
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽高校省级自然科学研究基金更多>>
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- 人microRNA149抑制表达慢病毒载体的构建及对黑色素瘤细胞增殖及迁移的影响
- 2017年
- 目的构建人microRNA149(Hsa-miR-149)抑制表达慢病毒载体,并探讨抑制miR-149表达对黑色素瘤Mel-RM细胞增殖及迁移的影响。方法由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-149序列,设计合成其引物序列,通过退火反应获得双链DNA寡核苷酸片段,与载体p BS-h U6-1连接,将连接后的载体与FG12连接,经测序鉴定后获得重组慢病毒载体;将重组慢病毒质粒分别与包装辅助质粒共转染至293T细胞中,包装产生病毒,进行病毒滴度测定,再用包装后的病毒感染Mel-RM细胞,利用实时荧光定量PCR法检测miR-149表达水平。同时用MTT法及细胞迁移实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果成功构建了抑制miR-149表达的慢病毒载体,测序证实了所插入的基因序列正确。在荧光显微镜下观察到转染后的297T细胞表达大量绿色荧光蛋白,收集病毒,用梯度滴定法测得的重组载体病毒滴度为3.2×1010TU/L。将病毒感染Mel-RM细胞显示可有效降低miR-149的表达水平(P<0.05)。MTT法结果显示与感染空载FG12病毒的对照组相比,感染抑制miR-149表达重组质粒的实验组中活细胞数明显减少(P<0.05)。细胞迁移实验结果显示与对照组相比实验组明显抑制了Mel-RM细胞的迁移(P<0.001)。结论成功构建抑制miR-149表达的慢病毒载体,抑制miR-149的表达可以抑制Mel-RM细胞的增殖和迁移。并为后续进一步研究miR-149对黑色素瘤细胞发生发展的影响提供依据。
- 王佩佩王道月轩菡陈振东缪琳
- 关键词：慢病毒载体增殖迁移
- 线粒体内膜蛋白表达对肝癌细胞生物学作用研究被引量：1
- 2018年
- 目的线粒体的功能取决于线粒体的膜系统,而线粒体内膜的形态由近期发现的线粒体接触位点复合物(mitochondrial contact site and crista organizing system,MICOS)所调节,MICOS复合物的突变可改变嵴的形成,导致线粒体功能障碍。本研究采用慢病毒shRNA靶向敲低MICOS复合物亚基蛋白-线粒体内膜蛋白Mic19及Mic60表达,并研究敲低Mic19和Mic60对肝癌细胞生物学作用的影响。方法根据NCBI中的序列设计、构建并包装敲低Mic19及Mic60的重组慢病毒,收集被病毒上清感染后经嘌呤霉素筛选得到的肝癌HepG2阳性细胞,并以空白组、空载pLKO.1慢病毒质粒组作为对照。采用蛋白印迹法检测Mic19及Mic60蛋白的表达,以筛选敲低效率最高的稳定细胞株。采用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,观察敲低Mic19及Mic60蛋白表达对肝癌细胞生物学行为的影响。结果 Mic19敲低组中蛋白相对表达量shRNA Mic19-1(0.579±0.042)和shRNA Mic19-2(0.524±0.111)均低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P<0.01。Mic60敲低组蛋白相对表达量shRNA Mic60-1(0.172±0.107)、shRNA Mic60-2(0.269±0.027)明显低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P<0.01。生长曲线表明,Mic19敲低组至感染第36h时的吸光度(A)值低于对照组,均P<0.05;Mic60敲低组至感染第12h时的A值显著低于对照组,P<0.01。划痕实验表明,至第48hMic19敲低组细胞迁移距离为(286.8±38.97)μm,Mic60敲低组细胞迁移距离为(214.6±41.64)μm,与空白组(500.8±25.6)μm或空载组(487.3±31.37)μm相比差异均有统计学意义,均P<0.01。在不铺胶的Transwell迁移实验中,Mic19敲低组穿膜细胞数为(440.4±65.35)个/低倍视野,Mic60敲低组穿膜细胞数为(235.2±21.3)个/低倍视野,均少于空白组(574.8±36.4)或空载组(574±53.95)个/低倍视野,均P<0.01。在铺胶的侵袭实验中,Mic19敲低组穿
- 王道月王佩佩轩菡陈振东缪琳
- 关键词：慢病毒增殖迁移
- 细胞分化与子宫颈癌被引量：1
- 2014年
- 分化障碍在子宫颈癌鳞癌发病机制中作用至关重要,本文就上皮细胞分化的进程、特异分子标识、调控程序加以总结;并对ΔNp63α、ITCH、Notch1、miRNA的异常表达在鳞状上皮细胞分化障碍致细胞癌变中的机制加以综述。
- 周颖缪琳程勇赵卫东
- 关键词：细胞分化子宫颈癌P63
