粟永萍
- 作品数：583 被引量：1,964H指数：19
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金重庆市科学技术委员会院士基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 一种改良的质粒DNA的快速提取方法被引量：9
- 1999年
- 目的：建立一种确实有效的更实用的小量质粒DNA的提取方法。方法：将一含有目的质粒的大肠杆菌扩增后采用改良后的方法提取质粒DNA，然后采用紫外分光光度计测定含量，并且进行酶切。结果：每毫升原细菌培养物质粒DNA的产量明显增高，且酶切效果极好。结论：改良后的质粒DNA提取法具有速度快、收获量多、纯度高、经济又方便等优点，适合于应用与推广。
- 刘贤华白晓军胡川闽王军平粟永萍
- 关键词：质粒DNA分子生物学
- VEGF_(165)正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节被引量：6
- 2001年
- 目的构建 VEGF_(165)(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞 VEGF 在 mRNA 和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将 VEGF_(165) cDNA 从 pGEM-hVEGF_(165)克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒 pCDNA_3中,构建VEGF_(165)正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和 Sanger 双脱氧终止 DNA 测序法证明 VEGF_(165)正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将 VEGF_(165)正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用 RNA 斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测 VEGF mRNA 和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及 DNA 测序表明 VEGF_(165)正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后 VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P<0.05 vs 对照组,31.6%),转染反义表达载体后 VFGF mRNA 和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P<0.05 vs 对照组).结论成功地构建了 VEGF_(165)正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.
- 刘都户张渭粟永萍张学庸黄裕新
- 关键词：VEGF血管内皮生长因子遗传学胃肿瘤
- 通过基因芯片筛选创伤修复差异表达基因
- 2006年
- 目的通过基因芯片筛选同真皮间充质干细胞相关的创伤修复差异表达基因。方法利用贴壁生长的特性分离大鼠真皮间充质干细胞,用Tripure提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。PCR扩增已构建抑制消减杂交差异表达文库中485个克隆的插入片断,送北京博奥制作基因芯片。提取的RNA反转录后分别同芯片杂交,找出在细胞水平和组织水平同时高表达的克隆。将这些克隆测序,进行生物信息学分析。结果分离的大鼠真皮间充质干细胞呈纺锤形,在体外显示多向分化潜能。抽提伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA,反转录后和基因芯片杂交,发现可能同创伤愈合相关的13条基因,其中热休克蛋白70(HSP70),基质金属蛋白酶3(MMP3),白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)等可能在创伤愈合中有重要意义。结论抑制消减杂交和基因芯片结合是筛选差异表达基因的一种有效方法。伤口液刺激前后dMSCs中差异表达基因的发现能为从基因水平探讨dMSCs参与创伤愈合的分子机制提供新的研究靶点。
- 江德鹏向静文亮粟永萍屈纪富冉新泽
- 关键词：基因芯片干细胞基因
- 黄酮类化合物对急性贫铀中毒的促排解毒作用初探被引量：5
- 2009年
- 为了寻找对急性贫铀中毒具有促排及较好解毒作用的黄酮类化合物,给予Wistar大鼠贫铀,20mg/kg体重,立即给予含邻苯二酚基团的黄酮类化合物(包括QU、F1、F2、T1、T2、MY、BA),10mg/kg体重,连续3d,并设邻苯二酚类化合物8102及DMSO作为实验对照。观察大鼠在3d内的死亡率;收集72h尿液,取血液和一侧肾脏,测定铀含量,并进行肾功能检测和肾脏等组织病理观察。结果发现,急性贫铀损伤组死亡率为30%;使用促排剂后,8102组和F1组死亡率为0;T1、T2和DMSO组死亡率为20%。T2组尿铀含量增加,血铀含量减少,促排铀效果明显优于其它各促排剂(p<0.05),但肾脏铀含量增加;T1组次之,8102组肾脏铀含量降低。给予8102后,可使大鼠血清尿素氮和肌酐浓度大大降低,且能下降到与正常组相近的水平(p<0.01)。F1组次之,但降低幅度不如8102显著。F2、T1和T2组的肌酐浓度也显著降低。其余各组肾功能下降不显著。病理观察发现,T2组肾脏无明显损伤;8102和T1次之;F1和QU组肾损伤较重。这些结果说明,T2促排铀效果及对贫铀敏感器官的保护最好,并可改善肾功能,应具有作为贫铀促排剂的潜能。T1的效果次于T2。
- 李蓉刘晶任泂杨峥嵘艾国平徐辉粟永萍程天民
- 关键词：贫铀促排解毒黄酮类化合物
- 大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆和鉴定大剂量辐射前后大鼠空肠上皮细胞IEC 6差异表达基因 ,为探索肠上皮细胞辐射损伤修复的分子机制提供线索。方法 IEC 6细胞经 3 5Gyγ射线照射后由抑制性消减杂交 (SSH)方法和T/A克隆技术进行差异表达基因消减cDNA文库的构建 ,用反向Northern杂交法对库中的EST序列进行筛选 ,挑取阳性克隆测序 ,和GenBank比对后挑选有限克隆进行正向Northern杂交进行验证。结果 扩增消减杂交cDNA文库得到约 2 0 0 0个克隆 ,随机选取 96个白色克隆进行PCR扩增 ,用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选得到 15个阳性克隆 ,代表 12个基因的转录产物 ,部分基因功能已经明确 ,涉及细胞骨架、细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 ,另外还获得一新的cDNA序列。结论 SSH法建立了IEC 6细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,一次获得多条差异显示EST片段 ,基因种类涉及细胞骨架 ,细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 。
- 王锋超高京生粟永萍徐辉王军平艾国平苑晓燕楼淑芬刘晓宏章波黄跃生蒋建新
- 关键词：IEC-6抑制性消减杂交基因文库
- 人脐血源性MSCs成骨诱导分化后对DCs的免疫抑制研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨人脐血源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from umbilical cord blood,UCB-MSCs)经成骨诱导分化后,对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的分化、成熟及免疫功能的影响。方法对UCB-MSCs通过细胞形态、表面标记及成骨诱导分化能力进行鉴定;在外周血单核细胞培养体系中加入GM-CSF+IL-4+TNF-α,刺激DCs诱导分化及成熟;收集与成骨诱导分化前后UCB-MSCs共培养的DCs,流式细胞仪检测DCs免疫表型的表达情况;将成熟DCs作为刺激因素,外周血淋巴细胞作为反应细胞,3H-TdR标记β液体闪烁计数仪检测与成骨诱导分化前后UCB-MSCs共培养后,DCs刺激淋巴细胞增殖能力的变化。结果人UCB-MSCs成骨诱导分化后能抑制DCs表面CD40、CD80、CD83、CD86和MHC-II的表达,上调CD14的表达;DCs具有明显刺激淋巴细胞增殖的功能,而UCB-MSCs成骨诱导分化后能显著抑制DCs刺激的淋巴细胞增殖。结论成骨诱导分化的UCB-MSCs在体外可抑制同种异体DCs的分化、成熟及免疫功能,为UCB-MSCs作为同种异体源性种子细胞在骨组织工程中的应用提供了依据。
- 王蒙杨媛史春梦粟永萍
- 关键词：免疫抑制骨组织工程
- 移植dMSCs向放创复合伤创面优势分布的机制研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨静脉输注的真皮多能干细胞(dermal multipotent stemcells,dMSCs)向放创复合伤大鼠创面优势分布的机制。方法RT-PCR和免疫组织化学检测创面中基质细胞源性细胞因子(stromal-dereivedfactor-1,SDF-1)的表达水平,以及dMSCs中SDF-1受体CXCR4的表达水平。Transwell培养体系中,观察SDF-1对dMSCs的趋化作用。结果放创复合伤大鼠创面SDF-1的表达水平明显高于正常大鼠,同时dMSCs表达CXCR4。体外趋化实验发现,SDF-1对dMSCs有很强的趋化作用,而使用SDF-1的中和性抗体后,放创复合伤大鼠伤口液对dMSCs的趋化作用明显下降(P<0·05)。结论放创复合伤大鼠创面上调表达的SDF-1在移植dMSCs向创面的优势分布中有重要作用。
- 宗兆文程天民冉新泽李楠董世武艾国平粟永萍
- 关键词：真皮多能干细胞放创复合伤
- 生物样本铀的放射化学分析方法改进研究被引量：4
- 2008年
- 目的寻找一种操作简单、花费较低的放射化学分析方法。方法根据以前的研究基础,结合仪器和技术方法的进展,将微波消解仪和多用预处理加热仪用于放化分析。结果将微波消解仪和多用预处理加热仪用于放化分析,成本较低,方法简化,消耗的化学试剂减少,既减轻了成本,又减轻了对环境和人员的危害。结论将微波消解仪和多用预处理加热仪用于放化分析,应是较好的预处理样本的方法。
- 刘晶李蓉于水粟永萍徐辉程天民
- 关键词：铀放射化学分析生物样品微波消解仪
- 培养大鼠下丘脑CRH神经元生长规律研究被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨体外培养胎鼠下丘脑神经元的形态、生长变化规律及促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的表达变化。方法 取孕 1 7天胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元 ,光镜下连续观察神经元胞体直径、突起长度、数目等变化规律 ,应用扫描电镜、免疫细胞化学染色方法观察CRH神经元的生长变化规律。结果 培养下丘脑CRH神经元 3～ 6天生长速度最快 ;7～ 1 0天神经元细胞数量、胞体直径、突起长度和CRH染色强度均达高峰 ;1 2天后部分神经元可出现退形性改变。结论 培养下丘脑CRH神经元 7～ 1 0天生长迅速趋于成熟 。
- 张云东朱佩芳王正国周继红许民辉邹咏文黄显凯粟永萍赵继宗
- 关键词：神经元促肾上腺皮质激素释放激素
- 医学生心理素质教育的初步探讨
- 2004年
- 随着社会的进步和科学的发展，高校心理教育日益受到重视。医学生的心理素质教育也成为医学院校教学中不可缺少的一部分，科学合理的进行有针对性的心理素质教育，对学生人格的培养和完善以及提高自身修养具有重要的意义，为以后走向工作岗住奠定坚实的基础。
- 王军平赵景宏粟永萍
- 关键词：医学生心理素质素质教育医学教育心理教育
