秦俊文
- 作品数：32 被引量：35H指数：3
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- 围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)被引量：2
- 2013年
- 揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。
- 谢琪璇黄卉卉蒋启荣高桥祐司秋山泰身秦俊文
- 关键词：TSG101胚胎围着床期
- shRNA慢病毒质粒的构建技巧被引量：3
- 2011年
- 携带shRNA慢病毒质粒的慢病毒宿主范围广,能感染分裂期与非分裂期细胞,转染效率高,shRNA在宿主细胞中能高效、长期稳定地表达,因此shRNA慢病毒载体正被越来越广泛地应用于RNAi研究和疾病治疗中。
- 秦俊文谢琪璇蔡冬青秋山泰身井上纯一郎
- 关键词：SHRNA慢病毒载体宿主细胞宿主范围转染效率RNAI
- HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀在制备抗淋巴瘤药物中的应用
- 本发明公开了HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀在制备抗淋巴瘤药物中的应用。该HMG-CoA还原酶抑制剂为分子式是C<Sub>24</Sub>H<Sub>25</Sub>FNNaO<Sub>4</Sub>的氟伐他汀钠盐。药...
- 齐绪峰金寿起李奎在蔡冬青秦俊文禹艳红武征
- 文献传递
- 可靶向激活RANK信号通路的融合蛋白及其重组质粒与应用
- 本发明公开了一种可靶向激活RANK信号通路的融合蛋白及其重组载体与应用。该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，为利用一段gyrase B序列代替小鼠RANK的C末端得到；编码该融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ...
- 秦俊文谢琪璇蔡冬青万颖黄卉卉秋山泰身井上纯一郎禹艳红齐绪峰武征
- 中枢免疫耐受缺损模型的构建被引量：1
- 2012年
- 目的构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法分离妊娠后13.5 d的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞得到LV-T6-shRNA重塑胸腺,将此重塑胸腺移植入无胸腺的雌性小鼠肾脏荚膜下,饲养8周。结果慢病毒可有效转导LV-T6-shRNA慢病毒质粒入原代胸腺髓质上皮细胞中;移植LV-T6-shRNA重塑胸腺的小鼠饲养8周后,胸腺明显较小,成熟的胸腺髓质上皮细胞减少,脾脏肿大,脾脏中活化的T淋巴细胞增多,肺脏中出现淋巴细胞浸润等现象,这些表现型与TRAF6-/-小鼠的表现型相似。结论中枢免疫耐受缺损模型构建成功。
- 谢琪璇叶绍恩蒋启荣秋山泰身井上纯一郎秦俊文
- 关键词：TRAF6慢病毒SHRNA
- 小鼠TRAF6特异性shRNA慢病毒质粒的构建及活性
- 2011年
- 目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通过慢病毒将TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒导入MEF13细胞中,FACS分析质粒导入率,同时利用Western blot技术检测MEF13细胞中TRAF6的表达以及磷酸化IκBα的表达。以LacZ基因特异性shRNA慢病毒质粒为对照。结果:构建的小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒与设计相符;MEF13细胞中慢病毒质粒的导入率为95%以上;与对照组比较,TRAF6基因特异性shRNA可长期、完全抑制MEF13细胞中TRAF6的表达及TRAF6介导的IκBα的磷酸化。结论:成功构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。
- 谢琪璇罗峰秋山泰身井上纯一郎秦俊文
- 关键词：TRAF6SHRNARNAI
- 小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术被引量：2
- 2011年
- 目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中。结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测。
- 肖銮娟谢琪璇高桥祐司秋山泰身董少男黄卉卉罗峰叶绍恩张春雪秦俊文
- 关键词：早期胚胎
- 人工中枢免疫耐受缺损模型的构建
- 研究背景:中枢免疫耐受对于免疫系统识别自身和非自身,从而清除外来异物,维持对自身成分的不反应性是必不可少的。研究表明,NF-κB信号传导通路对于胸腺髓质微细构造的形成和维持特别是诱导胸腺髓质上皮细胞的分化和成熟,进而控制...
- 秦俊文谢琪璇秋山泰身井上纯一郎黄卉卉董少男万颖张坤
- 关键词：TRAF6慢病毒SHRNA
- 抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA及其应用
- 本发明公开了一种抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA及其应用。本发明所述抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA的脱氧核糖核酸序列为GAATCACTTGGCACGACACTT。本发明先设计含有抑制小鼠TRAF6基因的sh...
- 秦俊文谢琪璇秋山泰身井上纯一郎
- 慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力被引量：3
- 2014年
- 目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。
- 廉滋珍曹佐武陈冉陈雷薛樱子秦俊文齐绪峰张春雪禹艳红
- 关键词：RNA干扰慢病毒精子运动
