王青华
- 作品数：20 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所更多>>
- 发文基金：国家林业公益性行业科研专项引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种美国白蛾核型多角体病毒水分散粒剂及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种美国白蛾核型多角体病毒水分散粒剂及其制备方法和应用，该水分散粒剂含有美国白蛾核型多角体病毒、高岭土、甘油和氯化钠；所述美国白蛾核型多角体病毒的含量为5.0×10<Sup>10</Sup>‑2.5×10<S...
- 王青华张永安曲良建王玉珠李恩杰
- 文献传递
- TaqMan实时荧光定量PCR检测美国白蛾核型多角体病毒方法的建立被引量：4
- 2019年
- 美国白蛾核型多角体病毒( Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs)是一种对美国白蛾高效、对环境无污染、对天敌及非靶标生物安全的生物杀虫剂。建立高效、快速的定量检测方法对该病毒持续控制美国白蛾具有重要意义。将 polh 基因构建到pGEM-T-easy载体上,制备标准品质粒,构建标准曲线,对未知样品DNA进行定量PCR检测,根据标准曲线计算样品中美国白蛾核型多角体病毒含量。提取感染病毒不同时间段的美国白蛾幼虫基因组DNA,根据已建立的方法检测并计算每克样本病毒的基因拷贝数。利用TaqMan探针法成功建立了该病毒荧光定量PCR检测方法。以取食3.0×10^6 OBs/mL浓度病毒的美国白蛾幼虫基因组DNA为模版,进行荧光定量PCR,病毒在幼虫体内的含量在第5天开始出现大幅增长趋势,第6天时达到最高。TaqMan探针法实时荧光定量PCR能简便、高效、快速的检测出大量未知样本基因组DNA中病毒基因的拷贝数,为研究该病毒的传播和流行规律提供了可行的监测方法。
- 王承锐李娜李娜段立清段立清张永安
- 关键词：美国白蛾核型多角体病毒TAQMAN探针实时荧光定量PCR病毒检测
- 一种伊氏杀线真菌生产工艺及其制剂和生产装置
- 本发明公开了一种伊氏杀线真菌生产工艺及其制剂和生产装置，生产工艺采用液固双相培养方法进行伊氏杀线真菌的大量生产，通过液体发酵可以先获得大量的菌丝体、芽生孢子及少量的分生孢子，再转到固体培养基上使其产生大量的气生分生孢子，...
- 张永安曲良建王青华薛建杰王春燕王振王玉珠杜婷
- 文献传递
- 美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化被引量：2
- 2018年
- [目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。
- 李娜李恩杰王青华王玉珠张永安段立清
- 关键词：美国白蛾核型多角体病毒纯化
- 星天牛幼虫人工饲料及星天牛的传代饲养方法
- 本发明提供一种星天牛幼虫人工饲料及星天牛的传代饲养方法，该星天牛幼虫人工饲料由如下成分组成，胚芽粉，酪酸钠，韦氏盐，蔗糖，木质粉，乙醇，山梨酸，维生素B6，烟酸，胆固醇，琼脂和水。本发明提供的人工饲料完全不含寄主植物，成...
- 王青华张永安曲良建王玉珠黄焕华黄咏槐
- 一种林业昆虫核型多角体病毒可湿性粉剂及其制备方法
- 本公开涉及一种林业昆虫核型多角体病毒可湿性粉剂，该可湿性粉剂中含有林业昆虫核型多角体病毒、增效剂、稳定剂和其它助剂，以所述可湿性粉剂为基准，所述林业昆虫核型多角体病毒的浓度为1.0×10<Sup>9</Sup>～5.0×...
- 王青华王玉珠张永安
- 文献传递
- 杨小舟蛾新病毒的鉴定及其生物活性研究被引量：3
- 2022年
- [目的]杆状病毒在农林害虫的生物防治中起着重要的作用,本研究鉴定1株具有高毒力的杨小舟蛾新病毒,为害虫的生物防治提供新病毒资源。[方法]通过研究该病毒的超微结构和生物活性确定其生防潜力。[结果]超微结构表明,该病毒包涵体多呈椭圆形,平均大小为0.43×0.21μm;包涵体中包埋一个杆状病毒粒子,具有颗粒体病毒结构特征,命名为杨小舟蛾颗粒体病毒(MisiGV)。生物活性显示,MisiGV对杨小舟蛾幼虫有致死作用,对3龄幼虫的半致死浓度LC_(50)为2.37×10^(5)OBs·mL^(−1);当浓度为1.2×10^(7)、4.0×10^(6)、4.0×10^(5)、1.2×10^(5)和4.0×10^(4)OBs·mL^(−1),对3龄幼虫的半致死时间LT_(50)随着病毒浓度的降低而增大,分别为7.55、11.61、14.69、16.06和17.62 d。不同龄期幼虫对MisiGV的敏感性表明,虫龄较小越容易受到病毒的侵染,而且幼虫的死亡速度依赖于虫龄和病毒浓度。当浓度为4.0×10^(6)OBs·mL^(−1)时,2和4龄幼虫的最高累计死亡率分别为90.00%和57.78%,而在该浓度下,杀死50%的2龄幼虫的所需时间≈6.81 d,4龄≈12.89 d;当病毒浓度为4.0×10^(4)OBs·mL^(−1)时,2和4龄幼虫的最高累计死亡率分别为83.33%和36.67%,LT_(50)值分别为11.91 d和25.65 d。此外,MisiGV对存活幼虫化蛹率和羽化率也有一定影响,病毒液浓度越高,化蛹率和羽化率越低。当MisiGV浓度为4.0×10^(4)OBs·mL^(−1),MisiGV对羽化率的影响不明显。[结论]本文报道的MisiGV新病毒是具有开发潜力和应用前景的生防因子。
- 刘瑞霞谢丹洁刘锦山王青华张永安段立清
- 关键词：杨小舟蛾颗粒体病毒生物活性敏感性
- 伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌对松材线虫的联合毒力研究被引量：3
- 2019年
- [目的]探究伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力。[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicola与Bt联合对松材线虫的影响。[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势。[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率。
- 李恩杰李娜王青华张永安王玉珠曲良建
- 关键词：松材线虫
- 春尺蠖新病毒株的鉴定及其对春尺蠖核型多角体病毒的增效作用被引量：3
- 2020年
- 春尺蠖在我国危害严重,为了挖掘具有开发潜力和应用前景的生防因子,本文分离纯化一株能够感染春尺蠖幼虫的新病毒,生物活性测定了新病毒株的毒力及其对春尺蠖核型多角体病毒(ApciNPV)的增效作用。新病毒株的超微结构观察表明,该病毒多角体多为切面呈六边形的多面体,直径大小为0.32~1.20μm,病毒粒子呈近球状,具有质型多角体病毒的结构特征,命名为春尺蠖质型多角体病毒(ApciCPV)。生物活性测定结果显示,ApciCPV对春尺蠖3龄幼虫有很强的毒力,半致死浓度(LC50)为1.42×104 OBs/mL。当感染春尺蠖3龄幼虫时,ApciCPV可使ApciNPV半致死时间(LT50)缩短0.50~10.90 d,使ApciNPV对春尺蠖的最终致死率提高6.70%~43.33%。根据最终致死率、LT50以及ST三个值综合决定,当ApciNPV和ApciCPV配比浓度分别为1.0×106和1.0×104 OBs/mL时,对春尺蠖3龄幼虫的感染效率最高。新分离的ApciCPV病毒株是控制春尺蠖虫口密度的理想生物因子。
- 王承锐李恩杰王少博王青华王玉珠张永安段立清
- 关键词：春尺蠖
- 一种林业昆虫核型多角体病毒可湿性粉剂及其制备方法
- 本公开涉及一种林业昆虫核型多角体病毒可湿性粉剂，该可湿性粉剂中含有林业昆虫核型多角体病毒、增效剂、稳定剂和其它助剂，以所述可湿性粉剂为基准，所述林业昆虫核型多角体病毒的浓度为1.0×10<Sup>9</Sup>～5.0×...
- 王青华王玉珠张永安
- 文献传递
