王蓓
- 作品数：31 被引量：29H指数：3
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金安徽省年度重点科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生环境科学与工程文化科学更多>>
- 鸡J亚群禽白血病病毒AH-J11株的全基因组感染性克隆构建
- 2013年
- 为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,采用PCR方法分4段分别扩增出J亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11的前病毒cDNA,PCR产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH-J11株前病毒cDNA的重组质粒,命名为pSK-AH-J11。将AH-J11株全基因序列克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中,得到重组质粒pBl-AH-J11,并将其转染鸡胚成纤维细胞(CEF)。通过间接免疫荧光试验,RT-PCR和Western blot检测,并经测序验证比对拯救前后病毒的gp85基因序列,结果均表明拯救出了1株重组J亚群禽白血病病毒(rALV-J)。本研究成功构建了鸡ALV-J的感染性克隆并救获了其重组病毒,为研究禽白血病的致病机理提供了良好的反向遗传操作技术平台。
- 王蓓刘芳王汉清李宁魏建忠刘光清王桂军
- 关键词：J亚群禽白血病病毒全基因组感染性克隆病毒拯救
- 鸭坦布苏病毒囊膜糖蛋白结构域3(ED3)单克隆抗体的制备及其中和活性分析
- 2022年
- 目的以纯化的重组鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜糖蛋白结构域3(ED3)蛋白作为免疫原,制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因,构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,采取有限稀释法筛选杂交瘤细胞并大量制备单克隆抗体。利用Western blot法、间接免疫荧光法、ELISA及分型试剂盒对单克隆抗体进行鉴定并通过病毒中和试验检测抗体中和效价。结果成功表达DTMUV ED3蛋白,并制备3株ED3蛋白的鼠源单克隆抗体B9D10C7、B9D7B8G10、B9D7B8F11,其亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,腹水间接ELISA检测抗体效价均达到1∶51200,且能够识别DTMUV的E蛋白,具有一定的中和活性。结论获得3株特异性强、敏感性高的DTMUV ED3的单克隆抗体。
- 张淼吕炫张冲阚莹王若洁于胜祖卢奇祝萌方天刘丹朱英奇曹守林王蓓王蓓殷冬冬王桂军
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 一种油乳剂混合装置
- 本实用新型公开了一种油乳剂混合装置，包括箱体，所述箱体表面分别固定连接有温度传感器和PLC控制器，温度传感器的检测端延伸至箱体的内部，所述箱体的表面固定连接有空心环，空心环的内环面开设有安装孔，安装孔的内壁固定连接有单向...
- 王蓓于胜祖王桂军卢奇张毅
- 安徽省5株新型鹅星状病毒的分离鉴定与遗传进化分析
- 2023年
- 为研究近年来引起雏鹅痛风病的新型鹅星状病毒流行毒株的病原学和遗传学特征,于2018—2021年从安徽省疑似感染新型鹅星状病毒的雏鹅中采集病料,使用健康鹅胚进行病毒分离,并对分离到的毒株进行全基因组测序和序列分析。结果表明,共分离鉴定到5例新型鹅星状病毒感染样品,利用鹅胚盲传3代成功分离到5株新型鹅星状病毒,均可在鹅胚上稳定传代,分别将其命名为AHAU2018、DY-19、ZY02、HR2105/2和HR2110/1株。全基因组测序结果表明,5株分离毒株的基因组全长均为7175 nt。系统进化树分析结果表明,5株分离毒株均属于致雏鹅痛风的新型鹅星状病毒,但2019年前的毒株与2019年后的毒株处于不同的进化亚分支上。新型鹅星状病毒在我国已发生变异,出现了新的进化亚分支,但优势基因型是否发生变化还有待进一步研究。
- 贾北平吕炫杨庆王一楠李皖萧解新迪朱英奇王蓓殷冬冬张云凯王晴王桂军
- 关键词：遗传进化分析
- 鸭坦布苏病毒AH-F10株全基因组的分子克隆与序列分析
- 为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征及构建该病毒的感染性克隆,本文利用RT-PCR方法对其全基因组序列进行了测定,并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果表明,AH-F10...
- 王蓓王楠楠毕庄莉王晓旭李传峰朱良强刘光清王桂军
- 关键词：全基因组感染性克隆
- 文献传递
- 安徽省禽呼肠孤病毒感染的血清学调查被引量：11
- 2011年
- 目的了解禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)在安徽省鸡和鸭群中的感染情况。方法应用ELISA方法对采自安徽省205份鸡血清和218份鸭血清进行ARV抗体检测。结果肉鸡阳性率为55.88%,蛋鸡阳性率为92.23%,鸭群感染率为43.12%。结论禽呼肠孤病毒感染在安徽省鸡群和鸭群中感染较为普遍,应引起高度重视。
- 赵圆圆黄晓慧王蓓王汉清孙裴李郁魏建忠王桂军
- 关键词：血清学检测ELISA
- 鸭坦布苏病毒AH-F10株全基因组的分子克隆与序列分析
- 为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征及构建该病毒的感染性克隆,本文利用RT-PCR方法对其全基因组序列进行了测定,并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果表明,AH-F10...
- 王蓓王楠楠毕庄莉王晓旭李传峰朱良强刘光清王桂军
- 关键词：全基因组
- 一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗，包括：脂质体，以及结合或包裹于脂质体中的VP27蛋白；脂质体由卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂按薄膜扩散法制得。本发明还公开了上述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，包括如下步骤：...
- 王桂军朱英奇李佳明吕炫张冲张淼张瑞辰王蓓曹守林
- 文献传递
- 鸡J亚群禽白血病病毒AH-J11株的全基因组感染性克隆构建
- 为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,研究采用PCR 方法分4 段分别扩增出J 亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11 的前病毒cDNA,PCR 产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH...
- 王蓓刘芳王汉清李宁魏建忠刘光清王桂军
- 以J亚型禽白血病病毒LTR为启动子的真核表达载体构建
- 2013年
- 为构建以J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的LTR元件为启动子的真核表达载体,本研究将ALV-J LTR克隆至pBluescript II SK(+)载体中,并在5'LTR和3'LTR之间分别插入报告基因(eGFP)和新城疫病毒(NDV)的NP基因,得到重组质粒pSK-LTR-GFP和pSK-LTR-NP。将上述重组质粒分别转染293T细胞、BHK-21细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF),应用RT-PCR、western blot和荧光显微镜检测目的基因的表达。结果表明,无论是在哺乳动物细胞(BHK-21和293T)还是在禽原代细胞中,LTR均能够启动外源基因(eGFP和NP)良好转录和表达。流式细胞技术分析显示,报告基因在293T细胞中的表达在48 h达到峰值。本研究为利用ALV-J LTR元件构建输送或表达外源基因的质粒载体奠定了基础。
- 王蓓陈宗艳李传峰孟春春王桂军刘光清
- 关键词：禽白血病病毒启动子LTR
