王琦
- 作品数：126 被引量：244H指数：9
- 供职机构：北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学建筑科学更多>>
- 一种方便的药理实验动物固定盒
- 本实用新型公开了一种方便的药理实验动物固定盒，包括主盒体，所述主盒体的左侧铰接有第一固定片、第二固定片和第三固定片，所述第一固定片、第二固定片和第三固定片的右侧均设有螺栓，所述第一固定片与主盒体的右侧螺接、所述第二固定片...
- 李越王琦
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2在大肠埃希菌中表达及生物信息学分析
- 2009年
- 目的:构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2(NS5ATP2)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增NS5ATP2目的基因片段,T-A克隆连接到pGEM-T载体,测序正确后将目的片段插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导NS5ATP2融合蛋白的表达,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析和证实融合蛋白的表达;以生物信息学方法对蛋白结构和功能进行预测。结果:利用RT-PCR扩增获得NS5ATP2基因片段,IPTG诱导BL21宿主菌成功表达了NS5ATP2,经SDS-PAGE和Western blot分析得到证实;生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽。结论:利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达NS5ATP2蛋白,为今后研究NS5ATP2蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。
- 李晓光洪源王琦张锦前成军
- 关键词：病毒非结构蛋白质类肝炎病毒丙型
- 人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因的筛选被引量：1
- 2009年
- 目的为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法扩增人胰腺cDNA文库并经纯化鉴定后，将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-core转化酵母菌株AH109，在色氨酸缺陷型培养基（SD／Trp）上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合，在四缺培养基（SD／Trp／Leu／-His／-Ade）和铺有Xα-gal的四缺培养基上进行筛选，提取蓝色酵母菌落质粒，电转化大肠埃希菌DH5 α后再提取质粒测序，测序结果进行序列比对。结果筛选出11种与HCV核心蛋白相结合的蛋白基因，包括胰凝乳蛋白酶原B1前体、羧肽酶A1，胰蛋白酶原2、胰凝乳蛋白C、胰蛋白酶1、羧肽酶B1、驱动蛋j白家族3B、胰蛋白酶2、线粒体蛋白基因、弹性蛋白酶3A、辅脂肪酶。结论在筛选出的HCV核心蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中，部分与糖、脂代谢密切相关。
- 张锦前张晨宇吴淑玲王琦成军
- 关键词：肝炎病毒丙型病毒核心蛋白质类基因文库
- 1b型HCV-NS3真核表达载体的构建及对HepG2细胞凋亡的影响
- 2012年
- 目的构建1b型HCV-NS3基因真核表达载体,转染HepG2细胞并做表达谱基因芯片,筛选其影响肝癌细胞凋亡的差异表达基因,为进一步研究HCVNS3致病的分子生物学机制准备了条件。方法采集1b型HCV感染患者血清,提取HCV RNA,PCR获得HCV-NS3编码片段,经T-A克隆,构建pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3,用pcDNA3.1(-)及上述重组载体的转染级质粒瞬时转染HepG2细胞,用蛋白免疫印迹检测,同时提取细胞总RNA,进行人类全基因组表达谱测定。结果从1b型HCV感染患者血清RNA中扩增出的1893bp片段大小正确,双酶切凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3内,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列,转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹证实;芯片结果显示凋亡相关基因2个上调,3个下调。结论成功地构建了1b型HCV NS3基因的真核表达载体pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3;HCV-NS3可能是通过对FAIM2、FADD、TNFRSF4、FASLG和TNF基因的调控影响细胞凋亡。
- 张海栋张锦前王琦刘顺爱成军赵龙凤贾因棠
- 关键词：丙型肝炎病毒NS3凋亡
- 肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8蛋白反式激活基因的筛选
- 2011年
- 目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术及生物信息学技术筛选肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8（HLA-HA8）的反式激活基因。方法以HLA-HA8基因表达质粒pcDNA3.1（-）-HLA-HA8和空载体pcDNA3.1（-）转染HepG2细胞,提取mRNA并反转录合成双链cDNA（dscDNA）,分别标记为Tester和Driver;经RsaI酶切后,将Tester cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adapter 1和adapter 2衔接,再与Driver cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将产物与pGEM-T easy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建HLA-HA8反式激活基因差异表达cDNA消减文库。扩增后得到101个阳性克隆,菌落PCR分析均得到200~1000bp的插入片段。随机挑选其中28个阳性片段测序,同源分析结果显示,共获得16种编码基因,其中4个功能未知。结论 HLA-HA8基因反式调节基因与细胞结构和生长、物质及能量代谢、物质转运和信号转导密切相关,为HLA-HA8的功能以及HBV感染慢性化机制研究提供了新的思路。
- 王琦蓝贤勇李越武会娟张丽娟成军
- 关键词：次要组织相容性抗原反式激活
- 微滴式数字PCR技术进展被引量：16
- 2016年
- 1985年,美国科学家Kary Mullis发明了聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）。PCR是现代生命科学研究中最常规的实验方法之一,其发展经历了3个主要阶段：1操作烦琐、只适用于定性研究的琼脂糖电泳PCR;2实时荧光定量PCR,也是目前应用最广泛的PCR技术;3数字PCR（digital PCR,d PCR）,属于第3代PCR,
- 王琦范颖
- 关键词：实时荧光定量PCR技术聚合酶链反应DNA拷贝数测序技术
- 红外偏振光照射星状神经节联合颈2椎旁神经阻滞治疗颈源性头痛的疗效观察被引量：12
- 2016年
- 目的探讨红外偏振光照射星状神经节联合颈2椎旁神经阻滞治疗颈源性头痛的临床疗效。方法 30例颈源性头痛患者,分为两组,A组为治疗组,采用颈2椎旁神经阻滞治疗法配合红外偏振光照射星状神经节;B组为对照组,采用颈2椎旁神经阻滞治疗法。分别记录治疗前、治疗后的视觉模拟评分、生活质量评分。结果两组治疗后视觉模拟评分和生活质量评分均较术前明显改善。A组在治疗后视觉模拟评分和生活质量评分均较B组差异具有显著性(P<0.05)。结论红外偏振光照射星状神经节可以有效缓解颈源性头痛的症状,适合临床应用。
- 刘京杰郭玉娜王琦杨惠婕
- 关键词：红外偏振光星状神经节阻滞颈源性头痛
- 抗病毒治疗可有效预防手术或介入治疗中的HBV再激活
- 2018年
- 2017年4月，香港《星岛日报》报道了一例43岁女性两度肝移植的新闻，引起了大家的广泛关注。这名患者是一位非活动性HBsAg携带者，因服用类固醇治疗肾病时没有获得处方抗病毒药物，而导致HBV再激活，并快速发展至急性肝衰竭而进行了肝移植手术。因其所获的肝脏体积较小并出现其中一条血管分支曾受阻塞，而致肝功能恢复不佳。
- 王琦
- 关键词：HBV再激活肝移植手术介入治疗抗病毒治疗非活动性HBSAG携带者抗病毒药物
- 适应性点突变对JFH1生活周期的影响及机制研究
- 目的 观察适应性点突变对HCV生活周期的影响，并初步探讨其机制.方法 以JFH1为基础，利用重叠PCR技术构建10种含有6个适应性点突变的单突变和联合突变病毒株，然后通过体外转录技术获得病毒基组RNA.通过HCV NS5...
- 王琦成军
- 关键词：丙型肝炎病毒点突变
- 乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白1的克隆及原核表达被引量：2
- 2007年
- 目的对应用酵母双杂交技术及生物信息学技术筛选得到的乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白1(HBEBP1)进行克隆,并诱导其在大肠埃希菌BL21中的表达。方法应用反转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HBEBP1基因片段,连接到pGEM-T载体,双酶切鉴定及测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达以获得HBEBP1融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot证实融合蛋白的特异性。结果RT-PCR扩增获得大小为372bp的HBEBP1基因片段,插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导后,成功获得大小约为33kD的重组蛋白,Western blot证实其具有良好的特异性。结论构建了pET-32a(+)-HBEBP1原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了HBEBP1融合蛋白,为研究HBEBP1蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础。
- 李越王琦成军林原洪源
- 关键词：结合蛋白原核细胞
