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植物染色体微切割过程中细胞质DNA污染及其控制的研究(英文)被引量：5: 2003年; 染色体微切割和微克隆已成为复杂基因组研究的有效途径 ,但是操作过程中的核外DNA的污染一直是令人担心的问题。通过研究植物染色体微切割 (微分离 )和微切割的染色体DNA扩增过程中细胞质DNA的污染问题 ,表明目前常用的植物染色体微切割过程中 ,细胞质DNA的污染几乎难以避免 ,并提出了一个改进的降低细胞质DNA污染的方法 ,对如何控制细胞质DNA的污染进行了详细的讨论。; 胡赞民王槐陈宇红石锐陈正华; 关键词：DNA扩增

植物染色体区段DNA文库的建立及染色体微切割、微分离和微克隆技术的改进: 该文以大麦和小麦为材料,进行了染色体片段微分离、微切割及微克隆,建立了染色体区段DNA文库,并通过实验对染色体微分离技术进行了改进,研究共分如下4个方面:1、激光微束结合玻璃针法微切割、微分离植物染色体片段并对其进行体外...; 王槐; 关键词：大麦染色体微切割微分离微克隆 DNA文库; 文献传递

植物染色体微分离、微克隆及其DNA文库的构建: 1999年; 陈正华王兰岚胡赞民周奕华党本元崔丽华王槐; 关键词：单染色体植物染色体微克隆微分离 DNA文库扩增产物

小麦6B染色体四个区段DNA探针池的建立: 1999年; 王槐周奕华党本元万里红胡赞民宋桂英陈正华; 关键词：B染色体 DNA探针染色体微切割普通小麦激光微束

基质结合区(MARs)与转基因植物的基因表达被引量：6: 1999年; 对动植物的研究结果表明，基质结合区（MARs）能提高转基因的表达水平，并能降低其在转基因个体之间的表达差异。本文着重综述了MARs的基本特征及其在转基因植物中的研究应用，对MARs在转基因动物方面的研究成果和MARs的作用机制也作了介绍。; 王槐陈正华; 关键词：转基因植物基因表达

小麦与新麦草及高冰草属间不对称体细胞杂交的植株再生被引量：51: 1996年; 在植物体细胞杂交研究中,供体-受体不对称融合方法近年来倍受重视。人们常用X-或γ-射线辐射一方亲本作融合供体,以获得胞质杂种或不对称核杂种。但至今紫外线在不对称融合中的应用还未见报道。禾谷类的体细胞杂交,在水稻上已有较大进展,但在小麦进展缓慢,仅有小麦与多年生黑麦草及小麦与裸燕麦的原生质体融合获杂种愈伤组织的报道。近年来,我们曾以小麦与^(60)Co-γ射线处理的簇毛进行体细胞杂交,首次获得小麦不对称体细胞杂种植株。现在我们报道小麦与紫外线照射的新麦草(Psathyrostachys juncea (Fisch) Nevski 2n=14)和高冰草(Agropyron elongatum (Host) Nevski 2n=70)的属间体细胞杂交也获得成功。; 夏光敏王槐陈惠民; 关键词：小麦新麦草高冰草体细胞杂交

利用微分离黑麦1R染色体的体外扩增产物进行染色体着染研究被引量：7: 1999年; 首先对显微分离出的黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌｅＬ．）１Ｒ染色体进行了两轮Ｓａｕ３Ａ连接接头介导的ＰＣＲ扩增（ＬＡ＿ＰＣＲ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实这些染色体扩增片段来源于基因组ＤＮＡ之后，再利用１Ｒ染色体的第二轮扩增产物、黑麦基因组ＤＮＡ、ｒＤＮＡ基因为探针，与其根尖细胞中期分裂相进行染色体原位杂交，发现微分离的１Ｒ染色体体外扩增产物中包含大量的非该染色体特异性重复序列，而其信息量却较黑麦总基因组少；当以适量的黑麦基因组ＤＮＡ进行封阻时，微分离染色体的体外扩增产物成功地被重新定位在中期分裂相的一对１Ｒ染色体上，说明微分离１Ｒ染色体的ＰＣＲ扩增产物中的确包含了该染色体特异性的片段。此外，以从１Ｒ染色体微克隆文库中筛选出的一单、低拷贝序列和一高度重复序列分别为探针，染色体原位杂交检测发现，这一高度重复序列可能为端粒相关序列；而单、低拷贝序列却未检测到杂交信号。这些结果从不同侧面反映出染色体着染技术是证实微分离、微切割染色体的真实来源及筛选染色体特异性探针的有利工具。建立了可供参考的植物染色体着染实验体系，为染色体微克隆技术在植物中的进一步应用提供了便利。; 周奕华王槐党本元邓向东胡赞民陈正华; 关键词：染色体原位杂交微分离微克隆黑麦

黑麦1R染色体微克隆文库的构建与分析被引量：11: 1999年; 通过玻璃针分离法 ,从黑麦 (SecalecerealeL .)根尖细胞中期分裂相中显微分离出 2条及 5条 1R染色体。经Sau3A接头介导的PCR(LA_PCR)方法对其进行体外扩增 ,得到了 0 .3～ 2 .5kb之间的DNA片段。以DIG标记的探针进行多次Southern杂交 ,证明显微分离出的染色体的体外扩增产物与黑麦基因组DNA同源 ,并且来自 1R染色体。然后利用 5条 1R染色体的第二轮PCR产物构建质粒文库 ,可得到 2 2 0 0 0 0个重组子。随机挑选 172个重组子进行分析 ,发现插入片段主要介于 30 0～ 180 0bp之间。此外 ,根据基因组点杂交结果推算出该文库包含约 42 %的中、高重复序列和 5 8%的单、低拷贝序列 ,而且文库的冗余度较低。研究构建的黑麦 1R染色体微克隆文库为 1R染色体高密度遗传图谱的建立以及位于其上的重要基因的定位与分离提供了便利。; 周奕华党本元王槐胡赞民王兰岚陈正华; 关键词：黑麦

小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建被引量：1: 2004年; 用Nd：YAG激光微束将处于有丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L．)6B染色体微切割为四段，并用微细玻璃针将每个片段分别回收。将分离的染色体片段DNA和Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增。Southern杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组。用一系列(42对引物)位于6B染色体和其他染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证。结果表明，获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体。将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGEMT-vector中，建立了4个染色体特定区域的基因组文库，命名为R1、R2、R3和R4，分别包含2．1×10^5、2．74×10^5、2．45×10^5和2．93×10^5个重组子克隆。每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证。结果显示：插入片段大小在300～l800bp之间，平均大小为820-870bp，其中43％-48％的克隆为低／单拷贝序列，42％-47％为中／高拷贝序列。本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础。; 胡赞民王槐石锐党本元胡军尹维波陈宇红姜淑梅陈正华; 关键词：小麦

植物体细胞杂交的进展被引量：14: 1999年; 王槐陈正华夏光敏陈惠民; 关键词：植物体细胞杂交细胞工程

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王槐

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