王启伟
- 作品数：68 被引量：93H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 坐骨神经再生过程中施万细胞自噬的形态学观察被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法:横切大鼠坐骨神经制作神经损伤再生模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15d取近断端组织行电镜结构观察。结果:轴突在第1天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、绞窄并脱落形成碎片,施万细胞内可见大小形状各异的髓鞘碎片,并与大量溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第7d时幼稚细胞出现于新生毛细血管周围,大量幼稚细胞随后出现。结论:施万细胞自噬对坐骨神经再生时溃变髓鞘的清除起主要作用,溶酶体显著地参与了该过程,施万细胞脱分化为幼稚的祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。
- 王启伟迟德彪路艳蒙朴仲贤王万山顾为望朴英杰
- 关键词：施万细胞自噬神经再生
- 大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用被引量：8
- 2004年
- 目的探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15 d取远断端组织行电镜结构观察。结果轴突在第0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,神经膜细胞(Schwann cell, 施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞,1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞,内有吞噬泡。结论大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除,施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。
- 王万山朴仲贤韩明虎王启伟朴英杰
- 关键词：坐骨神经再生施万细胞细胞自噬
- 心肌特异性启动子表达载体的构建及其功能鉴定
- 2009年
- 本研究构建了心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-MHC)启动子表达载体,并对其功能进行了鉴定。以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到α-MHC启动子,插入pGEM-TEasy载体,酶切后回收目的片段,置换pcDNA3.1(+)-EGFP-hygro中的CMV启动子,成功构建出α-MHC-EGFP表达载体。对其进行酶切鉴定后,通过电穿孔法转染原代小鼠心肌细胞,转染阳性的心肌细胞出现绿色荧光,而非心肌细胞无荧光出现。α-MHC-EGFP表达载体具有心肌特异性表达特性,可用于纯化胚胎干细胞来源的心肌细胞。
- 何文俊李世崇叶玲玲王启伟王海涛谢靖刘红陈昭烈
- 关键词：心肌细胞胚胎干细胞启动子增强型绿色荧光蛋白
- 具有抗凋亡和细胞增殖调控特性的细胞株及其建立方法
- 本发明将E1B-19K基因和BS-BV基因分别插入到pBudCE4.1载体的EF-1α启动子和CMV启动子下游，构建同时、独立组成型表达E1B-19K和BS-BirA-VP4的载体pBud-E1B-BS-BV。将p27K...
- 叶玲玲陈昭烈李世崇刘红王启伟杨振西
- 文献传递
- 基于枯草芽孢杆菌生物素连接酶的外源基因诱导表达调控系统及其构建方法
- 本发明公开了一种新型的真核细胞基因表达调控，该系统以枯草芽孢杆菌生物素连接酶与转录激活结构域的融合蛋白为调控元件，在生物素存在下可激活弱化启动子下游目的基因的转录。该系统具有背景表达较低、诱导率较高、响应迅速等优点，可适...
- 叶玲玲陈昭烈李世崇刘红何文俊刘兴茂王启伟
- 文献传递
- 间充质干细胞诱导分化为胰岛β细胞的研究进展被引量：2
- 2005年
- 间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,在体内外不仅可以被诱导分化为中胚层细胞,而且可以分化为内胚层和神经外胚层细胞。间充质干细胞易分离,体外可大量扩增,异体移植不引起免疫排斥反应,在细胞治疗和组织工程中具有广阔的应用前景。经过适当诱导,间充质干细胞可能成为胰岛β细胞的来源之一。就间充质干细胞的生物学性状和优势,以及诱导分化为胰岛β细胞的技术方法和发展趋势进行了综述。
- 于瑾王启伟陈昭烈
- 关键词：间充质干细胞分化胰岛Β细胞诱导分化多向分化潜能成体干细胞中胚层
- BMP12转染骨髓间充质干细胞的瞬时表达被引量：2
- 2004年
- 目的 以骨形态发生蛋白 1 2 (BMP1 2 )基因转染骨髓间充质干细胞 ,探讨骨髓间充质干细胞定向分化为肌腱细胞的可行性。方法 将携带有BMP1 2基因的质粒pEGFP C1 ,采用电穿法转染骨髓间充质干细胞 ,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白 (GFP)表达情况。结果 转染后 6h可见细胞内有GFP表达 ,1 2h后达高峰 ,持续约 3天 ,其后有些细胞荧光开始减退。结论 BMP1 2基因转染骨髓间充质干细胞后 ,骨髓间充质干细胞内有GFP表达 ,提示细胞转染成功 。
- 王启伟王万山朴英杰
- 关键词：间充质干细胞基因转染绿色荧光蛋白
- 大鼠坐骨神经再生过程中的神经元轴突自噬作用
- 2004年
- 目的:探讨大鼠坐骨神经变性轴突清除中的自噬作用。方法:横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,造模后不同时间点取远断端组织行电镜结构观察和酸性磷酸酶(AcPase)活性检测。结果:坐骨神经横切后轴突发生变性,主要变化为术后第5h～2d轴质肿胀,轴突与髓鞘分离,术后第4d轴质浓缩,轴突与髓鞘完全分离形成游离轴突体。术后初期变性轴突主要形成大小不等的空泡,后期轴突与髓鞘完全分离并形成较大的游离轴突体,轴突体外包一层轴突膜是神经元细胞膜的延续,轴突体轴质浓缩,含大量各级自噬泡和纵横交错的神经丝、微管和微丝。经酸性磷酸酶(AcPase)染色证实自噬泡均呈AcPase阳性,第7d后轴突体被降解吸收,形成的空腔内偶见巨噬细胞。结论:大鼠坐骨神经再生过程中变性轴突的清除主要靠轴突自身的自噬和施万细胞吞噬机制,而巨噬细胞只起辅助作用。
- 朴仲贤王万山徐锡金王启伟韩明虎朴英杰
- 关键词：神经元轴突髓鞘坐骨神经再生自噬作用胞吞
- 人生长分化因子-5完整成熟肽基因的克隆
- 2004年
- 目的 :克隆人生长分化因子 5 (hGDF 5 )完整成熟肽基因。方法 :根据Genbank中hGDF 5的序列化学合成两条引物 ,从人胎儿软骨组织提取总RNA ,通过反转录聚合酶链式反应 (RT PCR )得到hGDF 5完整成熟肽基因。将所得基因片段插入克隆载体 pMD18 T并转化大肠杆菌DH5α ,提取重组质粒 ,酶切鉴定并测序。结果 :DNA琼脂糖凝胶电泳显示 :PCR产物为一长约 3 80bp的带 ,阳性克隆质粒经双酶切可切出约 3 80bp的片段。全自动DNA测序表明与Genbank中的序列完全相符。 结论 :通过反转录聚合酶链式反应从人胎儿软骨组织中成功克隆出人GDF 5完整成熟肽基因 ,基因序列完全正确。
- 王万山王启伟朴仲贤朴英杰
- 关键词：生长分化因子-5克隆
- Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基的设计被引量：2
- 2013年
- 目的:设计适用于Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。方法:以商品化的DMEM/F12合成培养基为基础培养基,应用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法设计支持Vero细胞微载体培养的化学成分明确无血清培养基。结果:以细胞密度为评价指标,在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman实验设计考察10种培养基添加成分对Vero细胞生长的影响,确定了3种对Vero细胞生长起明显促进作用的培养基添加成分,为胰岛素、血清素和腐胺。继而利用响应面法分析了这3种添加成分的最佳水平范围,设计了一种支持Vero细胞贴附培养的无血清培养基(VERO-SFM-A)。在Bellco搅拌式培养瓶中采用VERO-SFM-A和Cytodex 1微载体培养Vero细胞,细胞密度由接种时的4×105cells/ml增加到培养6 d后的22.3×105cells/ml,细胞活力保持在96%以上。结论:VERO-SFM-A能够有效地支持Vero细胞在微载体表面固定化生长并达到较高的细胞密度,具有实际应用于Vero细胞微载体规模化培养的应用潜力。
- 刘红陈天李世崇叶玲玲王启伟陈昭烈
- 关键词：无血清培养基VERO细胞微载体细胞培养
