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肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定被引量：3: 2000年; 肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌 ,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难 ,本实验以寡核苷酸引物YH1 YH2、YH7 YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,通过改变各种反应条件 ,建立了这两种病原因子基因的PCR检测方法。用此方法对 2 0株肺炎链球菌标准菌株及 7株对照菌株进行了鉴定 ;其扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和和AccI进行酶切以确认扩增产物是否正确 ;用酚氯仿抽提纯化的全细胞DNA对PCR方法的检测灵敏度进行了测定 ;并利用此方法对 2 8份临床标本分离物进行了鉴定。结果　所有 2 0株肺炎链球菌均可分别用引物YH1 YH2、YH7 YH8扩增出 35 4bp和 30 7bp的DNA片段 ,而对照菌株均呈阴性 ;自溶素及溶血素基因的扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和AccI消化后产生的片段和预期的完全一致 ;两对产物均可从 10fg的全细胞DNA中扩增出目的DNA片段。所建立的两套PCR系统对 2 8份临床标本分离物进行鉴定 ,其中PCR阳性的 15份分离物经生化学特性检查被鉴定为肺炎链球菌。本试验所建立的两套PCR检测系统具有特异性强 ,灵敏度高及操作简单等优点 ,均可用于肺炎链球菌的鉴定。; 杨永红朱保权宁淑敏安真光王棣王兴民; 关键词：肺炎链球菌自溶素溶血素病原菌

沿微山湖地区神经毒素原性酪酸梭菌的土壤分布调查被引量：3: 1997年; 为了解神经毒素原性酪酸梭菌在微山湖地区土壤的分布情况，我们采集了该地区的土壤样品进行调查。５０份土样培养上清中，有１８份（３６％）检出了肉毒毒素，经中和试验证实均为Ｅ型。从其中的７份阳性样品中分离到产毒菌株，对分离菌株进行毒性测定、生化特性检查及其神经毒素基因的ＰＣＲ检测，所有菌株均具有Ｅ型肉毒神经毒素基因并产生相应毒素，但其生化特性与Ｅ型肉毒梭菌不同，而与酪酸梭菌一致。结果说明沿微山湖地区土壤中确实存在神经毒素原性酪酸梭菌，而且阳性率很高。对神经毒素原性酪酸梭菌的分布进行流行病学调查并从土壤中分离到该病原菌，这在国际上尚属首次。; 邹开勇邝欣孟筱琦王兴民陆俭王成怀; 关键词：肉毒梭菌流行病学土壤分布

TNF-α cDNA突变体在人膀胱癌细胞株EJ中的表达及作用被引量：1: 1999年; 目的探讨肿瘤坏死因子ＴＮＦαｃＤＮＡ突变体对膀胱癌的作用。方法以突变的ＴＮＦαｃＤＮＡ为目的基因，ｐｃＤＮＡ３．１（＋）为载体，用磷酸钙沉淀法将其导入人膀胱癌细胞株ＥＪ。结果ＰＣＲ检测证实外源基因整合于ＥＪ细胞内，放射免疫分析法检测转基因后细胞培养上清ＴＮＦα表达量为（０６６４±０２２５）ｎｇ／ｍｌ，小鼠肉瘤细胞Ｌ９２９杀伤试验证实其生物活性为４～８Ｕ／ｍｌ，软琼脂培养细胞集落形成抑制率为３６５％。结论ＴＮＦαｃＤＮＡ突变体用于膀胱癌的基因治疗是可行的。; 艾军魁陈一戎秦大山孟筱琦孟筱琦王志平王兴民王志平; 关键词：膀胱肿瘤基因治疗肿瘤坏死因子 CDNA 突变体

B型肉毒神经毒素基因的PCR检测被引量：4: 1997年; 本研究用一对Ｂ型肉毒神经毒素基因特异的寡核苷酸引物，扩增Ｂ型基因轻链区域一段２５３ｂｐ的ＤＮＡ片段，对２２株Ｂ型肉毒梭菌进行了鉴定，所试２２株Ｂ型肉毒梭菌其ＰＣＲ均为阳性。用Ｂ型肉毒梭菌ＣＭＣＣ（Ｂ）６４３５２对ＰＣＲ的检测灵敏度进行检查，可从６０个细菌中得到明显的扩增产物。用其它各型肉毒梭菌及其它梭状芽胞杆菌共５３株对ＰＣＲ的特异性进行了检测，除一株Ａ型肉毒梭菌（ＬＣＬ００１）ＰＣＲ为阳性外，其余菌株均为阴性。ＬＣＬ００１的扩增产物其分子量以及限制性内切酶消化产物和Ｂ型肉毒梭菌的扩增产物完全一致，认为该株菌中带有不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，应为Ａ（Ｂ）型。由此可见，该ＰＣＲ扩增系统不仅具有灵敏度高，特异性强等特点，而且可检测出不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，用于肉毒梭菌的鉴定具有其它方法不可比拟的优点。; 王兴民孟筱琦王成怀; 关键词：肉毒神经毒素基因 PCR

酶联免疫吸附试验检测A型产气荚膜梭菌肠毒素被引量：4: 1994年; 本实验建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测产气荚膜梭菌肠毒素的实验体系。以家兔单特异ＩｇＧ包被酶标板，辣根过氧化物酶标记的绵羊ＩｇＧ作为指示物，可检测出１．２５ｎｇ／ｍｌ（０．１２５ｎｇ）的产气荚膜梭菌肠毒素，线性范围大，重复性及稳定性好，对培养上清及粪便滤液检查无非特异反应。是产气荚膜梭菌食物中毒实验室诊断的一种快速可靠的检测方法。; 王兴民王成怀; 关键词：产气荚膜梭菌肠毒素 ELISA 食物中毒

首次自肉毒中毒食品中分离的一株产生E型肉毒毒素的酪酸梭菌被引量：8: 1996年; 对某卫生防疫站委托本研究室分离病原菌的一份引起肉毒中毒的食品一＂黄豆冬瓜酱＂进行检测和病原菌的分离，从中再次检出了Ｅ型肉毒毒素并分离到一产毒菌种，对该菌种的生物学及生化学特性进行检查，并检测其毒素基因（ＰＣＲ试验）。结果：该分离菌能产生Ｅ型肉毒毒素，ＰＣＲ检测结果也证明其具有Ｅ型肉毒神经毒素基因，但其多项生化特性与Ｅ型肉毒梭菌有明显差异，而与酪酸梭菌完全一致。结果说明该分离菌系产生Ｅ型肉毒毒素的酪酸梭菌，而非Ｅ型肉毒梭菌。由酪酸梭菌引起的食物中毒型肉毒中毒并从中毒食品中分离到该病原菌，这在国际上尚属首次报告。; 邹开勇邝欣孟筱琦王兴民吕存女王成怀; 关键词：肉毒中毒食物中毒

聚合酶链式反应快速检测E型肉毒神经毒素基因被引量：4: 1998年; 目的Ｅ型肉毒中毒是人类肉毒中毒的主要型别之一，本试验旨在建立用于Ｅ型肉毒梭菌鉴定的ＰＣＲ方法。方法用人工合成的寡核苷酸引物扩增Ｅ型肉毒神经毒素基因的一段３６８ｂｐ的ＤＮＡ片段，快速检测Ｅ型肉毒神经毒素基因，对梭状芽胞杆菌属的４０株保藏菌株及３３份土壤标本进行了鉴定，用Ｅ型肉毒梭菌ＣＭＣＣ（Ｂ）６４５０１对其灵敏度进行了检查。结果从所有Ｅ型神经毒素原性菌株或标本均能扩增出目的片段，且能用特定的限制性内切酶切成相应的片段。其它菌株均未能扩增出目的片段。灵敏度试验可从３０个菌体扩增出目的片段。结论此方法用于Ｅ型神经毒素原性梭菌的鉴定具有较高的灵敏度及特异性。; 王兴民孟筱琦邹开勇邝欣王成怀; 关键词：E型肉毒神经毒素基因聚合酶链反应

A 型肉毒神经毒素基因的 PCR 检测及 A 型肉毒梭菌的鉴定被引量：10: 1997年; 建立快速诊断及定型神经毒素对肉毒中毒的治疗、降低死亡率具有十分重要的意义。用一对Ａ型肉毒梭菌特异的寡核苷酸引物，扩增Ａ型肉毒神经毒素基因轻链区域一段４７２ｂｐ的ＤＮＡ片段，对梭状芽胞杆菌属的１０种６８株菌进行了鉴定，并对ＰＣＲ检测Ａ型肉毒神经毒素基因的灵敏度进行了检查。结果表明，所有２０株Ａ型肉毒梭菌ＰＣＲ扩增均为阳性，其余各型肉毒梭菌及其它各种梭菌均为阴性。扩增产物经限制性内切酶分析与预期的酶切片段一致。用溴化乙锭对扩增产物染色，可从３×１０３个细菌中检测出Ａ型肉毒神经毒素基因。用酚－氯仿抽提Ａ型肉毒梭菌全菌体ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，可从１０ｐｇ的ＤＮＡ中得到清晰的扩增产物。由此可见，该ＰＣＲ扩增系统用于Ａ型肉毒神经毒素基因的检测具有灵敏度高，特异性强等特点，为Ａ型肉毒梭菌的鉴定及肉毒中毒的快速诊断提供了一种新的手段。; 王兴民孟筱琦王成怀; 关键词：肉毒梭菌肉毒神经毒素基因 PCR

多重聚合酶链式反应检测C、D型肉毒神经毒素基因被引量：6: 1999年; 目的为了建立检测Ｃ、Ｄ型肉毒神经素基因的ＰＣＲ方法。方法用人工合成的两对寡核苷酸引物于同一反应管中扩增Ｃ、Ｄ型肉毒素基因的一段ＤＮＡ片断，建立了用于Ｃ、Ｄ型肉毒神经毒素基因检测的多重ＰＣＲ方法。用多重聚合酶链式反应对梭状芽胞杆菌属的１０种２６株菌进行了鉴定，并对其特异性及灵敏度进行了检查。结果当样本中同时含有Ｃ、Ｄ型的模板ＤＮＡ时用该ＰＣＲ系统可同时扩增出Ｃ、Ｄ型的目的片段，分别为９９９ｂｐ和４０４ｂｐ，其它各型肉毒酸梭菌及其它梭菌均为阴性，灵敏度较Ｃ、Ｄ型分别扩增偏低，Ｃ型为４５０ｐｇ，Ｄ型为１０ｐｇ。结论该ＰＣＲ系统可用于Ｃ、Ｄ型肉毒梭菌的鉴定。; 王兴民孟筱琦王成怀; 关键词：肉毒神经毒素基因检测聚合酶链反应

酶联免疫吸附试验检测艰难梭菌A毒素被引量：2: 1996年; 实验用兔单特异抗艰难梭菌Ａ毒素ＩｇＧ包被酶标板，以羊抗艰难梭菌Ａ毒素ＩｇＧ标记辣根过氧化物酶作为第二抗体，采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测艰难梭菌Ａ毒素，可检测出０．９４ｎｇ的精制Ａ毒素，对６１株菌的培养液及６５份健康人粪便标本检测发现此法具有较高的特异性。用平行线定量法对几份典型产毒培养物进行了定量测定，结果表明，在一定剂量范围内线性及平行性好，结果准确、可靠。可用于临床粪便标本中艰难梭菌Ａ毒素的筛查及定量检测。; 王兴民邝欣孟筱琦王成怀; 关键词：艰难梭菌 ELISA 诊断试剂

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王兴民

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