沈飞
- 作品数：63 被引量：73H指数：5
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“135”重点学科科研基金江苏省基础研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 2B/2M型VWD的A1区突变联合血小板膜糖蛋白GPⅠbα影响ADAMTS13水解VWF的功能研究
- 目的:血浆中,血管性血友病因子(VWF)多聚体分子大小由金属蛋白酶ADAMTS13特异性调节.血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰα重组片段结合VWF的A1区后可以增强ADAMTS13水解VWF的能力.而2B型和2M型血管性血友病(...
- 马珍妮苏健白霞沈飞谢丽倩阮长耿
- 血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体的鉴定以及生物学功能的研究被引量：2
- 2016年
- 目的:构建并鉴定血管血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体,并研究其生物学功能。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截断型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠,经标准单克隆抗体技术制备单克隆抗体。用ELISA方法鉴定单克隆抗体的特异性;应用免疫印迹技术确定单克隆抗体与全长ADAMTS13的识别能力;观察单克隆抗体对ADAMTS13水解v WF的影响。结果:最终获得6株抗ADAMTS13的单克隆抗体,克隆号分别为1G11、2F11、6G3、9E1、10A8、10B4。经ELISA鉴定,纯化后的单克隆抗体1G11和2F11的效价最高,与截断型ADAMTS13-T7蛋白结合能力比较,明显高于全长ADAMTS13蛋白。Western blotting结果显示,6个单克隆抗体都能与全长ADAMTS13结合,其中1G11和2F11条带最亮。功能实验表明,在变性条件下1G11和2F11能够明显抑制ADAMTS13水解v WF,并随着单克隆抗体浓度的增加而抑制作用增强。结论:成功获得针对ADAMTS13的单克隆抗体,其中两株为抑制性功能抗体。
- 马珍妮凌婧沈飞谢丽倩殷杰苏健阮长耿
- 关键词：血管性血友病因子裂解蛋白酶血管性血友病因子单克隆抗体
- 阻断VWF与胶原结合的抗人VWF A3区单抗的制备和鉴定研
- ＜正＞研究背景:血栓性疾病,是最常见的死亡病因之一, 且其发病率仍在不断上升。作为血栓的主要组成成份, 特别是在动脉血栓和微血管止血栓子中,血小板和 von Willebrand Factor（VWF）在血栓形成中起着关...
- 赵益明沈飞谢丽倩董宁征阮长耿
- 文献传递
- 重组血小板糖蛋白Ibα活性片段在CHO细胞中表达及其功能研究被引量：3
- 2007年
- 目的:建立表达重组糖蛋白Ibα活性片段(rGPIbαH1-V289)细胞株,并且纯化其表达产物,研究其生物学功能。方法:利用脂质体将含有编码GPIbαH1-V289的DNA质粒pCMV3转染CHO细胞。用亲和层析法纯化重组片段。用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产品的纯度和免疫学活性。用血小板聚集法检测纯化产品对瑞斯托霉素诱导血小板聚集功能的影响。用ELISA测定纯化产品对vWF与血小板结合能力的影响。结果:每1L培养上清液可纯化到6.15mgrGPIbαH1-V289重组产品。SDS-PAGE显示,纯化的重组片段主要在42kD处显一蛋白区带,Western blot显示,抗GPIbα单抗SZ-2能与重组片段在42kD处显单一蛋白区带。纯化重组片段能抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能。ELISA测定显示纯化产品抑制血浆vWF与血小板的结合能力。结论:CHO细胞株A1能恒定表达rGPIbαH1-V289,重组片段具有较高的纯度、免疫学活性和生物学活性,有可能开发为有效的抗血栓药物。
- 赵益明邵波静董宁征沈飞阮长耿
- 关键词：CHO细胞纯化
- 阻断VWF与胶原结合的抗人VWF A3区单抗的制备和鉴定研
- 赵益明沈飞谢丽倩董宁征阮长耿
- 一种抗人血管性血友病因子裂解酶的抑制性单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗人血管性血友病因子裂解酶的抑制性单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体属于IgG1亚类抗体，由杂交瘤细胞株SZ‑169产生；其中，杂交瘤细胞株SZ‑169的保藏编号为CCTCC NO:C2016134。与现...
- 马珍妮凌婧沈飞冯宇锋苏健阮长耿
- 文献传递
- 沙利度胺对AnnexinⅡ基因的调节作用
- 2009年
- 目的了解沙利度胺存体外对人多发性骨髓瘤（MM）细胞系RPMI8226、人微血管内皮细胞系HMEC-1中AnnexinⅡ（AnxA2）基因表达的调节作用，探讨沙利度胺诱发血栓的可能机制。方法实时荧光定量PCR检测在不同浓度下沙利度胺对两种细胞系AnxA2 mRNA表达的影响，采用流式细胞术、激光共聚焦仪检测不同浓度下沙利度胺对细胞膜表面AnxA2蛋白表达的影响。结果当沙利度胺浓度为12．5、25．0、50．0μg／ml时，RPMI8226细胞AnxA2 mRNA表达水平为0．60±0．15、0．33±0．14、0．42±0．16，较对照组（1．07±0．16）降低（P〈0．05），HMEC-1细胞AnxA2 mRNA表达水平为0．21±0．20、0．08±0．08、0．17±0．16，较对照组（1．16±0．24）降低（P〈0．05）。沙利度胺浓度为12．5、25．0、50．0μg／ml时，RPMI8226细胞膜表面AnxA2蛋白表达水平为3．39±0．32、2．82±0．28、3．21±0．23，较对照组（5．53±0．32）降低（P〈0．05），HMEC-1细胞膜表面AnxA2蛋白表达水平为0．72±0．11、0．64±0．08、0．67±0．08，较对照组（1．40±0．15）降低（P〈0．05）。结论沙利度胺能抑制RPMI8226和HMEC-1细胞AnxA2 mRNA和蛋白表达，可能为其诱发骨髓瘤血栓形成的原因之一。
- 包红雨江淼沈飞朱明清阮长耿
- 关键词：沙利度胺RPMI8226细胞血栓形成
- 阻断血管性血友病因子与胶原结合的抗人vWF—A3单抗的鉴定和功能研究
- 2008年
- 目的制备阻断血管性血友病因子（von Willebrand因子）A3区（vWF-A3）与胶原结合的抗vWF-A3单抗，并对其进行生化鉴定和功能研究。方法用重组vWF-A3蛋白免疫BALB／c小鼠，经标准的方法制备单抗。用ELISA法鉴定单抗特异性，经vWF胶原结合抑制试验筛选获得抑制性单抗，用免疫印迹技术确定单抗与重组（r）vWF-A3和还原性人vWF识别的抗原分子。经胶原结合试验确定单抗对vWF与胶原结合的影响。结果获得一组共30株抗vWF-A3单抗，其中两株确定为抑制vWF与胶原结合的单抗，分别命名为SZ-123和SZ-125，两株单抗分别与rvWF-A3和vWF强反应，而不与rvWF-A1、A2反应。免疫印迹分析显示SZ-123和SZ-125分别识别相对分子质量为27×10^3的rvWF-A3、250×10^3还原性人vWF单体和170×10^3的vWF酶切片段。单抗SZ-123和SZ-125不仅剂量依赖性地抑制纯化的人血浆vWF与人胎盘和牛皮肤Ⅲ型胶原结合，而且分别抑制人、猕猴或Beagle犬血浆vWF与人胎盘和牛皮肤Ⅲ型胶原结合。结论抗vWF-A3单抗SZ-123和SZ-125是两株抑制性单抗，有望成为具有治疗潜力的抗血栓药物。
- 赵益明董宁征沈飞谢丽倩阮长耿
- 关键词：WILLEBRAND因子胶原
- 抗血管性血友病因子抗体在特发性血栓性血小板减少性紫癜发病机制中的作用被引量：4
- 2012年
- 目的在具有正常血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性血栓性血小板减少性紫癜（1vrP）患者血浆中检测是否存在抗血管性血友病因子（VwF）自身抗体，并通过体外实验验证鼠源性抗人VwF单克隆抗体（单抗）是否可以降低ADAMTS13对VwF的裂解活性。方法本研究为临床实验诊断研究。应用酶联免疫吸附试验对53例成人特发性1TrP患者检测抗VWF自身抗体，采用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳进行VwF多聚体分析，检测是否存在超大分子量VwF（uL—VWF）多聚体。并且，在高剪切力和变性条件下分别观察8种鼠源性抗VwF单抗对重组ADAMTS13（rADAMTS13）裂解血浆源纯化VwF的活性的影响。结果在2例具有正常血浆ADAMTS13活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性TrP患者血浆中检测到抗VwF自身抗体和UL—VwF多聚体。另外，一种鼠源性抗人VwF单抗SZ34在高剪切力条件下能够降低rADAMTS13对VwF的水解活性，但在静态／盐酸胍变性条件下并无此影响。结论抗VwF抗体有可能是具有正常ADAMTS13活性且不存在抗ADAMTS13自身抗体的特发性TTP患者的发病原因之一。
- 张敬宇刘芳马珍妮董宁征苏健赵益明沈飞汪安友阮长耿
- 关键词：VONWILLEBRAND因子自身抗体
- 阿魏酸抑制培养人内皮细胞粘附分子的表达被引量：5
- 2003年
- 观察阿魏酸对活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响,以探讨其抗动脉粥样硬化的部分分子机制。用10 mg/L脂多糖刺激培养的人脐静脉内皮细胞4 h,诱导其表达E-选择素;用300μmol/L过氧化氢刺激内皮细胞2 h,诱导其表达P-选择素。部分细胞在刺激前30 min用0.21、0.41或0.62 mmol/L阿魏酸预处理。用流式细胞术检测内皮细胞粘附分子表达水平,用逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞E-选择素mRNA表达水平。结果发现,阿魏酸抑制内皮细胞E-选择素及P-选择素表达,同时抑制E-选择素mRNA表达。提示阿魏酸抗动脉粥样硬化作用可能与其抑制内皮细胞粘附分子表达有关。
- 王晓岚胡晓慧盛茗沈飞李佩霞阮长耿
- 关键词：流式细胞术内皮细胞P-选择素
