毕莹
- 作品数：16 被引量：30H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金黑龙江省高校科技创新团队建设计划项目黑龙江省农垦总局科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 牛传染性鼻气管炎病毒多表位重组嵌合蛋白及其应用
- 本发明提供牛传染性鼻气管炎病毒多表位重组嵌合蛋白及其应用。所述重组嵌合蛋白由破伤风毒素通用T细胞表位多肽P2，牛传染性鼻气管炎病毒gB上的抗原表位gB‑A、gB‑B，牛传染性鼻气管炎病毒gC上的抗原表位gC‑A、gC‑B...
- 冉旭华闻晓波仝晓丹范春玲张旭倪宏波毕莹
- 菌乐对三种猪源致病菌的最小抑菌浓度测定
- 2014年
- 应用试管稀释法和平板培养法,用临床分离得到的猪源金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌对海正药业生产的菌乐进行了最小抑菌浓度测定。结果显示,菌乐对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2.5μg·mL-1×2=5μg·mL-1;对大肠杆菌的最小抑菌浓度为5μg·mL-1×8=40μg·mL-1;对链球菌的最小抑菌浓度为0.05μg·mL-1×60=3μg·mL-1。
- 王彬邢思毅齐晓雪毕莹常春龙张建军
- 关键词：最小抑菌浓度耐药性
- 牛病毒性腹泻黏膜病毒E2基因的原核表达与免疫原性分析被引量：2
- 2017年
- [目的]原核表达牛病毒性腹泻黏膜病毒(BVDV)E2基因编码蛋白。[方法]采用PCR方法从BVDV中扩增E2基因片段,与原核表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-E2,转化E.coli(Rosetta)感受态细胞,重组菌用1 mmol/L IPTG诱导表达E2蛋白,进行SDS-PAGE电泳,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,经Western blot分析鉴定免疫原性。[结果]重组质粒pET-32aE2经PCR及酶切鉴定证明构建正确,重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为58 kDa,纯化后E2重组蛋白浓度0.521 mg/mL,Western blot分析表明,其能被BVDV阳性血清识别,具有很好的免疫原性。[结论]E2蛋白成功表达,为后续建立BVDV检测方法奠定了基础。
- 王宇婷马莉莉李晓月王士霞毕莹倪宏波
- 关键词：E2基因原核表达
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- <正>引言牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）属于疱疹病毒科水痘病毒属成员;牛经鼻呼吸道或生殖道感染,表现出急性发热性呼吸困难,乳汁减少,体重降...
- 倪宏波毕莹闻晓波朴范泽
- 文献传递
- 传染性鼻气管炎病毒gD基因表位的原核表达与纯化
- 2015年
- [目的]对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D基因表位进行原核表达,并对表达产物进行纯化鉴定。[方法]利用PCR扩增出g D基因3段表位即g D-A、g D-B、g D-C,并构建原核表达重组质粒p ET-28a-g D。将其转入BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达。表达的g D重组蛋白经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。[结果]重组表达质粒p ET-28a-g D经PCR、双酶切及测序证明构建正确。SDSPAGE表明,g D蛋白在大肠埃希菌中高效表达,表达的重组蛋白相对分子量约48 ku,与预期的蛋白分子量一致。纯化后的g D重组蛋白浓度为0.128 mg/ml,免疫印迹结果显示纯化后的g D重组蛋白能与IBR标准阳性血清发生特异性反应,说明其免疫原性良好。[结论]成功表达了g D基因表位蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防IBR基因工程亚单位疫苗的候选抗原。
- 王欣王琦齐晓雪毕莹倪宏波
- 关键词：IBRGD纯化亚单位疫苗
- 黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力和耐药基因检测分析被引量：10
- 2015年
- 为了了解黑龙江地区牛源大肠杆菌毒力基因及主要治疗药物耐药基因的分布,试验采用KB(Kirby-Bauer)法和PCR方法检测了2011—2013年从黑龙江地区各规模化养牛场分离的66株大肠杆菌的毒力和耐药基因。结果表明:66株大肠杆菌中有33株带有毒力基因,检出率达到50.0%,携带1种及其以上的毒力基因分别为30株和3株,占阳性菌株总数的91.0%和9.1%;耐药基因检出率分别为磺胺类耐药基因Sul1/Sul2(32.1%)、Sul3(9.4%),氯霉素类耐药基因Cat1(15.1%)、Cml A(13.2%)、Flor(15.1%),氨基糖苷类耐药基因aph A3(1.9%)、aad A(22.6%)、aac C2(22.6%)、aac C4(20.8%)。
- 张洋龙郎秀艳蒋惠婷刘娇毕莹张建军常春龙倪宏波
- 关键词：大肠杆菌毒力基因耐药基因药物
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病小鼠模型的建立被引量：3
- 2015年
- 为了探究猪传染性胸膜肺炎的危害性，采用猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌株（APP-7）通过不同的途径感染常用实验动物，筛选出易感实验动物和最佳感染条件，构建感染动物模型。结果表明：感染小鼠的半数致死量（LD50）为6．7×10^7CFU，成功建立了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌小鼠动物模型；小鼠感染细菌后表现出一系列病理变化，如呼吸困难，食欲减退，精神沉郁等，与自然发病的典型病例相似。
- 张建军邢思毅常春龙齐晓雪常敬伟毕莹倪宏波
- 关键词：小鼠胸膜肺炎放线杆菌半数致死量动物模型
- 猪流行性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染的病例报告被引量：1
- 2014年
- 猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）在1976年,中国首次报道了该病.在之后的20年间,该病已经在我国的20多个省份爆发,给农民及养猪业造成了巨大的损失.在欧洲,猪流行性腹泻病毒引起的腹泻主要集中在架子猪、育肥猪及青年种猪.在我国,各年龄的猪都极易感染PEDV的猪群.在寒冷季节,猪的病毒性腹泻主要由猪流行性腹泻病毒引起,保育与育肥猪的群的感染率较高于哺乳仔猪和母猪.
- 王彬邢思毅齐晓雪毕莹
- 关键词：猪流行性腹泻大肠杆菌
- 牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：1
- 2016年
- 为了对牛病毒性腹泻病毒进行分离鉴定,本试验通过对黑龙江省完达山牛场疑似感染牛病毒性腹泻病毒患牛的直肠粪便以及鼻拭子进行无菌采集,样品经常规处理后接种于MDBK细胞,盲传3次以及PCR扩增鉴定,最后对收集到的病毒进行蚀斑纯化试验。结果表明,病毒MDBK细胞出现明显病变,PCR鉴定与预期结果相符,3次蚀斑纯化后分离到该病毒。结论可成功分离到牛病毒性腹泻病毒。
- 毕莹倪宏波
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒
- 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2018年
- 目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)g E蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定。方法将扩增的IBRV gE基因插入至载体p ET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,3×10~6个/只,待小鼠腹腔膨大后,采集腹水,硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,并进行亚类、浓度、染色体数目、Western blot及间接免疫荧光检测。结果重组蛋白IBRV gE相对分子质量约35 000,纯化后浓度为1.2 mg/mL。小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选出1株稳定分泌IBRV单抗的杂交瘤细胞(命名为3G9),获得相应抗体浓度为1.46 mg/m L;为IgG1亚类,轻链为kappa链;染色体数目为95~105;可与IBRV发生特异性反应;可与接种IBRV毒株的MDBK细胞发生特异性结合,产生特异性荧光。结论采用原核表达系统表达并纯化了IBRV gE蛋白,成功制备了抗IBRV gE的单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究奠定了基础。
- 赵微毕莹闻晓波倪宏波
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体
