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去泛素化酶UCH-L1在血管平滑肌细胞迁移中的作用: 目的:研究一种去泛素化酶——泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的生物学作用,为深刻认识动脉粥样硬化等血管疾病的病理生理学机理提供新的科学依据。方法:1.采用组织块贴壁法体外培养健康雄...; 刘晓华段梦张志清冷雪王立群吴磊; 文献传递

泛素C端水解酶L1的RNA干扰载体的构建及效果评价: 2013年; 目的:获得抑制效果好的泛素C端水解酶L1(UCH-L1)基因小干扰RNA(siRNA)干扰载体。方法:根据Gen Bank中大鼠UCH-L1基因序列设计并合成4对siRNA寡核苷酸序列,将4对寡核苷酸序列退火成双链后分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR中构建4个siRNA表达质粒,测序鉴定后将4个siRNA表达质粒分别转染HEK293细胞,利用Western印迹和qPCR方法检测干扰效果;将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒,感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),并采用TNFα干预诱导UCH-L1表达升高,Western印迹验证干扰效果。结果:测序分析证实4对siRNA寡核苷酸序列分别插入siRNA表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR;qPCR检测与Western印迹均表明第3号siRNA表达载体对UCH-L1表达的抑制程度最高,将其包装成腺病毒并转染VSMC能显著抑制TNFα诱导的UCH-L1表达升高。结论:构建并筛选出干扰效果好的UCH-L1 siRNA干扰载体。; 赵博刘晓华段梦张志清冷雪王立群武磊段瑞峰王广增张艳淑; 关键词：RNA干扰 HEK293细胞

去泛素化酶UCH-L1在血管平滑肌细胞迁移中的作用及其分子机制的研究: 目的:研究种去泛素化酶──泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的生物学作用,探索UCH-L1通过影响核转录因子(NF-κB)活性调控VSMC迁移的分子机制,为深刻认识动脉粥样硬化等血管...; 段梦; 关键词：血管平滑肌细胞细胞迁移 NF-ΚB; 文献传递

慢性束缚应激致心肌损伤线粒体机制的关键调控蛋白质研究: ＜正＞大量研究已经证明应激在心血管疾病的发生、发展过程中具有重要的作用,但应激所致心肌损伤的分子基础及关键调控环节至今还不清楚。为了探索应激心肌损伤的蛋白质基础和分子作用机制,本系列研究采用多种技术手段研究了慢性束缚应激...; 王新兴刘晓华孔瑞瑞战锐王小明冷雪弓景波段梦王立群万帝陈明武磊钱令嘉; 关键词：束缚应激心肌损伤线粒体 NGFI-B; 文献传递

TNF-α诱导的血管平滑肌细胞迁移中UCH-L1蛋白表达水平变化被引量：2: 2011年; 目的研究UCH-L1在TNF-α诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移过程中蛋白表达水平的变化规律,为探索UCH-L1在VSMC迁移中的作用提供依据。方法用组织块贴壁法体外培养大鼠VSMC,以改良的Boyden chamber方法和划痕法观察TNF-α对VSMC迁移的诱导作用;Western blot检测VSMC迁移过程中UCH-L1的蛋白表达水平变化。结果 Boyden chamber实验中,无TNF-α时细胞迁移数目约为(15.0±3.9)个,当TNF-α质量浓度为10 ng/ml时,细胞迁移数目达到最大,约(75.0±9.2)个(P<0.01),而以100 ng/ml TNF-α诱导时,细胞迁移数目降至(26.0±6.1)个。划痕实验中,随着TNF-α诱导时间的延长划痕间距变小,表明细胞迁移增加,约12 h始,划痕间距变小,有统计学意义(P<0.05);48 h时,细胞划痕间距接近至完全融合状态。在10ng/ml TNF-α诱导大鼠VSMC迁移过程中,诱导12 h时,UCH-L1蛋白表达水平开始明显升高(P<0.05),且随着诱导时间延长VSMC内UCH-L1蛋白表达水平呈逐渐升高的变化趋势。结论 TNF-α对大鼠VSMC迁移的诱导作用呈剂量和时间依赖关系,UCH-L1在TNF-α诱导的大鼠VSMC迁移过程中可起到调节作用。; 段梦王立群战锐冷雪钱令嘉刘晓华; 关键词：血管平滑肌细胞迁移 TNF-Α

酵母双杂交筛选心脏cDNA文库中与人热激蛋白70相互作用的蛋白质: 2011年; 目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质。方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Yl87进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果:构建了"诱饵"质粒栽体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP。结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关。; 张志清刘晓华段梦商艳芬王立群冷雪钱令嘉; 关键词：热激蛋白70 酵母双杂交系统相互作用蛋白质

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段梦