柴文文
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金湖南省科技厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组腺病毒pAdxsi-eGFP-rNIS的构建及初步应用
- 2010年
- 目的构建包含rNIS和eGFP基因的重组腺病毒载体及初步应用。方法以CMV为启动子,将pShuttle-eGFP-CMV重组穿梭载体和含有目的基因rNIS的原始质粒酶切后,电泳、切胶回收,分别得到载体片段和插入片段。连接酶连接两种片段后,转化化学感受态DH5a菌株,涂布到抗性固体培养基中;挑取单克隆菌落,接种到抗性液体培养基培养;提取pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒,酶切鉴定。用类似的方法将pShuttle-eGFP-CMV-rNIS重组穿梭质粒转移到pAdxsi重组腺病毒骨架载体上。在细菌内扩增培养后,提取pAdxsi-eGFP-rNIS病毒质粒,酶切鉴定。将最终的重组腺病毒Ad-eGFP-rNIS转染到A549细胞,荧光显微镜下观察、拍照;细胞与125I溶液培养后,γ计数器检测细胞放射性计数。结果rNIS构建到pShut-tle-eGFP-CMV(-)TEMP重组穿梭质粒中,并成功转移到pAdxsi重组腺病毒骨架载体上,经酶切鉴定,rNIS和eGFP均表达正确。荧光显微镜下,转染Ad-eGFP-rNIS的A549细胞可见大量强烈绿色荧光,未转染细胞未见明显绿色荧光。转染细胞摄取放射性计数为(29250±1441)cpm,未转染细胞摄取放射性计数为(490±27)cpm,两者之间的差异有统计学意义,t=15.2,P<0.001。结论成功构建了含rNIS基因的重组腺病毒载体,转染肿瘤细胞后rNIS功能正常,为下一步rNIS介导的肿瘤基因靶向治疗及分子显像奠定了基础。
- 胡硕赵敏柴文文李崇佼覃春霞陈荃张永学
- 关键词：基因重组腺病毒肿瘤
- 新型分子探针近红外荧光标记Zn-DPA监测肿瘤疗效的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨新型分子探针近红外荧光标记Zn-DPA(Zn-DPA-PSS794)通过光学成像监测阿霉素治疗卵巢癌疗效的可行性,并与Cy5.5-annexin V光学成像效果进行比较。方法:MTT和流式细胞术分析阿霉素对卵巢癌细胞株OVCAR-8的杀伤作用。将OVCAR-8种植到裸鼠皮下,成瘤后分为对照组和治疗组,每组再分2个亚组,即DPA组和annexin V组。治疗组静脉注射阿霉素,2次后各组裸鼠分别进行Zn-DPA-PSS794光学显像和Cy5.5-annexin V光学显像,并进行定量分析。处死裸鼠,分离肿瘤,切片后进行HE染色,Western印迹检测肿瘤组织中caspase-3蛋白表达水平。结果:阿霉素对OVCAR-8的IC50为6μmol/L,阿霉素能体外诱导OVCAR-8凋亡、坏死,总效率达35%。阿霉素治疗裸鼠移植瘤48h后,Zn-DPA-PSS794光学成像和Cy5.5-annexin V光学成像均为阳性,而对照组2种光学成像结果均为阴性,对照组和治疗组肿瘤部位的荧光强度差异有统计学意义(P<0.001)。肿瘤组织HE染色示肿瘤细胞核大,深染。治疗组中caspase-3蛋白高表达,而对照组低表达。结论:Zn-DPA-PSS794光学成像能有效监测阿霉素治疗OVCAR-8荷瘤裸鼠的疗效,与Cy5.5-annexin V显像效果类似。
- 胡硕柴文文刘治国尹楚南雷萌
- 关键词：ANNEXIN光学成像疗效监测
- NIS基因在恶性肿瘤中的研究进展被引量：1
- 2013年
- 恶性肿瘤的发生严重威胁着人类的生命健康。将基因治疗与靶向核素治疗相结合,即"基因靶向核素治疗"为肿瘤基因治疗开辟了一条崭新的途径。钠碘转运体(NIS)是存在于甲状腺滤泡细胞基底膜上的一种跨膜糖蛋白,介导碘的主动摄取,其摄碘功能是临床上治疗甲状腺疾病的基础。随着NIS基因的成功克隆以及基因治疗手段的发展,通过将NIS基因转染到甲状腺及非甲状腺肿瘤中,为131I靶向治疗恶性肿瘤的研究提供了新的思路。
- 柴文文胡硕
- 关键词：钠碘转运体基因治疗肿瘤放射性核素
- 人和大鼠骨髓间充质干细胞体外培养和生物学特性的对比研究被引量：1
- 2010年
- 目的对比体外分离培养的人和SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的生长情况和生物学特性。方法骨髓穿刺抽取健康成人的骨髓,SD大鼠处死后从股骨取骨髓,采用密度梯度法分离出BMSCs,MTT法测定两种细胞的生长曲线,用成骨、成脂培养基对细胞进行定向诱导分化。结果两种原代培养的BMSCs生长到第3代后,细胞形态均一、呈梭形排列,生长曲线提示人的BMSCs第9、15代仍有较强的增殖能力,第20代后增殖速度明显减慢。大鼠的BMSCs第8、16代增殖能力也很强,第30代仍有活力。2种干细胞都能成功诱导分化为骨细胞和脂肪细胞。结论人和大鼠骨髓间充质干细胞均能在体外分离培养,并具有多向分化潜能,大鼠的骨髓间充质干细胞增殖能力更强于人的骨髓间充质干细胞。
- 胡硕刘小云柴文文张永学
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养生物学特性
- NIS基因介导肺癌耐药细胞摄取放射性核素的显像研究
- 目的 研究人钠/碘转运体(hNIS)和鼠NIS(rNIS)介导肺腺癌耐药A549/DDP 细胞摄取放射性核素的差异性,并探讨NIS 作为报告基因介导A549/DDP移植瘤进行放射性核素显像的实验研究.
- 柴文文任蕾蔡梦婷赵敏邓豪余尹楚南杨喜春李灿胡硕
