杨寿钧
- 作品数：20 被引量：95H指数：7
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院院长基金中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 由烟曲霉产生的一种新的几丁质酶及其分离纯化方法
- 本发明得到一株Aspergillus fumigatus YJ-407，分离纯化了新几丁质酶，命名为chiM。它的分子量为46KDa，等电点pH5.6，N-末端氨基酸序列为：A-S-S-G-Y-R-S-V-V-Y-F-V...
- 金城夏国庆李玉德贾新成杨寿钧张树政
- 文献传递
- 利用蓖麻毒素(RCAI)亲和层析进一步分离纯化玉米精细胞被引量：3
- 1999年
- 利用ＲＣＡＩ＿Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＭＢ大孔径凝胶对玉米（ Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．） 离体活性精细胞进行亲和层析，结果表明，当精细胞数量小于ＲＣＡＩ＿凝胶的饱和吸附量（１．５ ×１０６／０．１ ｍＬ凝胶） 时，７０％ 左右的精细胞被特异性地吸附；４２．１％ 被吸附的精细胞可由专一性单糖（ｇａｌ） 一次性洗脱回收。而且镜检、活性检测及ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ电泳分析表明，所回收的精细胞仍具有一定的活性，尤其是具有较高的纯度。是否存在含有不同单糖残基的两种不同类型的玉米精细胞。
- 徐恒平金城杨寿钧张树政曹宗巽
- 关键词：玉米精细胞蓖麻毒素
- 产气气杆菌茁霉多糖酶的研究——Ⅰ.酶的提纯和性质被引量：3
- 1980年
- 产气气杆菌（Aerobacter aerogenes）10016的茁霉多糖酶（pullulanase E.C.3.2.1.41）用 Sephadex G100凝胶过滤、聚丙烯酰胺垂直板型凝胶电泳进行纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的纯酶。纯酶作用的最适温度为50℃,最适 pH 为5.3—5.8,耐热性较差,50℃4小时后仅存活力10%。纯酶在 pH4.3—8.6稳定。酶作用于糯米淀粉的米氏常数 Km 为2.0×10-2克/毫升。用聚丙烯酰胺薄层凝胶等电聚焦测定酶的等电点 pI 为3.8,用 SDS 凝胶电泳测定酶的分子量为51,000—52,000;此酶是一种糖蛋白;含糖总量为6.5—7.0%;纯酶能专一性的水解茁霉多糖、糯米淀粉,也能分解糊精,而不作用于糖原、纤维二糖以及环状糊精。
- 戈苏国杨寿钧张树政
- 关键词：米氏常数产气肠杆菌产气气杆菌茁霉多糖考马斯亮蓝胶淀粉
- 烟曲霉几丁质酶基因的克隆与表达被引量：16
- 2004年
- Chi4 4是烟曲霉 (Aspergillusfumigatus)YJ 4 0 7产生的一种胞外几丁质酶。通过用真菌几丁质酶保守氨基酸序列与Chi4 4的N 端序列检索烟曲霉部分基因组序列数据库 ,获得一个编号为contig5 5 5的烟曲霉基因组序列 ,可能包含烟曲霉几丁质酶的基因。根据检索结果用RT PCR方法从烟曲霉YJ 4 0 7中克隆到 1 4kb的cDNA片段 ,该cDNA的ORF编码一个 395个氨基酸的蛋白 ,分子量为 4 3 6kD。对其推导氨基酸序列分析表明该蛋白与其它真菌来源的几丁质酶同源 ,而且活性中心与人巨噬细胞几丁质酶高度同源。该cDNA已在E .coli与PichiapastorisGS115中获得表达 ,分别获得 4 3kD和 4 4kD的重组蛋白 ,两种重组蛋白均有几丁质酶活性。与野生酶相比 ,大肠杆菌表达的 4 3kD重组酶及Pichia酵母表达的 4 4kD重组酶稳定性下降 ,说明Chi4
- 王颖王俊琦胡红焱杨雪鹏杨寿钧余小应金城
- 非解朊栖热菌HG102耐热β-糖苷酶的结构与功能研究被引量：7
- 2005年
- 非解朊栖热菌HG10 2耐热 β_糖苷酶为 (β α) 8桶状结构 ,是具有水解功能和转糖苷功能的单体酶。该酶可以作为一个很好的模型来研究糖苷酶的反应机制、底物特异性和耐热的分子基础。根据对该酶的晶体结构解析和同家族酶的结构比较 ,推测Glu16 4和Glu338分别是质子供体和亲核基团两个活性位点 ;在α_螺旋N端第一位的脯氨酸和蛋白质外周的精氨酸是耐热机制的关键位点和关键氨基酸残基。为确定这些氨基酸残基的功能 ,通过基因定点突变的方法分别把Glu16 4、Glu338、Pro316、Pro35 6、Pro344和Arg32 5置换成Gln、Ala、Gly、Ala、Phe和Leu ,同时还对Pro316和Pro35 6进行了双置换。突变酶经过纯化得到电泳纯 ,用CD光谱进行了野生酶和突变酶的结构比较。通过突变酶的酶功能和酶学性质分析 ,结果表明Glu16 4和Glu338分别是质子供体和亲核基团 ,亲核基团的突变酶TnglyE338A可以合成混合型糖苷键寡糖类似物 ;在α_螺旋N端第一位的Pro316和Pro35 6以及在蛋白质外周形成离子键的Arg32 5均是对耐热性有贡献的关键氨基酸残基。
- 杨雪鹏杨寿钧韩北忠金城
- 关键词：热稳定性定点突变
- 嗜热菌的耐热 L-乳酸脱氢酶的研究被引量：8
- 1991年
- 从广东各地的热温泉(55—95℃)水样中,分离到200余株最适生长温度高于70℃的极端嗜热菌。其中一株编号为 HG25,具有耐热胞内 L-乳酸脱氢酶(L-Lactate dehydrogenase EC.1.1.1.27.,简称 LDH),有栖热菌属(Thermus)的特征,革兰氏阴性,无芽孢,好氧,不运动,产黄色素,最适生长温度为65—75℃,最高生长温度为85℃,最低为40℃,不水解淀粉,不从葡萄糖产酸,DNA 的 G+C 百分含量为65mol%,L-乳酸脱氢酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素柱层析作了初步提纯,比活提高7倍,LDH 还原丙酮酸反应的最适温度为60℃,最适pH为8.0,酶在70℃稳定,保温10分钟后,仍保留85%的原始酶活力。失活半寿期(t_(1/2))为85℃10分钟。
- 杨寿钧蔡妙英刘俊凤顾雅君王政一张树政
- 关键词：嗜热菌栖热菌属L-乳酸脱氢酶
- 耐热中性蛋白酶产生条件及酶的亲和层析纯化被引量：13
- 1994年
- 从云南西双版纳分离的耐热菌株中筛选到菌号为HY-69的菌株,经鉴定为嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus).该菌产中性蛋白酶.对该菌株的产酶条件进行了研究,酶的产量和耐热性均优于其它菌株.发酵液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀后以亲和层析纯化.粗酶分别以Cbz-L-phe-T-sepharose 4B和Cbz-D-phe-T-sepharose 4B纯化,并对两种材料的纯化效果进行了比较,得到了PAGE和SDS-PAGE均一的酶.
- 金城杨寿钧刘宏迪张树政
- 关键词：嗜热
- 一个产生L-乳酸脱氢酶的嗜热菌的新种——非解朊栖热菌被引量：9
- 1992年
- 从广东省阳江、电白和韶关等地55—95℃的温泉中采集水样,经分离得到21株 G^-、不产生芽孢的高温菌。它们都能产生 L-乳酸脱氢酶。根据表观特征,DNA 的同源性和 G+Cmol%等特征可归入栖热菌属(Thermus)。但对葡萄糖不产酸和不液化明胶等表型特征不同于已发表的种。又根据该群内的 DNA/DNA 杂交结果,有高的同源性(大多在80%以上),而与已发表的种仅有40.5—70.7%的同源性。结果表明可成立一独立的类群,建议为栖热菌属的一个新种,因具不液化明胶的特性,命名为非解朊栖热菌(Thermus nonproteolyticus Cai & Yangsp.nov.)。以菌株 HG-42为模式株,保藏于中国科学院微生物研究所。
- 蔡妙英杨寿钧刘俊风卫军
- 关键词：L-乳酸脱氢酶嗜热菌
- 人胎肝唾液酸转移酶基因的克隆及测序被引量：2
- 1999年
- 根据已克隆的唾液酸转移酶的保守区的序列，以人胎肝ｍＲＮＡ为模板扩增出１５０ｂｐ的片段并测序。其中一个片段（ｓ３８）与已克隆的唾液酸转移酶的活性中心有５７％～９７％的同源性。根据ｓ３８的序列合成寡核苷酸并标记后用作探针筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。从文库中分离了一个编码α２，３唾液酸转移酶的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ序列含一个编码３４０个氨基酸的开放读框，推导的氨基酸序列与人颌下腺Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃα２，３唾液酸转移酶相同，与猪颌下腺α２，３唾液酸转移酶有８３２％的同源性。表明从人胎肝ｃＤＮＡ文库中分离的ｃＤＮＡ所编码的蛋白为Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃα２。
- 尚杰邱若仑金城杨寿钧张树政
- 关键词：人胎肝CDNA克隆测序
- 来源于非解朊栖热菌HG102的耐热β-糖甘酶晶体结构研究
- ＜正＞ 糖苷酶是一类以内切或外切方式水解各种含糖化合物中的糖苷键,生成单糖、寡糖或糖复合物的酶。β-糖苷酶（EC 3.2.1.21）可以催化水解多种β构型的o-糖苷键,同时它还具有转糖苷作用。非解朊栖热菌HG102（Th...
- 王新泉何向远杨寿钧常文瑞梁栋材
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