李林
- 作品数：40 被引量：165H指数：7
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原核表达和制备EB病毒GST/BFRF3融合蛋白用于鼻咽癌的诊断筛查被引量：4
- 2013年
- 目的:构建表达EB病毒衣壳抗原BFRF3基因的原核细胞表达载体并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法:以EB病毒DNA为模版,采用PCR法扩增目的基因BFRF3,与原核表达载体PGEX-5X-1连接,构建PGEX-5X-BFRF3重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST/BFRF3融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定后,纯化目的蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群BFRF3-IgA抗体。结果:在大肠杆菌中成功地表达了GST/BFRF3融合蛋白,相对分子质量为44 kD,免疫印迹证实目的蛋白带有免疫原性,目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者的灵敏度和特异度分别为65%和87%。结论:采用原核表达系统成功构建并表达了GST/BFRF3融合蛋白,其在鼻咽癌血清筛选中具有诊断价值。
- 胡波陈忠城王东宁李林
- 关键词：鼻咽肿瘤原核表达
- 乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用被引量：5
- 2004年
- 目的 构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果 酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论 毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg。
- 洪国强吴宗华胡波朱振宇李林
- 关键词：乙型肝炎病毒S基因毕赤酵母乙型肝炎病毒表面抗体
- 分泌尿鸟苷素工程菌的构建及其对结肠上皮细胞cGMP合成的影响
- 2019年
- 目的构建能够分泌尿鸟苷素的婴儿双歧杆菌,观察其对结肠上皮细胞环磷酸鸟苷(cGMP)合成的影响,为用尿鸟苷素基因重组双歧杆菌治疗便秘做前期准备。方法以质粒pBV220为模板,构建表达质粒pBV220-ESS-uroguanylin。重组质粒pBV220-ESS-uroguanylin电击转化婴儿双歧杆菌。用ELISA检测重组婴儿双歧杆菌中尿鸟苷素的表达情况及其上调结肠癌细胞T84内cGMP合成的能力。结果pBV220-ESS-uroguanylin阳性克隆提取质粒并进行基因测序,证实载体构建成功,测序正确无突变。ELISA检测证实重组婴儿双歧杆菌成功表达尿鸟苷素,具有上调结肠癌细胞T84内cGMP合成的能力。结论重组双歧杆菌构建成功并能分泌尿鸟苷素,提高结肠上皮细胞cGMP的合成。
- 李林魏振宇尉秀清
- 关键词：双歧杆菌环磷酸鸟苷
- 全自动微生物分离培养系统Robobact System的临床应用及评价
- 目的评价全自动微生物分离培养系统Robobact System临床应用情况方法用Robobact System对756份临床标本进行分离培养,针对不同培养目的选用不同种类培养基, 对其阳性检出时间,阳性率及阳性细菌检出种...
- 席云陈月燕李林文博
- 关键词：细菌
- 文献传递
- EB病毒BALF4基因在大肠杆菌中的表达纯化与鉴定
- 2013年
- 目的采用大肠杆菌表达EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)壳抗原BALF4(S)重组蛋白并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法以EBV DNA为模版,采用PCR法扩增目的基因片段BALF4(S),与原核表达载体PGEX-5X-1连接,构建PGEX-5X-BALF4(S)工程菌株,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST/BALF4(S)重组融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE、免疫印迹法鉴定后,纯化目的蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群BALF4(S)-IgA抗体。结果在大肠杆菌中成功地表达了GST/BALF4(S)重组融合蛋白,相对分子质量为63000,免疫印迹证实目的带有免疫原性,目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照者的灵敏度和特异度分别为78%和90%。结论本文采用大肠杆菌系统成功表达了GST/BALF4(S)重组融合蛋白,对重组抗原在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值进行了初步评估,获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的PGEX-5X-BALF4(S)工程菌株。
- 胡波陈忠城王东宁李林
- 关键词：鼻咽癌蛋白表达
- Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪在未成熟粒细胞中的分析和应用被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨SysmexXE-5000全自动血细胞分析仪对血常规中未成熟粒细胞百分比的应用,为现代化仪器的推广应用提供临床实验室依据。方法:将50份血常规标本的SysmexXE-5000全自动血细胞分析仪检测结果与瑞士染色显微镜目测法的结果进行相关性分析。结果:SysmexXE-5000全自动血细胞分析仪未成熟粒细胞百分比计数的批内精密度、批间精密度、准确度均在允许范围内,仪器对未成熟粒细胞百分比的结果与显微镜目测结果之间有显著正相关。结论:SysmexXE-5000全自动血细胞分析仪对血常规未成熟粒细胞百分比计数的准确性高,重复性好,可作为对血常规未成熟粒细胞百分比进行快速准确计数的筛选方法,为临床提高方便。
- 黄建华翁羽飞姚志成陈江玲李林
- 关键词：血细胞分析仪手工镜检
- 口服细胞穿膜肽Penetratin对小鼠肝脏、肾脏和肠道的急性毒性反应研究
- 2020年
- 目的研究口服细胞穿膜肽Penetratin对小鼠肝脏、肾脏以及肠道的急性毒性反应,评估其安全性。方法将24只Balb/c雄性小鼠随机分为正常对照组、低剂量组和高剂量组3组,每组各8只小鼠。各组小鼠均予正常饮食,其中正常对照组予200μl生理盐水灌胃,低剂量组、高剂量组分别予200μl由生理盐水配制的浓度为5、100μmol/L的Penetratin灌胃。各组小鼠予不同处理24 h后收集标本,采集标本为小鼠的血液、肝脏、肾脏以及肠道组织,用生化法检测各组小鼠血清中ALT、AST、尿素氮、肌酐水平,用ELISA检测血清中二胺氧化酶(DAO)及脂多糖的含量,用实时荧光定量PCR方法检测肝脏、肾脏及肠道炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的mRNA表达水平,用HE染色评估肝脏、肾脏以及肠道病理损伤情况,TUNEL法检测肝脏、肾脏以及肠道细胞凋亡情况。结果各组小鼠的ALT、AST、尿素氮、肌酐水平、DAO及脂多糖含量、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);与正常对照组对比,低剂量组和高剂量组各脏器均未见明显损伤及炎性细胞浸润,细胞凋亡无明显增多。结论口服细胞穿膜肽Penetratin对小鼠的肝脏、肾脏以及肠道均无明显急性毒性反应,作为肠道促吸收剂安全性较好。
- 魏振宇李林尉秀清
- 杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨被引量：5
- 2005年
- 目的:构建编码杀菌/通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法:采用RT PCR技术,从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因,DNA序列分析鉴定;将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD/Thio TOPO中,再次测序鉴定;通过在大肠杆菌中以L 阿拉伯糖进行诱导表达,然后以SDS PAGE、Westernblot对表达的重组蛋白进行分析。重组蛋白经初步纯化处理后,进行生物学活性检测。结果:RT PCR扩增出一个835bp的DNA片段,DNA测序表明为所需目的基因。限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明,BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD/Thio TOPO中,SDS PAGE和Westerblot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段。对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性。结论:成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达。
- 周宇麒张天托胡波李林黄静
- 关键词：杀菌作用基因克隆基因表达中性粒细胞
- 大黄蛰虫丸对慢性肝病患者核素肝细胞功能显像定量分析的影响
- 大黄蜇虫丸原为东汉名医张仲景《金匮要略》中治疗妇科“干血痨”的著名方剂,八十年代以来,国内不断有使用该药治疗慢乙肝肝硬化的临床和实验研究报道。为了进一步探讨该药对慢性病毒性肝硬化患者肝细胞代谢功能的影响,我们在常规观察肝...
- 潘志恒程木华李林王拥泽许杰华陈艺
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒核心基因在毕赤酵母中的表达及表达产物用于乙型肝炎病毒核心抗体检测的评价
- 如何改善抗原质量,提高HBcAb检测的准确性,是医学检验工作者面临的严峻课题,也是我国目前肝脏疾病免疫诊断规范化发展的主要任务之一.本研究采用毕赤酵母表达系统,构建表达HBcAg的工程菌株,探讨重组抗原在HBcAb免疫检...
- 梁敏坚洪国强李朝霞胡波许珏李林
- 关键词：乙型肝炎病毒核心基因毕赤酵母抗体检测工程菌株
- 文献传递
