朱绍春
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫29000膜外蛋白的表达和纯化及功能初步鉴定被引量：3
- 2008年
- 随着血吸虫病防治工作的不断深入及血防形势的改变，血吸虫病流行的特点对本病的诊断提出了更高的要求。因表膜蛋白更易接触机体的免疫系统，刺激机体产生相对应的抗体，大多研究都支持虫体的表膜蛋白较其他蛋白有较好的诊断价值。本课题组将日本血吸虫（Schistosoma japouicam，sj）中国大陆株29000表膜蛋白的膜外区基因体外重组并表达，纯化后初步鉴定其免疫原性和免疫反应性，
- 任翠平刘淼赵志荣雷黎朱绍春王晓楠沈际佳
- 关键词：日本血吸虫膜外区纯化血吸虫病中国大陆株
- 紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库被引量：3
- 2006年
- 目的筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子,分析其主要表位,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果经三轮筛选,共获20个阳性克隆,序列同源性分析表明其中有5种已知基因(GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶),6种未知基因,软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子,可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。
- 刘淼朱绍春雷黎赵志荣沈际佳
- 关键词：日本血吸虫致弱尾蚴免疫筛选表位分析
- 日本血吸虫童虫文库免疫筛选及其高丰度表达膜蛋白初步鉴定被引量：8
- 2006年
- 目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱导表达,最后用Westernblotting鉴定。结果获得34个阳性克隆,选择其中24个进行测序,其中13个是日本血吸虫相对分子质量(Mr)为22600膜相关蛋白(Sj22.6)基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增,并被亚克隆入pET28a中进行表达。WesternBlotting结果显示,菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。结论Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出,融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。
- 朱绍春赵志荣雷黎张林杰沈际佳
- 关键词：日本血吸虫童虫CDNA文库免疫筛选
- 日本血吸虫Sj-Ts4样蛋白基因的克隆、表达和初步鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的为了寻找血吸虫病新的免疫学诊断候选分子,在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫Sj-Ts4样融合蛋白。方法提取日本血吸虫成虫RNA,设计引物,用RT-PCR法扩增出日本血吸虫Sj-Ts4样蛋白基因编码序列,T载体连接,将其亚克隆入PGEX-5X-1载体中,经酶切、测序证实正确后,转化入大肠杆菌DH5α并用IPTG对该重组菌诱导表达,SDS-PAGE和Western blot方法观察表达结果。结果RT-PCR法扩增出一条大小约为870bp的片段,表达质粒PGEX-5X-1-SjTs4经双酶切和以该重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段,诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约58ku大小的GST融合蛋白条带,并可与抗GST特异性抗体反应。结论本实验成功地克隆了日本血吸虫Sj-Ts4样抗原的编码基因,并在原核细胞中进行表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础。
- 潘丽红朱绍春任翠平王晓楠赵志荣刘淼汪学龙沈际佳
- 日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、表达与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。结果PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%。SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1∶32000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明,纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。结论日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性。
- 王阳阳刘淼朱绍春任翠平沈际佳
- 关键词：日本血吸虫膜蛋白基因抗原性
- 血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库被引量：2
- 2007年
- 目的 分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱。为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法 采集血吸虫流行病区感染抗性人血清．免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库。对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析，并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果 共筛选出29个持续阳性克隆，对其进行测序，获得25个基因，包括5种已知基因（其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1吨1个和线粒体编码区1个）和5个未知基因。软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论 获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子．其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。
- 任翠平王晓楠雷黎朱绍春赵志荣刘淼沈际佳
- 关键词：血吸虫基因文库免疫学
- 重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。
- 魏文杰陈飞虎沈际佳廖法学朱绍春
- 关键词：抑制素类
- 日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的获得、表达及初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用简并引物PCR和5’端、3’端锚定PCR,扩增得到日本血吸虫Tsunagi基因的完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western Blotting对表达蛋白进行初步鉴定。结果获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的完整ORF,序列全长为531bp,编码177个氨基酸。构建的重组质粒pET28a-SjTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达;以重组蛋白免疫小鼠获得效价为1∶51 200的多克隆抗体,Western Blotting证实抗体可特异性识别目的蛋白。结论成功获得日本血吸虫Tsu-nagi蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了Tsunagi基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。
- 王晓楠雷黎赵志荣朱绍春刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫克隆基因表达多克隆抗体
- 日本血吸虫Mago nashi基因RNA干扰系统的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。
- 赵志荣刘淼雷黎朱绍春汪学龙沈际佳
- 关键词：日本血吸虫SIRNASHRNA
- 人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的利用噬菌体抗体展示技术构建人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库并进行初步鉴定。方法RT-PCR从对血吸虫感染有一定抗性成年人外周血淋巴细胞中扩增出人IgG轻链和重链Fd段基因片段,将其克隆入PComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库,并用限制性内切酶酶切、序列分析、DOT-BLOT以及SDS-PAGE等方法对噬菌体抗体库进行初步鉴定。结果噬菌体抗体库的滴度为6.2ⅹ1011/L,库容量为1.2ⅹ107,酶切鉴定结果显示噬菌体抗体库轻重链重组率达到66.6%,测序结果表明克隆入PComb3的是人免疫球蛋白轻链和重链基因,DOT-BLOT实验证明该抗体库表达了人源性的抗体,而SDS-PAGE证实了免疫球蛋白Fab段的可溶性表达。结论成功地构建了人源性抗日本血吸虫Fab段噬菌体抗体库,为筛选人源性抗日本血吸虫的抗体、研究这些抗体的特性和功能奠定了基础。
- 雷黎赵志荣朱绍春刘淼卞茂红张林杰沈际佳
- 关键词：日本血吸虫人源性噬菌体抗体库
