朱彩珠
- 作品数：34 被引量：162H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技基础条件平台建设计划甘肃省科技重大专项计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- O型FMDVP1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达
- 2010年
- 为了构建O型FMDVP1-2A基因与猪IFN-γ基因共表达质粒并在BHK-21细胞中进行表达,本研究利用聚合酶链式反应(PCR)从阳性质粒pGEM-P12A克隆到P1-2A基因,将扩增产物纯化、双酶切后连接到pBudCE-IFN载体,构建重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A。重组表达质粒鉴定后,在脂质体介导下转染BHK-21细胞,用RT-PCR和直接免疫荧光试验分别检测P1-2A和IFN-γ在BHK-21细胞中的表达。RT-PCR检测显示,重组表达质粒转染细胞后P1-2A和IFN-γ基因成功转录出mRNA;免疫荧光试验表明目的基因在BHK-21细胞中获得了表达。结果证明,本研究成功构建了重组质粒pBudCE-IFN-P1-2A并在体外进行了表达,这为研制抗FMDVDNA疫苗和IFN-γ的佐剂作用奠定了坚实基础。
- 吴国华张强颜新敏侯俊玲赵志荀崔力凡李健朱海霞朱彩珠
- 关键词：FMDVIFN-Γ基因共表达
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达被引量：10
- 2003年
- 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。
- 尤永进朱彩珠葛艳陈波张强饶忠徐泉兴卢永干
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因基因克隆口蹄疫RT-PCR
- 应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒被引量：17
- 1998年
- 建立了一种适用于检测动物（猪、牛、羊）组织（肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮）和牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫（ＦＭＤ）病毒核酸（ＲＮＡ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。引物对是人工合成的两条２０ｍｅｒ寡核苷酸片段，它们的序列相应于ＦＭＤ病毒结构蛋白ＶＰ１基因后２／３区段，在４个血清型之间基本一致（保守）。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ具有良好的特异性，属该４个血清型的各个毒株都获得了预计长度的ＤＮＡ片段；而相关的小ＲＮＡ病毒科的猪水泡病（ＳＶＤ）和柯赛奇Ｂ５（Ｃｏｘ．Ｂ５）病毒（特异性对照），及未感染的细胞培养物和动物组织（空白对照）都是阴性。与常规检测方法相比，该ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度提高６－１２倍，最高可检测２０ＴＣＩＤ５０（细胞毒）或０．１６～０．３２ＬＤ５０（组织毒）的病毒量，二次扩增还可提高检测灵敏度１００倍。因为直接利用组织样品，检测试验快速简便，可在２４小时内获得结果。应用该方法已检测了２３２份组织样品和５８份Ｏ－Ｐ液样品。
- 朱彩珠卢永干邱孝高赵启祖谢庆阁张维德员美蓉杨福荣张强
- 关键词：RT-PCRFMDV动物组织
- 绵羊CD58基因的克隆与原核表达被引量：4
- 2010年
- 通过对猪、绵羊CD58mRNA序列比对,设计出绵羊CD58的特异性引物,应用反转录PCR技术从绵羊淋巴细胞mRNA中扩增出绵羊CD58基因,将该基因克隆到原核表达载体pGEX4-1中进行原核表达.结果表明:克隆出的绵羊CD58cDNA长807bp,其中包含了开放式阅读框;该基因在大肠杆菌中进行表达,SDS-PAGE电泳在53ku处能观察到特异表达的融合蛋白,产物通过Western-blot检测证实,可以被CD58单克隆抗体识别.
- 芦晓立颜新敏吴国华叶奕优李健朱海霞王建科赵志荀崔力凡朱彩珠张强
- 关键词：绵羊基因克隆原核表达
- 一种猪水疱病检测试剂盒
- 本发明公开一种用于猪水疱病检测的试剂盒。本发明的猪水疱病检测试剂盒中包括两对引物，分别是上游外引物SEQ№1，下游外引物SEQ№2，上游内引物SEQ№3和下游内引物SEQ№4。本发明与现有技术相比具有检测时不需要任何特殊...
- 张强朱海霞吴国华赵志荀颜新敏李健芦晓立于少雄卢昌王曼朱彩珠
- 文献传递
- 猪口蹄疫0型基因工程疫苗
- 郑兆鑫徐泉兴盛祖恬郭杰炎卢永干严维耀尤永进赵洪兴刘明秋毛昌群何永强朱彩珠陈谊江培李光金张强杜青云葛艳何秉耀陈维灶金建平周智爱张青张震宇易建中赵凯
- 该项目采用基因工程技术将病毒的相关抗原表位，通过化学合成的方法将其转移到大肠杆菌细胞中，经过大规模发酵培养工程菌，提取具有高度免疫活性的蛋白抗原，然后用此抗原制备成基因工程疫苗。由于该疫苗是通过基因重组技术产生，它与传统...
- 关键词：
- 关键词：口蹄疫病毒基因工程疫苗抗原表位
- 抗O型和A型口蹄疫病毒双价多肽疫苗及其制备方法
- 本发明是一种抗O型和A型口蹄疫病毒的二价多肽疫苗，用化学合成法合成编码O型口蹄疫病毒VP1蛋白中21ヘ40、141ヘ160位氨基酸的小肽基因，将其组成串联结构；编码A型口蹄疫病毒VP1蛋白21ヘ40、138ヘ160位氨基...
- 郑兆鑫严维耀易建中刘明秋朱彩珠陈维灶盛祖恬
- 文献传递
- 抗O型和A型口蹄疫病毒双价多肽疫苗及其制备方法
- 本发明是一种抗O型和A型口蹄疫病毒的二价多肽疫苗，用化学合成法合成编码O型口蹄疫病毒VP1蛋白中21～40、141～160位氨基酸的小肽基因，将其组成串联结构；编码A型口蹄疫病毒VP1蛋白21～40、138～160位氨基...
- 郑兆鑫严维耀易建中刘明秋朱彩珠陈维灶盛祖恬
- 文献传递
- 山羊痘病毒感染绵羊的诊断及其p32基因的分子分析被引量：7
- 2011年
- 采用细胞培养方法从发生羊痘的绵羊肺组织中分离到1株山羊痘病毒GPV/GSgulang/09,对分离株的p32基因进行了PCR-RFLP和序列比对分析。结果显示,GPV/GSgulang/09株p32基因的扩增产物被HinfⅠ酶切后出现山羊痘病毒(GPV)特征性的2条带;p32基因序列第166～168位缺失绵羊痘病毒(SPV)中编码天冬氨酸的3个碱基,与GenBank中其他SPV毒株的同源性为98.1%～98.3%,与GPV毒株的同源性达99.2%～99.9%,且在系统发生树上与GPV位于同一进化分支。结果表明,这是一起GPV感染绵羊的临床病例,为我国羊痘的流行病学研究提供了新的资料。
- 颜新敏吴国华李健朱海霞赵志荀崔力凡朱彩珠张强
- 关键词：山羊痘病毒绵羊P32基因
- 表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选被引量：1
- 2010年
- 为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株。
- 王建科张云德张强吴国华颜新敏朱海霞李健邵长春朱彩珠吴磊
- 关键词：口蹄疫病毒羊痘病毒
