曾令海
- 作品数:8 被引量:22H指数:3
- 供职机构:重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金:重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 5-碘代杀结核菌素对HT-29细胞DLC-1基因的去甲基化作用被引量:1
- 2015年
- 目的探讨5-碘代杀结核菌素(5-iodotubercidin,ITU)对人结肠癌细胞HT-29株增殖凋亡及DLC-1基因表达的影响。方法不同浓度(0.1、0.5、1、2、4、6、8、10μmol/L)ITU作用于HT-29细胞48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HT-29细胞的增殖活性;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,流式细胞仪检测其凋亡率;ITU(0、2、4、6μmol/L)作用于HT-29细胞48 h,亚硫酸氢盐克隆测序法(BSP)检测DLC-1基因启动子区Cp G岛甲基化情况;同上的处理细胞的方法,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)mRNA的表达;Western blot检测DLC-1基因蛋白表达。结果 1ITU可明显抑制HT-29细胞活力,在一定范围内随着药物浓度增加抑制细胞活力的作用越强(P<0.05),以6μmol/L组对HT-29细胞影响最大,IC50=(5.92±0.62)μmol/L。2分别以0、2、4、6μmol/L ITU作用于HT-29细胞后,流式细胞仪检测各组凋亡率,分别为(9.56±2.21)%、(22.18±3.16)%、(34.23±3.16)%、(40.50±3.16)%,表明随着ITU浓度增加,对HT-29细胞的促凋亡作用越强。3经0、2、4、6μmol/L ITU处理后DLC-1基因启动子区Cp G岛甲基化率分别为91.67%、75.00%、61.67%、43.33%,表明ITU可以引起DLC-1基因启动子区甲基化程度降低。4在HT-29细胞中可检测到少量DLC-1 mRNA和蛋白的表达;相同条件经0、2、4、6μmol/L ITU处理细胞后检测显示DLC-1基因mRNA和蛋白的表达增加,并随浓度增长,mRNA及蛋白表达随之增加。结论 ITU可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,促进HT-29细胞凋亡,而这种抑制增殖作用可能和ITU降低DLC-1基因启动子区甲基化水平而诱导DLC-1基因上调有关。
- 张灵敏王亚旭谢凯曾令海李权
- 关键词:甲基化结直肠肿瘤
- 腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制被引量:3
- 2015年
- 目的探讨腺苷干预人结直肠癌SW480细胞RECK基因甲基化及其机制。方法分别用0、3.0 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,亚硫酸氢盐测序法(BSP)检测RECK基因启动子区Cp G岛甲基化情况;逆转录PCR、Western blot、流式细胞仪检测腺苷处理前后RECK基因mRNA和蛋白的表达、甲基转移酶(methyltransferases DNMT1,DNMT3a)蛋白表达及细胞凋亡的变化。结果腺苷干预后RECK基因甲基化程度明显低于对照组[(49.14±2.38)%vs(74.84±2.38)%,P<0.01];腺苷干预后RECK基因mRNA转录及蛋白表达、细胞凋亡均明显高于对照组[0.335 3±0.350 2 vs 0.080 0±0.003 6,0.603 0±0.017 8 vs 0.090 0±0.003 0;(27.90±2.32)%vs(5.09±0.30)%,P<0.01];甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a)蛋白表达均明显低于对照组(0.141 3±0.002 1 vs 0.645 0±0.009 2,0.130 0±0.004 6 vs 0.526 7±0.009 5,P<0.01)。结论腺苷通过抑制甲基转移酶的活性,降低RECK基因DNA启动子区域的甲基化水平,使RECK基因mRNA及蛋白表达水平增加,促使SW480细胞凋亡。
- 李权王亚旭申海鹰谢凯张灵敏曾令海
- 关键词:RECK基因腺苷甲基转移酶
- 腺苷对人结直肠癌细胞hMLH1基因甲基化的影响被引量:3
- 2014年
- 目的 探讨腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响.方法 分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后,采用亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况、反转录PCR法检测hMLH1 mRNA的表达、Western印迹法检测hMLH1蛋白的表达、采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐(MTr)法检测各组细胞活力.结果 腺苷干预后1.5、3.0、4.5 mmol/L各组甲基化程度分别为65%±4%、45%±11%和16%±4%,均明显低于对照组(80%±4%,均P<0.01);hMLH1 mRNA转录水平、蛋白表达水平、细胞凋亡水平均明显高于对照组(0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019比0.079±0.010,0.353±0.016、0.654±0.018和0.854 ±0.014比0.126±0.016,11.9%±0.6%、20.0%±1.8%和35.8%±1.8%比3.9%±1.4%,均P<0.01).MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后,各组细胞活力均明显低于对照组(均P<0.05),有一定的时间-剂量依赖性.结论 腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态,使hMLH1表达增加,抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡.
- 谢凯王亚旭申海鹰张灵敏曾令海舒宁波李权
- 关键词:结直肠肿瘤腺苷甲基化
- 外科临床医学专业学位研究生教育现状分析被引量:3
- 2014年
- 专业学位是相对于学术性学位而言的学位类型,其目的是培养具有扎实的理论基础并适应实际工作需要的应用型专业人才。外科专业学位研究生是以特定外科专业实践为导向,重视实践和应用,接受正规、高水平的临床训练。自1998年招收临床医学专业学位研究生,并随之其培养规模的不断扩大,如何在当前复杂的医疗环境中保证专业学位研究生培养质量,培养出具有较强临床实践能力及较高的临床科研水平的临床医学专业学位研究生,是目前亟待解决的难题。
- 曾令海谢凯王亚旭
- 关键词:导师外科专业学位
- ERCC1 BRCA1 TYMS的mRNA表达水平和UGT1A1多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义被引量:6
- 2014年
- 目的探讨结直肠癌肿瘤组织的切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)和胸苷酸合成酶基因(TYMS)的信使RNA(mRNA)表达水平及尿苷葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)多态性检测在结直肠癌患者个体化化疗中的临床意义。方法选取2010年10月至2011年10月收治的进展期结直肠癌患者230例,分为个体化化疗组(41例)和常规化疗组(189例),分别进行个体化化疗和常规化疗。个体化化疗组通过检测患者ERCC1、BRCA1和TYMS基因中的mRNA表达水平以及UGT1A1基因多态性,指导患者选用敏感且毒性反应小的化疗药物,比较两组患者化疗后的无进展生存期(PFS)、无病生存率(DFS)和毒性反应发生率。结果个体化化疗组患者中位PFS为(26.00±1.60)个月,常规化疗组患者中位PFS为(25.00±0.27)个月,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。两组患者化疗后1、2年DFS比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。个体化化疗组患者血液毒性、腹泻、肝功能损害和血尿素氮升高发生率较常规化疗组低,差异均有统计学意义(P<0.05);而神经毒性、心脏毒性和血肌酐升高发生率与常规化疗组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论以上基因检测使进展期结直肠癌患者在临床个体化化疗中获益,PFS延长,部分毒性反应发生率降低。
- 曾令海王亚旭谢凯张灵敏
- 关键词:个体化化疗
- 5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及机制被引量:3
- 2013年
- 目的观察5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza—CdR)对人结肠癌细胞(SW480)株增殖凋亡的影响并探讨其机制。方法以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza—CdR作用于SW480细胞72h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测Disable一2(DAB2)胞嘧啶一磷酸一鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化状态;逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)检测DAB2mRNA的表达;激光共聚焦显微镜检测DAB2蛋白的表达。结果(1)5-Aza.CdR对SW480细胞生长有抑制作用,用药处理后细胞凋亡率分别为(12.89±0.59)%、(16.74±1.80)%、(33.02±3.30)%,(P〈0.01);(2)5-Aza—CdR处理前甲基化程度为89.09%,处理后依次为70.00%、55.45%、10.91%,肩动子甲基化水平明显降低(P〈0.01);(3)5-Aza—CdR处理前RT—PCR可以少量扩增出DAB2mRNA特异性条带(平均灰度比值为0.266±0.013),5-Aza—CdR处理后可见DAB2mRNA转录水平增加,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关,平均灰度比值2.5p.mol/L组为0.363±0.009,5.μmol/L组为0.490±0.021;10.0Ixmol/L组为0.753±0.028(P〈0.01);(4)5-Aza—CdR处理前有少量DAB2蛋白表达于细胞质及细胞核中(荧光强度为:94.50±13.39),予以5-Aza—CdR处理之后DAB2的表达量增加(荧光强度为:123.75±15.19,P〈0.01)。结论5-Aza—CdR能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza.CdR能逆转SW480细胞DAB2启动子CpG岛的异常甲基化.诱导mRNA转录和蛋白的表诀.
- 舒宁波王亚旭曾令海谢凯张灵敏毕德利
- 关键词:甲基化脱噬作用
- ERCC1、BRCA1、TYMSmRNA表达水平及UGT1A1多态性在进展期结直肠癌个体化化疗中的临床意义
- 目的: 结直肠癌肿瘤组织的ERCC1、BRCA1和TYMS基因的mRNA表达水平和UGT1A1基因多态性,反应结直肠癌患者化疗药物的敏感性和不良反应风险,特异性基因检测可能对进展期结直肠癌患者选择个体化化疗有益。 方...
- 曾令海
- 关键词:个体化化疗
- SFRP5在T2DM患者脂肪、肌肉中的表达及其与胰岛素抵抗的关系被引量:4
- 2014年
- 目的 探讨正常人及初诊2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者脂肪、肌肉组织中分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)的差异性表达及其与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的关系.方法 按照1999年WHO的关于糖尿病的诊断标准选取初诊T2DM患者12例,及年龄、性别相匹配的正常人12例.所有研究对象均来自外科腹部择期手术患者,在同样手术条件下获取腹部大网膜脂肪组织和肌肉组织.常规测量体重、身高、腰围、臀围、血压、胰岛素(Fins)、血糖、糖化血红蛋白(HbA1C)、血脂等,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(HOMA-β),用QRT-PCR方法和Western印迹方法检测SFRP5在不同人群中的差异性表达及其与IR的关系.结果 ①T2DM组与正常对照组相比,T2DM组收缩压(SBP),甘油三酯(TG),空腹血糖(FPG),糖负荷后2h血糖(2h PG),Fins,稳态模型评价HOMA-IR,HbA1C均升高.②T2DM组脂肪组织中SFRP5 mRNA和蛋白表达高于正常对照组,差异有统计学意义(2.7倍,5.5倍,均P<0.01),但在肌肉组织中差异无统计学意义.③脂肪组织SFRP5 mRNA和蛋白质高于肌肉组织.结论 脂肪组织SFRP5 mRNA和蛋白质表达高于肌肉组织提示脂肪组织可能是SFRP5的主要来源.T2DM组脂肪组织中SFRP5 mRNA和蛋白表达高于正常对照组提示SFRP5可能与IR严重程度相关.
- 曾令海胡文静杨刚毅李伶王亚旭
- 关键词:胰岛素抵抗