方炳雄
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 供职机构：广东医学院衰老研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省高等学校自然科学研究重点项目东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Nar1基因酵母表达载体的构建及表达鉴定
- 2014年
- 目的:构建Nar1基因的酵母表达载体,并纯化His-Nar1融合蛋白,为进一步研究Nar1的相互作用蛋白及其功能奠定基础。方法:通过PCR扩增Nar1全长基因;通过定向克隆的方法将Nar1片段与载体pYES2/NTC连接;通过乙酸锂转化法把重组质粒转化入野生型酵母菌株INVSc1;再通过免疫沉淀的方法纯化His-Nar1融合蛋白;通过Western blot检测靶蛋白。结果:DNA测序验证穿梭表达质粒pYES2/NTC-Nar1构建成功,Western blot检测到融合蛋白His-Nar1的表达。结论:成功构建Nar1酵母过表达载体,并且可以有效表达融合蛋白His-Nar1。
- 赵炜方炳雄刘依娜牛宇杰袁源刘新光
- 关键词：酵母
- 酿酒酵母寿命的研究方法及进展被引量：9
- 2013年
- 衰老研究是近来国内外的一个研究热点，酿酒酵母（Saccharomy cescerevisiae）作为低等单细胞真核生物，其寿命有复制型寿命和时序型寿命之分，相对哺乳动物来说可以便捷地进行寿命测定，使得酿酒酵母成为寿命和衰老研究的模式生物。以基因同源重组技术为基础构建酿酒酵母突变菌株，检测酵母细胞的复制型寿命和时序型寿命是目前寿命研究中的经典方法。本文着重介绍酵母突变菌株的构建方法，包括单基因缺失、双基因缺失和基因过表达；酵母的复制型寿命、时序型寿命的检测方法；酵母寿命调节机制的研究进展。
- 方炳雄赵炜崔红晶刘新光
- 关键词：酿酒酵母衰老基因突变
- 3种常见核酸染料的安全性和灵敏度研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨Gold View、溴化乙锭(EB)、SYBR GreenⅠ3种实验室常用核酸染料的安全性与灵敏度,筛选出具有较高安全性和灵敏度的核酸染料。方法采用正常人胚肾细胞为研究对象,对比研究Gold View、EB、SYBR GreenⅠ对细胞增殖和细胞周期的影响;分别使用3种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色,比较其灵敏度。结果 SYBR GreenⅠ对HEK-293细胞的周期与增殖影响最小,Gold View的影响最大。SYBR GreenⅠ和Gold View对DNA染色的灵敏度相当,略低于EB。结论 SYBR GreenⅠ具有较高安全性和较高的灵敏度。
- 赵炜方炳雄牛宇杰赵彤何金勇刘新光
- 关键词：GOLDVIEW溴化乙锭安全性灵敏度
- PCR重叠延伸法结合分段克隆技术构建高GC含量基因突变载体被引量：3
- 2012年
- 目的:构建人类KAP-1基因定点突变载体,为研究该基因的功能奠定基础。方法:综合运用PCR重叠延伸法和分段定向克隆技术。结果:DNA测序结果表明定点突变载体构建成功。结论:成功构建高GC含量(局部高达80.50%),全长为2 500bp的人类KAP-1基因定点突变载体pCMV6-En-try-KAP-1,为全面深入研究KAP-1基因的功能奠定了基础。
- 赵炜崔红晶方炳雄袁源刘玢刘宝华周中军刘新光
- 关键词：PCR高GC含量
