徐甜 作品数:6 被引量:7 H指数:2 供职机构: 湖南师范大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 湖南省教育厅科研基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达 2008年 从小鼠(C57BL/6)10.5 d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为ShhN端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础. 刘如石 任道龙 徐甜 韩梅 胡翔 肖鲜 张健关键词:SHH 基因克隆 原核表达 毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化(英文) 被引量:2 2008年 乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁,而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段,乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后,对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法,探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明,FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基,溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响,甲醇诱导最佳终浓度为1%(V/V),发酵的最适pH值为5.4~6.0。发酵罐放大培养后,ELISA和SDS—PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达,最终菌体生物量达到310 OD600,表达量达到27mg/L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22nm类病毒颗粒,为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。 刘如石 林亲录 孙意 邱义兰 徐甜 丁海 郭向荣关键词:发酵参数 毕赤酵母 重组乙肝表面抗原 转录因子AP-2β与SLP-2的蛋白相互作用 被引量:1 2010年 AP-2β是转录因子AP-2家族中的重要一员.AP-2是一个与哺乳动物的发育、细胞生长、分化、凋亡和肿瘤发生都有密切联系的重要的转录因子家族.最近的研究表明,AP-2能通过与其他蛋白的相互作用来调控AP-2下游基因的转录活性.采用免疫共沉淀结合质谱鉴定的方法筛选与AP-2β相互作用的蛋白.结果筛选到Stomatin like protein2(SLP-2)蛋白可能与AP-2β相互作用.免疫共沉淀实验证实外源过表达和内源的SLP-2蛋白都能与AP-2β蛋白相互作用.而且,细胞免疫荧光实验发现外源表达的Myc-AP-2β蛋白与内源的SLP-2蛋白在MCF-7细胞的胞质中有共定位.此外,免疫印记实验结果表明过表达SLP-2能上调AP-2β的蛋白水平,这就表明SLP-2与AP-2β相互作用后,SLP-2可能使AP-2β蛋白更稳定.这些研究结果为进一步研究这两个基因的功能提供了新的切入点. 王义军 徐甜 胡翔 向双林 周建林 张健 韩梅关键词:相互作用蛋白 SLP-2 免疫共沉淀 人锌指蛋白ZNF256基因克隆、表达谱分析及其功能研究 2009年 人ZNF256基因属于C2H2型锌指蛋白家族。该家族里面的基因大部分为转录因子,它们能够促进细胞分化、参与胚胎及心脏的发育,与精子的形成有关,并且与肿瘤相关。本文采用实时定量PCR方法分析了ZNF256基因在各个组织和不同细胞系中的表达情况,亚细胞定位发现ZNF256定位于细胞核,萤光素酶实验分析确定ZNF256可以抑制AP1的转录活性。这些研究结果为进一步研究ZNF256基因在疾病发生中的作用奠定了一定的基础。 任道龙 胡兴旺 徐甜 肖湘文 贺爱兰 颜峰 张健 刘如石关键词:表达谱 荧光实时定量PCR 转录活性 SLP-2基因在乳腺癌细胞系中的表达及对MCF-7细胞增殖的影响 被引量:3 2014年 人的SLP-2基因在乳腺癌组织的高表达与病人的存活率相关.为了研究SLP-2在乳腺癌中的功能,应用免疫印记的方法检测SLP-2在不同乳腺癌细胞中的蛋白表达水平,发现随着细胞癌化程度的增强其表达也增强.成功构建p CMV-Myc-SLP-2重组质粒,证明了其在MCF-7细胞的表达,MTT实验结果表明SiRNA转染乳腺癌细胞MCF-7可以抑制细胞增殖,同时发现SLP-2在乳腺癌细胞系中表达量与HER2/nue呈负相关.这些结果为深入研究乳腺癌的发生和发展奠定了基础. 谢贵娥 黄招琴 李莉 徐甜 张航 韩梅 向双林关键词:乳腺癌 SLP-2 免疫印记 细胞增殖 SLP-2荧光表达载体的构建及其在乳腺癌细胞MCF-7中的表达与定位 被引量:1 2010年 人的SLP-2基因是一个新的肿瘤相关基因,它在多个癌组织里高表达,如食管鳞状细胞癌组织和肺癌组织。其中在乳腺癌组织的高表达和病人的存活率负相关,这说明该基因很可能在乳腺癌的发生中发挥重要作用。为了研究SLP-2基因在肿瘤里的功能,将人类SLP-2基因全长编码区定向连入pEGFP-C3质粒,使SLP-2蛋白可以与绿色荧光蛋白在乳腺癌细胞MCF-7内融合表达。而且细胞荧光实验发现SLP-2蛋白主要定位在MCF-7细胞的胞质内,这为进一步研究SLP-2基因在乳腺癌中的功能奠定了实验基础。 王义军 吴文韬 徐甜 向双林 张健 韩梅关键词:SLP-2 重组质粒 融合蛋白表达 细胞定位